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Integrantes:

Mnica Martnez Montiel


Antonio Salazar Garca
Jos Pablo Velzquez Valtierra

-Aspectos generales e Historia de las


bateras anammox
-Biologa celular de las bacterias
anammox

Organelo
-Compartimento cerrado rodeado
por membranas y con una funcin
celular especfica.
-Se pensaba y se limitaba
exclusivamente a los eucariotas.

Algunas bacterias tienen complicadas


estructuras internas.
(Membranas intracitoplasmticas)

Ejemplos de sistemas de
membranas intracitoplasmticas:
Fotosistemas de bacterias
fototrficas:
Enzimas de bacterias
nitrificantes (nitrosoma):
Enzimas metano
monooxigenasas de bacterias
metanotrficas:
-Enzimas del metabolismo de la
clula

Micrografa de Bacteria purpura Rodospirillum rubrum

En Beggiatoaceae y Thiomargarita,
las clulas cuentan con una extensa
vacuola rodeada de membrana.
Sobre la membrana vacuolar se
encuentra una cadena de transporte
de electrones acoplada a una ATP
sintasa.
Magnetosomas
-Vesculas de membranas que
proporcionan condiciones ptimas
para la formacin de cristales.

Beggiatoaceae

Ambas vesculas de membrana


cerrada tienen una composicin y
funcin especfica

2012, Martin Beutler at et all, Environmental Microbiology,


Vacuolar respiration of nitrate coupled to energy conservation
in filamentous Beggiatoaceae

Gemmata
Contienen una estructura fina
condensada delimitada por una doble
membrana.
Compartimiento llamado cuerpo
nuclear, podra ser anlogo al ncleo
eucariota.

Gemmata obscuriglobus

Otro microorganismo con una


organizacin celular interna compleja
son:
Planctomicetos
Tienen compartimentos celulares
delimitados por membrana
Bacterias Anammox

Candidatus Kuenenia stuttgartiensis

Planctomicetos
Tienen compartimentos celulares delimitados por
membrana

-Previsto
mediante
clculos
termodinmicos
que era posible
que
ciertos
microorganismos
llevaran a cabo
esta reaccin.

1977

Convierten el amonio y
el nitrito en nitrgeno,
bajo
condiciones
anaerobias
Bacterias
responsables
-Se crea
imposible por
falta de
evidencia.
-Ciclo del
nitrgeno
incompleto

1990

-Se encontraron
An amm ox
las primeras
evidencias.
anaerobi ammoniumaxidatio
-Se completo el
c
n
ciclo del
nitrgeno.

1995

Se identificaron
pertenecientes al
Phylum de
Planctomycetes
-Anammoxoglobus
-Brocardia
-Jettenia
-Kuenia
-Scalindua

Anammoxoglobus

Jettenia

16S rRNA

Scalindua

No ha sido
posible
crecer
bacterias en
cultivos
2011, John A. Fuerst and Evgeny Sagulenko, NATURE REVIEWS |
purosPlanctomycetes
MICROBIOLOGY, Beyond the bacterium:

Los mtodos de
deteccin podra
identificar
bacterias
anammox en
ambientes
Se
encontraron
naturales
bacterias
anammox:
-Plantas de
tratamiento de
aguas residuales.
-Ambientes
marinos (zonas
ocenicas de
mnimo oxgeno).

Pertenecen al gnero Scalindua

Aplicaciones:
-Presentes
en aelnivel
industrial para la
suelo.
eliminacin de
nitrgeno en el agua en
plantas de tratamiento
de agua residual

-Se ha estimado que el 50% de


las molculas de nitrgeno en
la atmsfera se han generado
por estos organismos.

-Principales contribuyentes del


ciclo del nitrgeno.

loga celular de las bacterias anammox


Caractersticas de las
bacterias anammox
Tienen
compartimentos
celulares delimitados
por
membrana
Morfologa:
-Cocoides
-Dimetro
1100nm

800-

- -2 a 43C
- PH 6.7-8.3

-Crecimiento lento:
Se dividen solo una
vez por semana en
condiciones
ptimas.
dividen por fisin binaria constrictiva
Candidatus Kuenenia stuttgartiensis

Pared Celular,
Divisin Celular
y Apndices
Celulares

Gra
m-

Organizaci
n de
bacterias de
acuerdo a
su pared
celular.

Gra
m+

Capa
gruesa de
Peptidogli
cano (30100nm)
Membr
ana
citoplas
mtica

Capa
delgada de
peptidoglica
no (12nm)

Placntomic
etos

Microscopa
Colapso
osmtico

Indican la
ausencia de
peptidoglicano
(integridad a la
clula)

Carecen de
peptidoglica
no

Membr
ana
externa

Bioinformticame
nte
-En el genoma de
Keunenia
K.stuttgartiensis, la
ruta parcial para
biosntesis de
peptidoglicano (19
de 21) y protenas
de membrana
(porinas).

