UNIVERSIDAD NACIONAL SAN

ANTONIO ABAD DEL CUSCO

ANALISIS
BIOQUIMICO CLINICO
Tcnicas electroqumicas
Tcnicas de separacin :
cromatografa, electroforesis y
centrifugacin.
Radiactividad.

MEDICIN DEL PH EN LQUIDOS BIOLGICOS. TCNICAS

ELECTROQUMICAS

 1.BASES DE ELECTROQUMICA
CONCEPTO DE ELECTROQUMICA:son un
conjunto de mtodos analticos cuantitativos,
basados en las propiedades elctricas de la
disolucin de un analito cuando forma parte de
una clula elctrica..
. La reaccin que se produce es la siguiente:
M0 ____! M+ + e La lmina de metal introducida en la disolucin
recibe el nombre deelectrodo.
El sistema completo (electrodo + disolucin)
recibe el nombre desemiclula.
La reaccin que se produce recibe el nombre
deoxidacin,

 FUNDAMENTO:
SEMICLULA DEL NODO:un
metal sumergido en una disolucin
produce una diferencia de potencial
por la tendencia de los tomos del
metal a pasar a la disolucin en
forma de iones, liberando electrones
en el proceso

 2.LA CLULA ELECTROQUMICA

La clula electroqumica se constituye por la unin de
dos semiclulas de forma que los potenciales generados
en cada una de ellas se combinan formando una clula
electroqumica con una diferencia de potencial que se
manifiesta por un flujo de corriente elctrica medible
con un voltmetro.
El ejemplo ms tpico es la clula de Zn/Cu. El Zn va a
formar parte de la semiclula del nodo y el Cu la del
ctodo. Las dos semiclulas estn unidas por un puente
salino formado por Cl- y K+, que es el que establece la
conexin elctrica. El circuito se completa con un
potencimetro.

 3.ELECTRODOS DE REFERENCIA
Para medir el potencial E de una disolucin
necesitamos un electrodo indicador y un electrodo
de referencia
Electrodo de Referencia:debe mantener el voltaje
constante, en condiciones controladas durante un
tiempo significativo. De esta forma, se transforman las
diferencias de potencial relativas, segn el par Redox
que se utilice, a tablas de potenciales absolutos al
enfrentarse los pares Redox con un par de referencia
al que se le asigna un valor cero de potencial.
.

 Los electrodos de referencia ms usados son:

Electrodo Estndar de Hidrgeno: consiste en un
electrodo de Platino sumergido en una disolucin de iones
Hidrgeno. Tiene pH = 0, T = 25C. Se elige el par Redox
del Hidrgeno: 2H+ + 2e- ! H2

Electrodo de Calomelanos ( Hg2Cl2=

calomel):est compuesto por Mercurio
metlico en equilibrio con una disolucin
saturada de Cloruro Mercurioso y una
concentracin conocida de Cloruro Potsico.
La reaccin de oxid-red es la siguiente:
Hg2Cl2 + 2e- ! 2Hg0 + 2Cl

 Electrodo de Plata-Cloruro de
plata:est constituido por un asa de Ag
recubierta de AgCl: AgCl + e- ! Ag0 + Cl-

Electrodo indicador:responde
proporcionalmente a la
concentracin de la sustancia de
inters. Lo que se mide realmente es
la variacin de potencial con
respecto al electrodo de referencia.

 4.TIPOS DE SISTEMAS ELECTROQUMICOS

4.1MTODOS EN LA INTERFASE DEL ELECTRODO CON LA FINA CAPA DE
DISOLUCIN ADYACENTE:
a) Estticos o potenciomtricos:son los que miden el
potencial existente entre dos electrodos en solucin sin que
haya paso de la corriente elctrica
b) Dinmicos o amperomtricos:se basan en la medida de
la cantidad de corriente elctrica que fluye cuando se aplica
un voltaje constante al electrodo de medida

Columbimetra:es una tcnica que mide la carga total

necesaria para la oxidacin o reduccin total de una especie. Se
usa fundamentalmente para la determinacin de Cloro en
lquidos biolgicos, utilizando el clormetro de Cotlove.

