FRECUENCIA DE

MICRONÚCLEOS EN UN
GRUPO DE TRABAJADORES
DE UNA EMPRESA
METALÚRGICA
LABORALMENTE EXPUESTOS
A AGENTES
CONTAMINANTES.
INTRODUCCIÓN.

 LOS CONTAMINATES AMBIENTALES.

 Sustanciasextrañas al medio ambiente

producidas por las actividades del
hombre.
 Lassustancias contaminantes se
encuentran ampliamente diseminadas
en el medio ambiente y su producción
se ha incrementado con el desarrollo
industrial de los últimos años.
 El desarrollo industrial va acompañado por un
aumento de la contaminación ambiental.

 El aire contiene un numero de contaminantes

menor comparado con el agua y el suelo; al
igual que los ambientes rurales que tienen
bajas posibilidades de contaminación que las
áreas urbano-industriales.

 Los ambientes de trabajo acumulan

sustancias toxicas a altas concentraciones, lo
que no sucede en los ambientes de la
población en general.
 Unindividuo está expuesto a un agente
contaminante ambiental cuando los límites
externos del organismo entran en contacto
con dicho agente que se encuentra en el
medio.

 Elagente puede ser de acción directa o

indirecta posteriormente interactúa con el
ADN y si el daño no se repara
eficientemente, se fijará y expresará en las
siguientes estirpes celulares.
 La inducción del daño genético se da en
varios pasos:

 Absorción

 Distribución

 Eliminación (por biotransformación o

excreción)

 Puede ocurrir acumulación en tejidos

selectivos.
Los agentes genotóxicos.

 Agentes químicos, interactúan con

macromoléculas (pesticidas, metales,
aditivos, gasolinas).

 Bencenos, HPA, y metales como el Cr y

Ni, son considerados carcinógenos y
mutagénicos y asociados con cáncer
pulmonar y enfermedades respiratorias.
 Radiaciones ionizantes y no ionizantes
afectan funciones biológicas, ocasionan
rupturas en las cadenas ADN y en
cromosomas, incrementando la
frecuencia de MN.

 Drogas antineoplásicas son

carcinógenas, mutágenas y
teratógenas, su manejo involucra
riesgos potenciales.
 Los metales.
 Esenciales para las células, cofactores de
sistemas enzimáticos, presentes en
macromoléculas.

 Indispensables para la vida. Los metales pesados

(MP) pueden ser tóxicos.

 Metal tóxico: si es perjudicial para el crecimiento

o el metabolismo celular al exceder cierta
concentración.

 Metales pesados: aquellos con una densidad 5

veces superior a la del agua.
 Mecanismos de acción.
 No se conocen con exactitud. Pueden ocurrir
sustituciones debido a sus características físicas
y químicas similares.

 Reemplazos en sistemas enzimáticos,

competencia en los sitios de inserción, afinidad
por los –SH de las proteínas alterando su forma
y función.

 Alteración del transporte de iones, rupturas en

cromosomas y cadenas ADN ocasionando
aberraciones cromosomicas.
 Efectos de los metales en el organismo.
 Arsénico
 Cáncer pulmonar, de piel, efectos sobre la
reproducción.
 Cadmio
 Cáncer de próstata y sarcoma local.
 Cromo
 Cáncer pulmonar y nasal.
 Níquel
 Carcinoma pulmonar, senos paranasales.
 Plomo
 Anemia, linfomas, carcinomas y sarcomas
renales.
 El plomo interfiere con la síntesis del hem al
sustituir al hierro.

 El mercurio se acumula en la cadena

alimenticia ocasionando intoxicaciones y hasta
envenenamientos en humanos.

 Se han obtenido cánceres experimentales con

berilio, cobalto, selenio,plomo, mercurio y zinc.

 Inhalación: principal fuente de exposición;

también se presentan efectos tóxicos por
contacto dérmico y de las mucosas.
 Pruebas de genotoxicidad.
 Genotoxicidad: toxicidad que afecta al material
genético y manifiesta una expresión retardada en
el tiempo.

 Existen múltiples análisis para detectar eventos

mutantes, lo que refleja la diversidad de
mecanismos de formación y diferencias entre
metodologías.

 Test de Ames, cultivos de células mamíferas,

análisis de micronúcleos y aberraciones
cromosómicas, entre otros.
Los micronúcleos.
 Los micronúcleos (MN), se forman de
fragmentos acéntricos (FA) o cromosomas
enteros rezagados que, al final de la mitosis
forman una envoltura nuclear, permanecen
cerca del núcleo principal.
 Existen 3 mecanismos de formación:

 Pérdida mitótica de FA de cromosomas.

 Consecuenciasmecánicas de las rupturas

cromosómicas y sus intercambios.

 Perdida mitótica de un cromosoma entero.

 La técnica de micronúcleos.
 Sencilla, rápida, de bajo costo, capaz de
determinar potenciales genotóxicos de agentes
físicos y químicos.

 Potencial no solo para detectar clastógenos, sino

también químicos inductores de aneuploidías.

 Mayor poder estadístico (mas células evaluadas).

