nlisis de las Lipoproten

Anlisis de las Lipoprotenas.

Anlisis de las Lipoprotenas.
Anlisis de las Lipoprotenas.

Lic. TM. MIGUEL SANDOVAL VEGAS

Profesor Asociado
Facultad de Medicina-UNMSM

ABSORCIN DE LOS LPIDOS

DIGERIDO

DIETA
TAG
ESTERES DE
COLESTEROL
FOSFOLPIDOS

AGL
MONOGLICRIDOS
GLICEROL
COLESTEROL
LISOFOSFOLPIDOS

ABSORCIN DE COLESTEROL

TRANSPORTE DE COLESTEROL

TABLA 1

LIPOPROTENAS

QUILOMICRON
ES

VLDL

LDL

HDL

Densidad

< 0.95

< 0.95 1.006

1.0061.063

1.0631.210

Mvil Electrof.

ORIGEN

PRE-BETA

BETA

ALFA

Apolipoprotenas

Apo B 48

Apo B 100

Apo C - I

Apo C - I

Apo C - II

Apo C - II

BETA

BETA

Apo C - III

Apo C - III

Apo E

Apo E

BETA

Apo A - IV
Tamao (a)

300-500

280-750

210-250

90-120

21

46

82

53

Colesterol

22

47

19

Fosfolpidos

18

23

26

Protenas
Triglicridos

Apolipo
proteinas

Peso
molecular
Kda

Concentracin
en plasma g/l

Funcin

Apo AI

28,000

1.0 1.5

Activar enzima LCAT

Apo AII

17,000

0.3 0.5

Apo AIV

46,000

0.15 0.20

Secrecin de
quilomicrones y
transporte reverso de
colesterol.

Apo B48

250,000

0.5

Secrecin de
quilomicrones

Apo B100

513,000

0.8 1.0

Interaccin con receptor

LDL

Apo CI

6,500

0.04 0.07

Activacin de LACT

Apo CII

8,500

0.03 0.08

Cofactor de LPL

Apo AIII

8,750

0.8 0.15

Inhibicin de LPL y su
receptor

Apo E

39,000

0.03 0.06

Interaccin con receptor

LDL y receptor Apo E

Tamanho relativo entre as diversas

lipoprotenas

Quilomicrons e VLDL so as maiores e de maior teor de

gordura.
Os quilomicros tm uma meia-vida de no mximo 30 minutos, o
que significa que o clearance seja de 4 a 10 horas.
VLDL tem uma meia vida de 1 hora.
LDL tem meia vida de 60 horas.

Preparacin para el
examen de
colesterol:
Es necesario no
ingerir alimentos ni
lquidos, a excepcin
de agua, entre 10 a
12 horas antes de
tomar la muestra de
sangre.

Razones por las que se realiza el examen de

colesterol
El perfil de riesgo coronario se realiza con mayor
frecuencia:
Como una prueba de deteccin para determinar la
salud general de la persona
Para controlar a la persona si tiene antecedentes
de problemas cardacos u otros trastornos
relacionados con la ateroesclerosis
Para determinar la efectividad de la dieta y los
medicamentos en el control del colesterol alto.
Valores normales de colesterol
LDL: 60 - 130 mg/dL
HDL: superior a 45 mg/dL
CT: menos de 200 mg/dL
TAG: 10 - 150 mg/dL

DETERMINACIN DE COLESTEROL
COLESTEROL TOTAL OXIDASA-PEROXIDASA

MTODO ALTERNATIVO.
Mtodo enzimtico de punto final.
Fundamento.El Fundamento es bsicamente el mismo que el mtodo descrito
anteriormente en el Mtodo de Rutina, salvo que se reemplaza la
4-aminoantipirina por 4-aminofenazona(4-AF), y el producto final
de la unin oxidativa de ste con el fenol genera 4(Pbenzoquinona monoimino) fenazona + 4H2O , lo que genera un
complejo coloreado medible a 500 nm.

Reaccin.steres de colesterol (Lipasa) colesterol + ac. grasos

Colesterol + O2 (CHOD) colest-en-3-ona + H2O2
H2O2 + 4-AF+fenol 4(p.benzoquinona monoimino) (POD)
fenazona + 4H2O

MTODO DE REFERENCIA
Mtodo de ABELL y col.
Este mtodo consiste en la hidrlisis de los steres de
colesterilo, extraccin con etere de petroleo y desarrollo del
color con un reactivo de cido actico-anhdrico actico -cido
sulfrico . Con el equipo apropiado y buena habilidad tcnica se
pueden obtener resultados exactos y precisos. La preparacin
consiste en la extraccin del colesterol con Zeolina, hidrlisis
qumica de los steres (Saponificacin) y medicin del
colesterol total por la reaccin de Liebermann-Burchard , la
desventaja que tiene es que es un mtodo muy laborioso.