 4.2MTODOS EN EL SENO DE LA DISOLUCIN

A.Conductimetra.
MEDIDAS DEL PH

pH-metro:es el aparato que mide el pH y que consta

de dos electrodos, el de Referencia y el Selectivo.
Electrodo de Referencia:es un electrodo de
calomelanos.
Electrodo Selectivo:es un electrodo que est lleno
de una solucin de pH constante. La conexin a un
medidos de voltaje se realiza por medio de un hilo de
Ag cubierto de AgCl e inmerso en una solucin de HCl
0,1M.

MEDIDA DE LA PRESIN PARCIAL DE CO2:

Se utiliza el electrodo de Severing-Havs, que
es una modificacin de la medida del pH cuyos
electrodos estn separados de la muestra por
una membrana que deja pasar el CO2
selectivamente.

MEDIDA DE LA PRESIN PARCIAL DE O2:

Se utiliza el electrodo de Clark: las molculas

de O2 disueltas en una solucin acuosa
determina la corriente elctrica, que es la que
mide el electrodo y, que es proporcional, a la
presin parcial de O2

Tcnicas de separacin de
mezclas.

Procedimientos fsicos
Destilacin:consiste en separar dos lquidos con diferentes puntos de
ebullicin por medio del calentamiento y posterior condensacin de las
sustancias. El proceso de la destilacin consta de dos fases: la primera
en la cual el lquido pasa a vapor, y la segunda en la cual el vapor se
condensa y pasa nuevamente a lquido.

 Evaporacin:consiste en separar los

componentes de una mezcla de un
slido disuelto en un lquido. La
evaporacin se realiza en recipientes
de poco fondo y mucha superficie,
tales como cpsulas de porcelana,
cristalizadores.

Cristalizacin:consiste en
purificar una sustancia slida;
esto se realiza disolviendo el
slido
en
un
disolvente
caliente en el cual los
contaminantes
no
sean
solubles; luego se filtra en
caliente para eliminar las
impurezas y despus se deja
enfriar el lquido lentamente
hasta que se formen los

 Cromatografa:Es la tcnica que se utiliza para separar los componentes de

una mezcla segn las diferentes velocidades con que se mueven al ser
arrastradas por un disolvente a travs de un medio poroso que sirve de soporte
a la mezcla, y sobre la base de las cantidades relativas de cada soluto,
distribuidos entre un fluido que se mueve, llamado la fase mvil y una fase
estacionaria adyacente.
A fase mvil puede ser un lquido, un gas o un fluido supercrtico, mientras que
la fase estacionaria puede ser un lquido o un slido segn las diferentes
velocidades con que se mueven al ser arrastradas por un disolvente a travs
de un medio poroso que sirve de soporte a la mezcla. Se conocen varias
formas:

Procedimientos
mecnicos
Filtracin:consiste en separar los
componentes de una mezcla de dos
fases: slida y lquida, utilizando una
membrana permeable llamada
medio filtrante, a travs de la cual se
hace pasar la mezcla; la fase lquida
pasa a travs de la membrana y la
fase slida queda retenida en ella

Tamizado:consiste en
separar una mezcla de
materiales slidos de
tamaos diferentes, por
ejemplo granos de caraota y
arena empleando un tamiz
(colador). Los granos de
arena pasan a travs del
tamiz y los granos de caraota
quedan retenidos.

 Imantacin:consiste en separar con un imn

los componentes de una mezcla de un material
magntico y otro que no lo es. La separacin se
hace pasando el imn a travs de la mezcla
para que el material magntico se adhiera a l:
por ejemplo: separar las limaduras de hierro
que se hallen mezcladas con azufre en polvo,
para lo cual basta con mantener con un imn el
componente magntico al fondo e inclinar el
recipiente que contiene ambos materiales, para
que se pueda recoger el lquido en otro
recipiente.
Centrifugacin:consiste

en
la separacin de materiales de
diferentes
densidades
que
componen una mezcla. Para
esto se coloca la mezcla
dentro de un aparato llamado
centrfuga, la cual tienen un
movimiento
de
rotacin
constante y rpido, lo cual
hace que las partculas de
mayor densidad vayan al
fondo y las ms livianas
queden en la parte superior.

