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Butirato e propionato para melhorar o

crescimento desempenho de Litopenaeus


vannamei

Discentes: Amanda Alves


Felipe Candil
Leopoldo Del Neri
Docente: Prof. Dra.Giovana

Introduo
Litopenaeus vannamei conhecido pelo nome
comercial de camaro-de-patas-brancas ou
camaro-branco-do-pacfico;

uma
variedade
de crustceo da
subordem Dendrobranchiata originrio
do Pacfico oriental sendo a maior espcie de
camaro de cativeiro.

As doenas esto entre os principais problemas


no desenvolvimento da aquicultura;
O surgimento de doenas causadas por novas
enterobactrias, tais como, sndrome de necrose
aguda hepatopancretica na sia est causando
altas mortalidades em cultivos comerciais e,
consequentemente, grandes perdas econmicas
na carcinicultura.

Porm o uso errneo e prescrio inadequada de


antibiticos, tem selecionado organismos mais
resistentes, como tambm, a proibio do seu
uso na produo de animais, fizeram a procura
por aditivos alimentares aumentar;

Os estudos sobre a suplementao de cido


orgnico ou os seus sais no crescimento marinho
de camares so limitadas, porm sabe-se que
estes afetam a ao de enzimas digestivas, e
influenciam na disponibiliada de e absoro de
nutrientes, melhorando a resposta contra
patgenos

Objetivo
Este estudo teve como objetivo determinar os
efeitos da suplementao com propionato de
sdio e butirato de sdio em diferentes nveis de
incluses alimentares no crescimento de
Litopenaeus vannamei, e alm disso realizar
avaliao do desempenho de crescimento,
reteno de azoto e de fsforo, parmetros
hemato imunolgico de camares e alteraes na
comunidade microbiana intestinal.

Material e Metodos
Material biolgico
Os camares utilizados neste estudo eram de linhagem livre
de patgenos especficos de notificao obrigatria pela OIEWorld Organizao Mundia de Sade Animal obtidas na
empresa AQUATEC (Rio Grande do Norte, Brasil).

Os camares foram cultivados em laboratrio de


Carcinicultura Marinha na Universidade Federal de
Santa Catarina, Brasil (UFSC)

Material e Mtodos
Preparao e anlise de dietas
As dietas experimentais utilizadas nos
ensaios foram formuladas para serem
isoproticas, isoenergticas e atender s
exigncias nutricionais de L.vannamei.

Os ingredientes secos da dieta foram


previamente modos e peneirados
(500lm).

Material e Mtodos
1) Homogeneizao dos
misturador-Y (10 min);

microingredientes

2) Adio dos macroingredientes


homogeneizados (10 min);

em
serem

3)Adio de leos e lecitina de soja e 40% gua quente;


4) Peletizao da mistura secagem (40C por 18hrs);
5) Os sais de cidos orgnicos foram adicionados nas
respectivas quantidades para substituir o caulino, o qual
foi usado como um ingrediente de carga

Material e Mtodos
A composio das dietas proximal foi realizada
de acordo com a metodologia descrita por a
Associao dos Qumicos Analticos Oficiais
(AOAC, 2005).
A matria seca (MS) foi calculada por anlise
gravimtrica, aps secagem numa forno a 100
C durante 24 h.

Material e Mtodos
Aps a dieta homogeneizao, o pH da soluo
foi medido;
Dez gramas de cada dieta, foram imersos em
aqurios contendo 60 L de gua salgada, com
35ppt de salinidade, pH de 7,72, e uma
temperatura de 28,8 C.

Material e Mtodos
Os aqurios continham ventilao verticais
constante;
Depois de 2 h ,secou-se a 105 C at peso
constante para se determinar a estabilidade
atravs da percentagem de reteno de DM.

Material e Mtodos
O desempenho do crescimento Experimental
Tabela 1. Formulao das dietas experimentais
utilizados no crescimento em Clear water
Litopenaeus vannamei da (Boone, 1931),
complementado com o propionato de sdio (P),
butirato de sdio (B) e sem suplementao
(controle).

Material e Mtodos
1) Tanques de vidro de 12,5 m2 (6000 L) com
aquecedores de 3000 W e constante arejamento;
2) Sistema de renovao esttica (2/dia):
possibilitando medir a temperatura e o oxignio
dissolvido;
3) Ph e amnia foram medidos semanalmente.

Material e Mtodos
Oferecimento das dietas (4/dia):
08:00 ; 11:00 ; 14:00 ;17:00

Aps 47 dias de cultura, foi possvel realizar a


biometria final, tal como, o peso final, peso
semanal ganho, produtividade, eficincia
alimentar e sobrevivncia, entre outros.

Material e Mtodos
No mesmo tempo, 10 camares por unidade
experimental foram coletados para anlise e
clculo de reteno de nitrognio, fsforo e
reteno do taxa de eficincia proteica.

Material e Metodos
Avaliaes microbiota intestinal
Retira de 5camares/unidade: contagem bacteriolgica
do intestino;
Diluio das amostras (1/10);
Meio de Cultura: Agar Marinho Bac. Heterotroficas) e
Agar Tiossulfato, citrato e Bile sacarose (setivo);
Incubao a 29 C durante 24 h.