Bacterias anammox tienen 3


membranas, dando lugar a 3
compartimentos
celulares
independientes.

Paryphoplasma

Riboplasma
-DNA y Ribosomas
Anammoxosoma
-Libre de DNA y
ribosomas
-Rodeado de una Bicapa
lipdica
-Produccin de energa
(homlogo en funcin a
las mitocondrias en
-Oxidacin anaerobia de
eucariotas)
amonio en Nitrgeno (N2),
usando nitrito como un aceptor
de electrones.
-Hidracina como un
intermediario (compuesto
txico)
-Presencia de enzimas (que
convierten la hidracina

fosfolpidos nicos los


ladderanos.

Contribuyen a la
densidad de esta
membrana

Proteccin celular
Delimitando la membrana
para evitar que se escapen
los subproductos formados en
el anammoxosoma (txicos).

Divisin celular
-El anillo de divisin
celular es claramente
visible
en
el
-En
la gran mayora de las especies
paryphoplasm
bacterianas, en algunas Archaea y
mitocondrias, los centros de divisin de la
clula, son llevados a cabo por la protena
FtsZ que forma el anillo de la divisin

En bacterias anammox, el anillo de la


celular
divisin celular no se basa en FtsZ.
-asociado a protena kustd1438
inmuno localizacin
-Bioinformticamente
Anlisis de secuencias
Kustd1438
sitio de unin ATP / GTP
La actividad GTPasa
polimerizacin
de
monmeros kustd1438
estructura de anillo
anloga con FtsZ que
tambin se ensambla en

2009, Laura van Niftrik at et all, Molecular Microbiology, Cell


division ring, a new cell division protein and vertical
inheritance of a bacterial organelle in anammox

Riboplasma

Riboplasma = Citoplasma (bacterias)

Por lo tanto el reto es


clasificar las protenas
de
los
diferentes
compartimentos y las
membranas
de
la
clula.

Genoma
Kuenenia
stuttgartiensis

Tat

Sec

Representacin esquemtica de un pptido


seal

Sec

Ni el amino ni el
carboxilo terminal
de las protenas
juega un papel en
la designacin de la
protena
a
una
ubicacin
intracelular
Chaperones estas
dirigiran
especficamente a
las protenas hacia
su destino correcto

Estos chaperones
pueden reconocer
otras propiedades
de las protenas

ADN- Riboplasma
Nucleoide fibrilar
Micrografa- se ve
en
las
proximidades de la
membrana
anammoxoma

Micrografa electrnica de transmisin

Glucgeno
grnulos de almacenamiento

Falta de ciertos nutrientes


en el medio
(especialmente nitrgeno)

Exceso de carbono

Va de la gluconeognesis

Est
codificado en
el genoma

Enzimas codificadas
por los genes glgABC

Genoma de K.
stuttgartiensis

Momentos
de tensin
Fuente de
carbono y
energa
Estructura molecular del
glucgeno

Biofilm

AcetilC
oA

Va Oriental

Formiato
deshidrogenas
a

Reduccin del
dixido de
carbono
Formiato

Wood-Ljungdal

Va Occidental

Monxido de
carbono
deshidrogenasa
Reduccin de
dixido de
carbono
Monxido de
carbono

K.
stuttgartiensis

Candidatus Brocadia fulgida

Candidatus Anammoxoglobus propionicus

Estructura adicional se
ha observado en la
riboplasma

Esfrica o tubulares con una


tamao medio de 55 nm

Polihidroxialcanoatos o
almacenamiento de polifosfato

Anammoxoso
ma

Compartimiento que se encuentra en el


centro y es el ms
grande( volumen celular total 51-66% )
Presente en todos los miembros del orden Brocadiales conocidos hasta
la fecha(bacterias capaces de oxidar anaerbicamente amonio)
Una estructura comparable no se ha observado en cualquier otro
organismo procariota
Compartimiento independiente

No se forma por
invaginacin de la
membrana
Fisin binaria
Se alarga junto con el resto
de la clula
Divide por la constriccin de
las dos clulas hijas por el
anillo de la divisin celular

Definir caractersticas:
Membrana curva , Estructuras tipo tbulo y
Partculas de hierro
Membrana anammoxosome
Curvada
Invaginaciones
profundas en el
anammoxoma

Aumenta la superficie disponible para la membrana


asociada reacciones enzimticas con el fin de mejorar la
tasa metablica del organismo
El mecanismo responsable de la
curvatura
de
la
membrana
anammoxosome