 Decantacin:se utiliza para separar dos lquidos con

diferentes densidades o una mezcla constituida por un
slido insoluble en un lquido. Si tenemos una mezcla de
slido y un lquido que no disuelve dicho slido, se deja
reposar la mezcla y el slido va al fondo del recipiente.
Si se trata de dos lquidos se coloca la mezcla en un
embudo de decantacin, se deja reposar y el lquido
ms denso queda en la parte inferior del embudo.

CROMATOGRAFIA

CONCEPTO
"Mtodo

fsico de separacin en
el que los componentes a separar
se distribuyen en dos fases, una
de las cuales constituye un hecho
estacionario de gran desarrollo
superficial y la otra un fluido que
pasa a travs o a lo largo del
lecho estacionario (fase mvil)."

El espectrmetro de masas de triple cuadrupolo es

el detector de referencia y el ms habitual para
laboratorios clnicos de excelencia. Consiste en
dos cuadrupolos que seleccionan solamente los
iones
de
inters
y
eliminan
los
iones
acompaantes en funcin de su relacin masacarga con una resolucin que habitualmente suele
ser de 1 unidad de masa atmica, o algo menor.

APLICACIONES:
Anlisis

de aminocidos, hormonas y vitaminas

mediante cromatografa lquida acoplada a la
deteccin ultravioleta-visible.
Los frmacos inmunosupresores, antiretrovirales,
antidepresores, antitumorales entre otros, pueden
analizarse con cromatografa lquida acoplada a
deteccin ultravioleta-visible o espectrometra de
masas.
La monitorizacin de los frmacos permite ajustar
las dosis para alcanzar concentraciones dentro del
margen teraputico.
Por ltimo, la bsqueda de drogas de abuso en el
mbito toxicolgico se suele realizar con
cromatografa de gases acoplada a espectrometra
de masas.

El

uso de la cromatografa en fase liquida de alta eficacia en la

identificacin y cuantificacin de frmacos tomados con fines no
teraputicos, generalmente analgsicos, sedantes, tranquilizantes y
estimulantes. Esta situacin representa una urgencia y suele darse
en pacientes inconscientes o semiconscientes en los que debe
averiguarse cual es el frmaco ingerido.
Sin embargo en la practica clnica los toxicos mas frecuentes se
estudian por mtodos inmunoquimicos, debido a su rapidez ya que
no requieren preparacin previa del espcimen, utilizando solo la
cromatografa en fase liquida de alta eficacia en laboratorios
especializados para el anlisis de frmacos poco frencuentes.
La otra situacin interesante en la aplicacin de la cromatografa de
fase liquida de alta eficacia es la monitorizacin
de las
concentraciones plasmticas de determinados frmacos para su
correcta dosificacin, colaborando con la farmacoterapeutica.
Tambien se
usa en anlisis de esteroides y la separacin de
hormonas y sus metabolitos.
Ademas de la separacin y cuantificacin de los aminocidos, los
cuales se separan en forma de derivados del fenilisotiocianato en
columnas de fase inversa de octaldecilsilano y con deteccin UV.

CLASIFICACION DE LAS
CROMATOGRAFIAS
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA ABIERTA:

CROMATOGRAFIA EN COLUMNA
CERRADA

CROMATOGRAFIA EN PAPEL

CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA:

La

migracin de las diferentes

sustancias estudiadas a lo largo del
soporte es similar a la cromatografa
en papel, pero debido a la menor
porosidad de los geles, la separacin
se realiza con mayor rapidez.
En los laboratorios clnicos utilizamos
este tipo de cromatografa para
determinar
lpidos,
esteroides,
azucares, aminocidos.