TODOS DE SEPARCIN DE LIPOPROTEINA

Por
ultracentrifugacin:
Permite separar las diferentes
familias de lipoprotenas en base
a sus densidades. Est basada
en dos propiedades, una es la
baja densidad que tienen las
lipoprotenas respecto a otras
macromolculas plasmticas y
otra es que cada tipo de
lipoprotena tiene una densidad
diferente; as las lipoprotenas
pueden ser separadas de otras
protenas plasmticas y a su vez
ser separadas entre ellas.

MTODOS DE SEPARCIN DE LIPOPROTEINAS

Separacin de
lipoproteinas por
electroforesis

TODOS DE DETERMINACIN DE LIPOPROTEINA

Por precipitacin: Las protenas precipitan en presencia de poli aniones como el sulfato de
heparina o en presencia de cationes divalentes como el Ca +2, Mg +2, y Mn +2. Dicha
precipitacin est influida por varios factores pero se han establecido condiciones para que
las principales protenas precipiten.
Otros agentes precipitantes: Sulfato de dextrano con MgCl2 o cido fosfotiugntico con MgCl2.

MTODOS DE DETERMINACIN DE LIPOPROTEINAS

DETEMINACIN DE LDL-c

MTODOS DE DETERMINACIN DE LIPOPROTEINAS

DETEMINACIN DE LDL-c
Determinacin de LDL colesterol
El LDL es precipitado
selectivamente mediante el uso de
heparina 100000 U/L
(reactivoprecipitante LDL), que
despus de la centrifugacin queda
en el sobrenadante las
lipoptroteinas HDL y VLDL, los
cuales son determinados
colorimetricamente, finalmente la
concentracin de LDLse encuentra
por diferencia entre el colesterol
total y la concentracin de esta
prueba

Determinaci

HDL + VLDL n de

colesterol

LDL-c = CT (HDL + VLDL)

LDL

LAS APOLIPOPROTEINAS

Apolipo
proteinas

Peso
molecular
Kda

Concentracin
en plasma g/l

Funcin

Apo AI

28,000

1.0 1.5

Activar enzima LCAT

Apo AII

17,000

0.3 0.5

Apo AIV

46,000

0.15 0.20

Secrecin de
quilomicrones y
transporte reverso de
colesterol.

Apo B48

250,000

0.5

Secrecin de
quilomicrones

Apo B100

513,000

0.8 1.0

Interaccin con receptor

LDL

Apo CI

6,500

0.04 0.07

Activacin de LACT

Apo CII

8,500

0.03 0.08

Cofactor de LPL

Apo AIII

8,750

0.8 0.15

Inhibicin de LPL y su
receptor

Apo E

39,000

0.03 0.06

Interaccin con receptor

LDL y receptor Apo E

APOLIPOPROTEINA A
La apolipoprotena A-I y A-II constituyen aproximadamente el 90% del total de las
protenas de la HDL.
La relacin entre apo A-I/apo A-II en HDL es 3:1 aproximadamente.
La apo A-I es un importante componente estructural de la HDL y adems es un cofactor
de la lecitin colesterol acil transferasa (LCAT: enzima responsable de la formacin de
colesterol plasmtico).
La apolipoprotena A (Apo A) se encuentra
asociadas a las lipoprotenas HDL, con dos
formas la Apo A1, que corresponde al 75 % de
las HDL y la Apo A2 que es el 20% de las HDL.
Siempre que se encuentre HDL elevado
aparecer la Apo A elevada, siendo as ms
frecuente en las mujeres que en los hombres.
La medicin de la ApoA2 es un indicador mejor
que el HDL en el riesgo disminuido de
arterioesclerosis.