Grupos formados por


varias
protenas
diferentes
pueden
tener
un
efecto
significativo sobre la
curvatura
de
la
membrana

Condicin
hipotnica
Dmeros
(inmuno)

Flexin por las


protenas
integrales de
membrana
propiedad de ATPasas

H2O

Dmeros
mitocondriales F1F0
ATPasa
inducen
curvaturas en las
membranas debido
a las diferencias de
tamao
de
las
subunidades de la
protena
en
el
interior y el exterior

equilibrio osmtico

curvatura de
esta membrana
ATPasas de
diferentes
especies

En qu grado ATPasa

Citoesqueleto
u
otras
protenas
estructurales

Andamio por el
que
la
membrana es
forzado

Presencia de
estructuras que se
asemeja tbulos
Grupos de
cabeza de
lpidos
Cadenas de acilo

Influir en su curvatura
micrografas
electrnicas

Las estructuras
tubulares
presentes en el
anammoxosome

Tres unidades idnticas


que forman:
Una estructura
hexagonal en secciones
transversales
Ancho de 9.4 nm

Funcin

Formar grupos
paralelos
Estirar sobre toda
la longitud del
anammoxosoma

Citoesqueleto

Mantenimiento de la
curvatura de la membrana
anammoxosoma
Asistencia en la divisin de
todo el orgnelo

Las estructuras tambin pueden


consistir
en
otras
protena
abundantes,
ordenadas,
que
participan
en
los
procesos
metablicos de la clula.

Estructuras
tubulares,
se
encuentran generalmente en el
interior de la anammoxosoma son
partculas densas con un dimetro
de 16-25 nm
rtculas de almacenamiento de hierro.
Bacterias requieren hierro para la
sntesis de la multitud de enzimas

Reservas de hierro

Especies anammox
utilizar el hierro

Aceptor de
electrones
alternativo

Fuente de energa

Ricas en hierro ---bacterioferritinas

K. stuttgartiensis contiene dos


posibles genes candidatos con
32-48%
de
identidad
de
secuencia
a
la
protena
bacterioferritina

Protenas contienen:
organism
os
aerbicos

Almacenamie
nto para el
hierro

Bacterioferritina
s
Bacterias
anaerbic
as

especies reactivas de oxgeno

Sistema
de
defensa contra
el estrs de
oxgeno
Queda por investigar si las
partculas ricas de hierro
dentro
de
la
anammoxosoma
son
bacterioferritinas o no, y si
es as, si tienen una
funcin de desintoxicacin

Membranas Especializadas

Membranas

Lpidos
inusuales

nicos para
bacterias
anammox
Lpido

Estructura ladderano
simple

Sistemas de anillos
5
ciclobutanos

3
ciclobutanos
Ciclohexano

Grupos polares se unen travs


de un esqueleto de glicerol
Extremadamente rara

Cabeza polares de los lpidos ladderano

Fosfocolina

Fosfoetanolamina

Fosfoglicerol

Composicin lipdica de cuatro


gneros de bacterias anammox

La estructura de las colas


de
cidos
grasos
ladderano
era
esencialmente igual en
estos gneros

A. propionicus, que
posea dos cidos
grasos
ladderano
novedosos.

Sntesis de los cidos grasos ladderano.

va policiclisacion
o SAM

cidos grasos
poliinsaturado
s
Estructura ladderano
simple

K. stuttgartiensis
Bacterias anammox

Sintetizar ladderanos
a travs de una
novedosa via
va desconocido codificado
en un grupo de genes de la
biosntesis de lpidos

Bacterias anammox

Hopanoides

Corroborada por los datos


genmicos de K.
stuttgartiensis

Escualeno ciclasa enzima clave

Biosntesis de
hopanoide

Presente en todas las


membranas de la clula

Equilibrio entre la
rigidez y la fluidez de las
membranas

Esto podra ser necesario


por lpidos ladderane

El modelo molecular

Estructura de las colas


de
hidrocarburos
restringe la libertad de
rotacin de los lpidos

Evidencia experimental

Usando mezclas de
lpidos ladderano
aislados

Que confiere una


membrana
con
una
densidad
mayor que las
biomembranas
convencionales

Impermeabil
idad a
fluorforos

Compuestos
polares
pequeas
Pasan fcilmente
biomembranas
convencionales

La funcin de la Anammoxosome
Anammoxosoma alberga el
metabolismo energtico

Anlogo a las mitocondrias

Las reacciones catablicas


que
conducen
a
la
produccin de gas de
dinitrgeno de amonio y
nitrito tienen lugar dentro
del anammoxosoma
La
presencia
de
una
cadena de transporte de
electrones en la membrana
anammoxosoma se cree
que conducen a la creacin
de una fuerza motriz de
protones a travs de esta
membrana, que puede ser
utilizado
para
la

La presencia de lpidos ladderano en la membrana

Densidad permeabilidad de
la membrana se piensa que
es una adaptacin

La tasa de difusin pasiva de


protones a travs de una
biomembrana
es
relativamente constante.

tasa de crecimiento = un
metabolismo muy lento que
a su vez conduce a una
tasa de bombeo de protones
sobre
la
membrana
anammoxosoma.