Material e Metodos
Remoo e congelamento do intestino (-196C):
Extrao de DNA e amplificao do RNAr por
reaes de PCR;
Desse modo, 25Lde cada amostra foram
aplicado em 6% de gel de poliacrilamida a uma
voltagem de 100 V durante 15 h.

Material e Mtodos
Aps a eletroforese, o gel foi corado com 10L
de uma soluo contendo 2,5L de SYBR Gold
(Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) em 5% tampo
TAE durante 40min, na ausncia de luz.
Fotografado pelo sistema de Imagem QuantLAS
4000

Material e Mtodos
Anlise hemato-imunolgico
Fixao de 40L de hemolinfa em soluo de formaldedo a 4% /
MAS
O restante foi deixado a coagular a 4 C.
Congelamento (20C) e centrifugao (10000 g/10min): soro,
Armazenamento a 20C do soro, para depois utilizar na analise
imunolgica;

Material e Mtodos
Contagem direta de hemcitos/mm /hemolinfa pela
cmera de Neubauer, considerando ainda a diluio;
A ativida defenoloxidase(PO) foi determinada por
espectrofotometria (DO490nm) atravs da formao de
pigmentos de cromo-DOPA;
A concentrao de protena/hemolinfa foi estimada pelo
mtodo de Bradford(1976) atravs da utilizao de soro
de albumina bovina como padro.

Material e Mtodos
O crescimento bacteriano em cada poo foi
medida num leitor de microplacas a DO 550nm,
aps 12 h de incubao de V.alginolyticusa 29
C;
Deste modo, foi possvel determinar a
concentrao de soro mais baixa capaz de inibir
o crescimento bacteriano de cada estirpe.

Material e Mtodos
Anlise de dados
1) Homoscedasticidade avaliada pela o teste de Bartlett;
2) Dados de desempenho de crescimento, reteno de azoto e de
fsforo, a taxa de eficincia de protena e parmetros hematoimunolgicos foram, em seguida, submetidos a varincia
unifatorial;
3) Os dados sobre a qualidade da gua e contagem bacteriolgica
foram analisados atravs de anlise de varincia.

Material e Mtodos
Analise de dados:
A performance de separao do meio foi realizada pelo
teste de Student-Newman-Keuls;
Testes estatsticos: significncia de 5%;
Os resultados similares entre a comunidade bacteriana
intestinal realizada por DGGE foram analisados usando
o software Bio Numerics, verso 6,6

Resultados e Discusso
Parmetros de qualidade da gua
Parmetros
com
baixa
variao
observada:
Temperatura,
oxignio
dissolvido, salinidade, pH, o total
nitrognio amoniacal e nitrognio
nitrito;
No houve diferenas significativas
entre os tratamentos;

Resultados e Discusso
Parmetros de qualidade da gua
Todos os parmetros de qualidade de gua
analisados mantiveram-se dentro dos padres
aceitveis para o cultivo de camares marinhos

Resultados e Discusso
O desempenho do crescimento
Os
camares
alimentados
com dietas
suplementadas com propionato e butirato, em
todas as concentraes analisadas(0,5%, 1%, e
2%), experimentaram um aumento no seu peso
final e ganho de peso semanal.

Resultados e Discusso
O desempenho do crescimento
A eficincia da alimentao e sobrevivncia de
camares alimentados com a dieta contendo 2%
de butirato e o rendimento do suplementado com
2% propionato, 0,5% e 2% de butirato,
apresentaram igualmente valores mais elevados
do que os camares alimentados a dieta de
controle

Resultados e Discusso
Observou-se o aumento do ganho de peso e a
taxa de crescimento especfica de L.vannamei,
quando suplementado com 73 mM de
propionato, butirato, fumarato e succinato em
uma dieta comercial

Resultados e Discusso
O uso de nitrognio e fsforo
Camares alimentados com dietas
contendo
0,5%
e
2%
butirato
mostraram uma maior percentagem
de reteno de azoto e taxa de
eficincia de protenas em relao aos
camares alimentados com a dieta
controle
Quanto a reteno do fsforo, no h

Resultados e Discusso
Este o primeiro relatrio de reteno de azoto e
fsforo em camaro suplementado com sais
orgnicos e mais estudos devem ser realizados
para esclarecer os efeitos da suplementao
diettica de sais orgnico e na utilizao de azoto
e fsforo por camares marinhos.

Resultados e Discusso
O intestino dos camares alimentados com
adieta suplementada com butirato, em todas
concentraes, apresentaram contagens mais
baixas de vibrios em relao a outros
tratamentos;
A contagem do total de bactrias heterotrficas
no foi significativa

Resultados e Discusso
Analise hemato-imunologica
No foram observadas diferenas no THC dos
camares

Concluso
A suplementao diettica de propionato de sdio e
butirato de sdio, em diferentes concentraes, modifica
a microbiota intestinal e melhora a soro-aglutinao e o
crescimento do Camaro;
Butirato de sdio melhora a reteno de nitrognio e
taxa de eficincia protica, como tambm, melhora
eficincia alimentar, sobrevivncia e rendimento.

Concluso
Estes resultados mostraram pela
primeira vez que o potencial de
butirato de sdio como promotor de
crescimento antibitico para este
camaro marinho.