APOLIPOPROTEINA A
Niveles normales de Apo A
En hombres desde 75 a 160 mg/dL.
En mujeres desde
80 a 175 mg/dL.
Valores de referencia
Edad

Masculino (mg/dl)

Femenino (mg/dl)

5-7 aos

92-151

90-151

8-9 aos

96-151

94-151

10-11 aos

96-151

92-151

12-13 aos

88-151

83-146

14-15 aos

85-139

96-146

16-17 aos

83-146

96-151

20-29 aos

81-153

80-184

30-39 aos

79-155

83-187

40-49 aos

100-140

93-181

50-59 aos

81-169

76-204

60-65 aos

86-166

122-214

APOLIPOPROTEINA A
Mtodo: IDR, RIA; ELISA; inmunonefelometra, inmunoensayo, turbidimetra.
Los dos ltimos mtodos son los ms usados.

Utilidad clnica:
Evaluacin temprana de riesgo
coronario. Estimacin de riesgo
en personas con una historia
familiar de cambios
aterosclerticos tempranos.
De forma similar con el HDL-C,
el riesgo es inversamente
proporcional a los valores de apo
A I.
Monitoreo de la terapia con
drogas reguladoras de lpidos.

APOLIPOPROTEINA A
Variables preanalticas:
Aumentado:
Reduccin de peso en pacientes con
sobrepeso, ejercicio fsico (Apo A-I),
ingestin de aceite de pescado, postparto, incremento de colesterol de la
dieta, menopausia.
Disminuido:
Fumar, dieta rica en carbohidratos o
grasos poliinsaturados.
Apo A-I: administracin de alcohol,
ayuno, dieta rica en fibras,
administracin endovenosa de
heparina, terapia hormonal de
reemplazo.

APOLIPOPROTEINA A
Variables por drogas:
Aumentado:
Carbamacepina, estrgenos, etanol (moderada),
derivados del cido fbrico, lovastatin, niacina,
anticonceptivos orales, fenobarbital, difenilhidantona,
estatinas en general, cido nicotnico, vitamina A.
Apo A-II: deficiencia de hormona de crecimiento,
deficiencia de 1 antitripsina, enfermedad fibroqustica de
mama.
Disminuido:
Andrgenos, beta bloqueantes, diurticos, probucol,
progestinas.

APOLIPOPROTEINA B

Apo B100 es en el contexto del estudio de una

hiperlipemia sirve para evaluar los factores de
riesgo de arterioesclerosis, enfermedades
circulatorias, coronarias, etc. Su elevacin
aumenta el riesgo de este tipo de
enfermedades.
La Apolipoprotena B100 (ApoB100) es el
principal componente polipeptdico de las
lipoprotenas LDL, y casi la mitad de las mismas
de las VLDL.
La ApoB100 se sintetiza en el hgado y son el
mecanismo de transporte de colesterol
endgeno ms importante. La Apo B100 tiene
afinidad por el receptor de la LDL situado en la
superficie celular, y es la principal causante del
depsito de colesterol en las clulas.

APOLIPOPROTEINA B
La apolipoprotena B existe en dos formas: apo
B-100 y apo B-48, que difieren en su secuencia
aminoacdica y en peso molecular: La apo B-48,
de sntesis intestinal, componente de los QM,
posee un peso molecular de 264.000. La apo B100, sintetizada en el hgado forma parte de la
VLDL, transferida a las IDL y luego a las LDL en
la cadena de delipidaciones posee un PM
aproximado de 500.000
Cada partcula de VLDL contiene una molcula
de apo B-100. En el estado de ayuno, la mayora
de la apo B plasmtica es la apo B100.
La apo B-100 no puede moverse desde una
partcula de lipoprotena a otra, el remanente
de apo B-100 VLDL con la lipoprotena es
catabolizado a LDL. Un perfil adverso de apoB/apo A-I es un marcador potencial para riesgo
de enfermedad cardaca coronaria.

Modificaciones del Resultado

Aumentan apo B 100: alimentacin rica en grasas saturadas;
medicamentos: andrgenos, betabloqueantes, diurticos, alcohol,
progesterona.
Disminuyen apo B 100: los estrgenos, las estatinas, la tiroxina, y

APOLIPOPROTEINA B
Niveles normales de Apo B100
En hombres desde 50 a 125 mg/dL.
En mujeres desde 40 a 120
mg/dl.
Valores de referencia
Edad

Masculino (mg/dl)

Femenino (mg/dl)

5-7 aos

47-106

49-110

8-9 aos

49-105

53-132

10-11 aos

52-110

54-121

12-13 aos

46-113

46-110

14-15 aos

44-103

41-108

16-17 aos

48-139

41-96

60-65 aos

46-174

46-142

Los niveles aumentados de

apo B100 se relacionan con:
Hiperlipemia tipo IIa, IIb, IV y V
Sndrome nefrtico
Diabetes
Hipotiroidismo
Embarazo
Colestasis
Cardiopata isqumica
coronaria
Anorexia