CROMATOGRAFIA DE
INTERCAMBIO IONICO:

Se usa sustancias insolubles que sean

capaces de intercambiar iones con la
mezcla de forma reversible; estos iones
pueden presentar una carga positiva o
negativa.
Este tipo de cromatografa es utilizada en
el laboratorio para la identificacin de
protenas, pptidos, aminocidos.

CROMATOGRAFIA DE EXCLUSION
MOLECULAR:
Conocido
como
filtracin
sobre
gel
o
cromatografa de tamiz molecular, se basa en
el tamao de las diferentes sustancias para
separarlas. Consiste en dejar pasar las
sustancias disueltas en un tampn adecuado
por una columna de grnulos de un material
inerte, conocido e hidratado.

ANALIZADORES DE AMINOACIDOS:

La cromatografa de intercambio ionico es muy utilizada

en el laboratorio clnico para el anlisis y cuantificacin
de los diferentes aminocidos presentes en una muestra.

Acoplaremos la salida de la columna con la entrada de

reactivo de nihidrina y lo incubaremos a 100C, los
aminocidos presentes en la muestra reaccionaran con la
nihidrina y formaran productos coloreados que podemos
cuantificar por medio de un fotmetro de flujo.

CROMATOGRAFO DE GASES:

M: fuente de gas.
V1: sistema de regulacin para la salida del gas.
IC1, IC2: medida caudal para la salida del gas.
D: detector.
IMG: sistema de inyeccin para muestras gaseosas.
V2: llave de paso.
IML: sistema para muestras liquidas o solidas vaporizables.
C: columna.
T: recinto termostatado.
A: colector y amplificador de la seal elctrica.

ELECTROFORESIS

PRINCIPIOS TEORICOS

PARAMETROS QUE INFLUYEN EN LA

MOVILIDAD ELECTROFORETICA

EQUIPO ELECTROFORETICO

TIPOS DE ELECTROFORESIS

TIPOS DE ELECTROFORESIS

TIPOS DE ELECTROFORESIS

TIPOS DE SOPORTES

TIPOS DE SOPORTES

TIPOS DE SOPORTES

3. ELECTROFORESIS
CAPILAR

3. ELECTROFORESIS
CAPILAR

3. ELECTROFORESIS CAPILAR DE ZONA

(CZE)

PARAMETROS DE SEPARACION EN ECZ

centrifugacion
SEDIMENTACIN
Se basa en la diferencia de densidades entre un slido y
el lquido que lo rodea. Solamente est influenciada por
la gravedad.
CENTRIFUGACIN
Proceso en el cual la sedimentacin se acelera
por la
aplicacin de una fuerza centrfuga.

Descripcin del Equipo

motor
rotor
compartimento

montaje
a) Colocar el tubo de muestra
(suspensin o disolucin) en uno de
los receptculos del rotor.
b) Compensar el tubo de muestra
colocando en el receptculo
diametralmente opuesto otro tubo
con un volumen de lquido de peso
idntico al de la muestra.
c) Cerrar hermticamente el
compartimento del rotor y poner en
funcionamiento la centrfuga. Una vez
acabada la centrifugacin
(normalmente las centrfugas tienen
un temporizador que desconecta
automticamente el motor una vez
transcurrido el tiempo programado),
esperar a que se detenga el rotor
para abrir la tapa del
compartimento donde est alojado y
sacar el tubo de muestra y el de

Tipos (segn rango de velocidad de giro)

C. Ultracentrfugas. Superan las
A. Centrfugas de baja
50.000 rpm, tienen sistemas
velocidad, de
auxiliares de refrigeracin y de alto
sobremesa o clnicas. De
vaco. Hay U. analticas que permiten
pequeo tamao y sin
la obtencin de datos precisos de
refrigeracin. Vel.mx
propiedades de sedimentacin
5000 rpm.
(coeficientes de sedimentacin, pesos
Las centrfugas
moleculares), y preparativas, tiles
micrfugas vel. mayor
para aislar partculas de bajo
10.000 rpm, Los volmenes
coeficiente de sedimentacin
de trabajo son muy
(microsomas, virus, macromolculas).
pequeos.
B. Centrfugas de alta velocidad.
vel.18.000 -- 25.000 rpm. Son
refrigeradas y algunas tienen sistema
de vaco para evitar el calentamiento
del rotor a causa del rozamiento con
el aire. tiles en la separacin de
fracciones celulares, pero
insuficientes para la separacin de
ribosomas, virus o macromolculas