Se ha calculado que la
translocacin
de
protones
seria incapaz de mantenerse al
da con la disipacin de la
fuerza motriz de protones por
difusin a travs de una
membrana convencional, por
lo que la restriccin de la
difusin
es
de
suma
importancia para la viabilidad
de las bacterias

Difusin de productos intermedios voltiles del metabolismo


anammox

Hidracina

compuesto altamente
reactivo y mutagnico
restringir su difusin

evitar daos en el ADN de la clula

Oxido
ntrico

Evidencia el papel de la anammoxosome en la


conservacin de energa

inmuno etiquetado
utilizando un
anticuerpo

Uno de estos
homlogos

Conversin de la
hidracina a gas
dinitrgeno

Protena purificada que se


asemeja a oxidorreductasa de
hidroxilamina (HAO)

10 homlogos de
protenas HAO como
estn presentes en el
genoma de K.
stuttgartiensis
La protena HAO-como fue
localizada exclusivamente
en el interior del
anammoxosoma, lo que
llev a la extensa
etiquetado de toda la matriz

or la misma tcnica se demostr..


ATPasa est presente en la
membrana anammoxosoma
y en la membrana mas
externa de la clula

Datos del proteoma


transcriptoma
stuttgartiensis

y
K.

Diferentes
reacciones
parciales en la oxidacin
anaerobia de amonio se ven
facilitadas por una gama de
citocromo c

ATPasas en la membrana
anammoxosoma : hiptesis
fuerza motriz de protones

Localizacin
de
las
protenas citocromo c por
tincin con peroxidasa

Citocromos restringidos al
anammoxosome
y
especialmente concentradas
en
un
borde
de
aproximadamente 150 nm a
lo largo de la membrana
anammoxosome

El metabolismo energtico

Enzimas que participan:


1. Nitrito::xido ntrico
reductasa (NirS).
2. Hidrazina sintasa (HZS).
3. HAO like-HDH .
(hidroxilamina oxido
reductasa. Hidrazina

Flujo de electrones

Energa para la fijacin del


carbono
El CO2 se reduce a CO
que pasa a Acetil-CoA por
la enzima CO
deshidrogenasa

Electrones son
transportados hacia la
reduccin del CO2 en
el riboplasma va
quinona o NADH

Las bacterias Anammox son


generalistas
Hierro
Oxido de manganeso

Aceptor
de
electrones en lugar
del nitrito

Propionat
o
Acetato

K. stuttgartiensis y
Scalindua spp
Crecidas en
formato

K.
stuttgartiensis
Scalindua spp

Metilamin
a

A. propionicus and Brocadia


spp. Furthermore, B. fulgida
K. stuttgartiensis

Hierro ferroso
Donador de
electrones

Reduccin
disimilatoria
de
nitrato a amonio.

NrfA
limitado)

(amonio

Orgnelo celular procariota


Es el anammoxosoma un orgnelo verdadero?
Definicin de orgnelo: compartimiento celular
rodeado por una membrana, teniendo estructura,
composicin macromolecular y funcin distintas.
Estructura o molculas

Funcin

Membrana

Composicin lipdica. (se ha


podido aislar)

Enzimas

Mltiples enzimas
presentes en el orgnelo
que no se encuentran en
otros compartimentos.
(HAO-like, HZS, protenas
citocromo c.

Tubule-like

Citoesqueleto,
mantenimiento de la
membrana y divisin
celular.

Lo que falta por investigar


?
Cul es la composicin de la pared celular de las anammox
bacterias y la funcin del parifoplasma?
Cmo se obtiene la curvatura de la membrana en el
anammoxosoma?
Contribuirn las estructuras tubule-like con la curvatura o
estarn
involucradas
en
la
divisin
celular
(anammoxosoma)?
Encontrar todas la enzimas que se asocian en la reaccin
anammox y cual de ellas se asocia a la membrana.
las partculas de hierro estn relacionadas con la reaccin
anammox o en defensa ante el estrs oxidativo?
El transporte de substratos hacia el anammoxosoma o
transporte de protenas hacia los diferentes compartimentos.
Origen del anammoxosoma (evolucin).