APOLIPOPROTEINA B

Los niveles disminuidos de

apo B100 se relacionan
con:
Hipertiroidismo
Malnutricin
EPOC
Enfermedades reumticas
Anemia
Adelgazamiento

PROTENAS TRANSFERIDORAS DE COLESTEROL Y

FOSFOLPIDOS (CETP Y PCTP)

PROTENAS TRANSFERIDORAS DE COLESTEROL

Y FOSFOLPIDOS (CETP Y PCTP)
Se han identificado varios transportadores de esteroles entre los que se
incluyen el ABC (ATP-binding cassette) A1, ABCG1, ABCG4, ABCG5 y
ABCG8. ABCA1 es un transportador monomrico que reside en la
membrana plasmtica de tejidos tales como el hgado, el intestino, la
placenta, el tejido adiposo y el bazo.
Los transportadores ABC consisten en protenas integrales de membrana
que utilizan la energa generada por la hidrlisis de ATP para el transporte
de un sustrato a travs de la membrana. Dichos transportadores
pertenecen a una gran familia de protenas implicadas en el transporte de
un sustrato especfico de un compartimiento a otro.
El ABCA1 ha sido identificado como un transportador especfico de
esteroles aunque tambin se ha descrito que transporta fosfolpidos y se
cree que es un paso limitante en el transporte reverso de colesterol.

PROTENAS TRANSFERIDORAS DE COLESTEROL

Y FOSFOLPIDOS (CETP Y PCTP)

Los transportadores dimricos ABCG1, ABCG4, ABCG5, y ABCG8, estn

probablemente asociados a membranas de orgnulos intracelulares y todos
ellos estn implicados en el trfico intracelular de esteroles en macrfagos
(en el caso de ABCG1 y quizs ABCG4) y en el hgado e intestino delgado
En este sentido, mutaciones en los genes ABCA1 y ABCG5/G8 se traducen
en alteraciones en el metabolismo de colesterol: enfermedad de Tangier y
sitosterolemia.24,28 La enfermedad de Tangier, un trastorno en el que el
eflujo de colesterol desde las clulas es defectuoso, es probablemente el
ejemplo ms caracterstico de un defecto en la funcin de ABCA1.29 La
expresin de ABCA1 se encuentra transcripcionalmente regulada por los
heterodmeros LXR/RXR.

PROTENAS TRANSFERIDORAS DE COLESTEROL

Y FOSFOLPIDOS (CETP Y PCTP)

Figura. Papel de LXR en el transporte reverso de colesterol.

En este esquema se representa el circuito de transporte del colesterol inducido
por la activacin de LXR desde la ntima de la arteria hasta la bilis. AB, cidos
biliares; ABC, ATP-binding cassette; C, colesterol; CYP7A1, colesterol 7
hidroxilasa; EC, steres de colesterol; LDL, lipoprotenas de baja densidad; LDLR,
receptor de LDL; LPL, lipoprotena lipasa; ox-LDL, lipoprotenas de baja densidad
oxidadas; LRP, protena emparentada con el receptor de LDL; PLTP, protena
transferidora de fosfolpidos; PTEC, protena transferidora de steres de

ROL DE LAS PROTENAS

TRANSFERIDORAS DE COLESTEROL Y
FOSFOLPIDOS
Una de las funciones ms importantes de las HDL es el transporte
reverso del colesterol desde los macrfagos y clulas tisulares al
hgado donde ser excretado directamente o tras su conversin en
cidos biliares (Figura 2). Este ciclo comienza con la transferencia
de FL desde las clulas por el transportador ABCA1 a las Apo A1
pobres en lpidos formando las pre-HDL, que por un mecanismo
an desconocido comienzan a cargarse tambin de colesterol libre.
Estas pre-HDL por accin de la LCAT (que esterifica el colesterol
libre) las convierte en -HDL esfricas y pequeas.

HEMOS VISTO:
Mtodos de Anlisis de las
Lipoprotenas. Tcnicas de separacin
de las Lipoprotenas. Significado
Clnico de las Apo AI y B. Rol de las
protenas transferidoras de colesterol
y fosfolpidos

S
A
H
C
MU
S
A
I
C
A
R SANDOVAL VEGAS
GMIGUEL
Lic. TM.
Profesor Asociado
Facultad de Medicina-UNMSM