Esquema que representa el tipo de

sedimento en funcin de la vel. Y el tiempo

Tipos(segn el rotor)
1)Fijos: Los tubos se alojan con un
ngulo fijo respecto al eje de giro. Se
usa para volmenes grandes.

2)Basculante: Los tubos se hallan

dentro de unas carcasas que cuelgan.
Estas carcasas estn unidas al rotor
con un eje y cuando la centrfuga
gira, se mueven.

aplicaciones
Una aplicacin tpica consiste en
acelerar el proceso de
sedimentacin, dividiendo el
plasma sanguneo y el suero
sanguneo en un proceso de
determinar el hematocrito
anlisis de sangre.
mediante una toma de muestra
capilar. (microcentrfuga.)
separacin del uranio 235 del uranio 238.
Las centrifugadoras utilizan
instrumentos llamados
butirmetros para medir el grado
de grasa o crema que contiene la
leche, existen diferentes tipos de
butirometro para crema, manteca,
etc.

control de calidad

elaboracin de aceite de oliv

Riesgos y normas de
seguridad

base slida y fija

rotor ha de ser compatible con la centrfuga y perfectamente fijado al motor

distribucin de los tubos perfectamente

equilibrado
tubos han de ser compatibles con la
centrfuga(evitar roturas)
La tapa que asla el rotor del
exterior ha de estar bien
cerrada y asegurada.
Nunca se ha de dejar la
centrfuga sin atencin hasta
llegar a la velocidad mxima de
giro.

USO DE LA RADIACTIVIDAD EN
MEDICINA
Tanto las radiaciones y los
radioistopos son usados en medicina
como agentes teraputicos y de
diagnstico.

La Medicina emplea los istopos

radioactivos, las radiaciones nucleares, las
variaciones electromagnticas de los
componentes del ncleo y tcnicas
biofsicas afines para la prevencin,
diagnstico, teraputica e investigacin
mdica.

En el diagnstico se utilizan radio frmacos para

diversos estudios de:
- Tiroides
- Hgado
- Rin
- Metabolismo
- Circulacin sangunea
- Corazn
- Pulmn
- Trato gastrointestinales...

EL CICLOTRON
El Ciclotrn es un acelerador de partculas de tipo circular
que se usa para la produccin de elementos radioactivos
que son utilizados por equipos mdicos sofisticados,
unos en el diagnstico mdico y otros en radioterapia.
Pues, juega un rol muy importante en las aplicaciones de
la radioactividad en medicina.

APLICACIONES CLINICAS
DEL CICLOTRON

Los positrones dirigidos a investigacin en patologa cerebral y cardiaca. Se

puede focalizar en viabilidad miocrdica en infarto crnico, situacin en la que
existe un msculo viable que permite posibilidades de ser revascularizado si
se hace al tiempo adecuado. Las indicaciones ms reconocidas en la
neurologa son la epilepsia y la demencia. Sin embargo, las aplicaciones en
el campo de la oncologa han aumentado y son mltiples en los ltimos aos.
Esto ha llevado a los centros hospitalarios de diversas regiones a considerar
esta tecnologa, (especialmente con flor-18 deoxiglucosa ) como necesaria,
pues puede mejorar la relacin costo beneficio en pacientes con cncer,
optimizan la seleccin de terapias de alto costo y adems evitando cirugas
innecesarias en los casos muy avanzados. En investigacin se utilizan
diversos marcadores de flujo, metabolismo e incluso receptores.

GRACIAS A
TODOS