 Potencial para ser automatizado usando el

análisis de imágenes.
Otras atipias nucleares.
 Son relativamente comunes en los frotis bucales
y pueden confundirse con los MN.
 Siun grupo de sujetos expuestos
presenta frecuencias de MN mas altas
que un grupo control, se considera al
producto o agente analizado, capaz de
inducir daños cromosómico estructural
y/o numérico.

 Lamayoría de los agentes

carcinógenos humanos son positivos
en las pruebas de MN en mamíferos.
OBJETIVO.

 Determinar la frecuencia de
micronúcleos en células epiteliales de
un grupo de trabajadores laboralmente
expuestos a metales en una empresa
metalúrgica de la ciudad de Mérida
Yucatán México, comparándolos con su
grupo control.
HIPOTESIS.

 Los individuos expuestos a agentes

metálicos contaminantes presentan
incremento en la frecuencia de
micronúcleos en comparación con las
frecuencias de los sujetos del grupo
control.
DISEÑO EXPERIMENTAL.
 Tipo
de estudio: comparativo, transversal,
observacional, de casos y controles.

 Población:Estuvo constituida por un grupo

de sujetos expuestos y un grupo control,
pareados por edad y sexo.
Criterios de inclusión (expuestos).
 Laboraren la empresa seleccionada y
no tener factores de exposición con
efecto genotóxico.

 Antigüedad de mínimo 6 meses en la

empresa.

 Aceptar voluntariamente participar en el

estudio
Criterios de inclusión (control).
 Ser clínicamente sanos.

 Aceptar participar voluntariamente en el

estudio.

 Tener edad y sexo pareados con los

sujetos expuestos.

 Sinexposición a factores con efecto

genotóxico.
Criterios de exclusión (expuestos).
 Menos de 6 meses laborando en la industria
seleccionada.

 Antecedentes de trabajo previo con

sustancias genotóxicas.

 Presentar enfermedades reconocidas con

inestabilidad cromosómica.

 Exposición frecuente, fuera de la empresa, a

factores que causan genotoxicidad.
Criterios de exclusión (controles).

 Laborar con sustancias genotóxicas.

 Antecedentes de trabajo previo con

sustancias genotóxicas.

 Presentar enfermedades reconocidas

con inestabilidad cromosómica.

 Con exposiciones frecuentes a factores

que causen genotoxicidad.
 Para la selección de los sujetos expuestos se
aplicó un cuestionario a los trabajadores de
la empresa seleccionada.

 Incluyó datos personales, historia laboral,

hábitos personales, y antecedentes
patológicos y reproductivos.

 Se escogieron 10 sujetos que cumplieron los

criterios de selección; el grupo control se
formó con 10 sujetos de la población general
pareados por edad y sexo con los expuestos.

 Se garantizó anonimato y confidencialidad

con el manejo de los resultados.
 PROCEDIMIENTO.

 Serealizó la recolección de la muestra en

ambos carrillos bucales, desechándose el
primer raspado, se depositó en tubos de
ensaye con solución salina isotónica estéril.

 Se marcaron anotando el nombre del

participante, fecha del muestreo y se
transportaron al laboratorio para su
procesamiento siguiendo la técnica de
Tolbert y cols. modificada.
 Para obtener las células las muestras
se lavaron por centrifugación y se
resuspendieron en solución hipotónica
débil, posteriormente se fijaron con
solución carnoy en portaobjetos y se
dejaron secar al aire.
 Para el proceso de tinción los
portaobjetos se lavaron con agua
destilada y se sometieron a hidrólisis con
HCl 1N a temperatura ambiente y a 60ºC,
se lavaron en agua destilada y
posteriormente se tiñeron con el reactivo
de Schiff y se eliminó el exceso de
colorante de las placas con agua
corriente.
Requisitos que deben cumplir las células y los
MN`s para ser incluidas en el conteo celular:

 Se contaron 1000 células, cuando la

frecuencia fué menor de 3/1000, se evaluó
3000 células por individuo.
 Análisisestadístico: frecuencia de MN,
promedios de edad y tiempo de exposición
(TE) y sus desviaciones estándar.

 “t”Student: comparar diferencias entre las

frecuencias del grupo expuesto y el control.

 Correlación de Pearson: para conocer

asociación entre la frecuencia de MN con la
edad y el TE.
 RESULTADOS.
 Grupo expuesto: rango de edad.- 29 a 52 años,
promedio de 38.10± 8.88 años; para el grupo
control los datos fueron similares.

 Promedio del tiempo de exposición: 14.40± 6.65

con un rango de 6 a 23 años.

 “t” Student para MN`s:

 Expuestos: 8.62 ± 7.90, p=0.006.
 Controles: 6.60 ± 1.39.
 Se encontró diferencia significativa (p≤ 0.05).
RESULTADOS.
 Correlación de Pearson:
 Edad vs MN: r=-0.153, p=0.673.
 T.E. vs MN: r=-0.202, p= 0.576.

 No se encontró asociación entre la

frecuencia de MN con la edad ni con el
tiempo de exposición.

 Todos los resultados de las pruebas

estadísticas se obtuvieron con el
paquete estadístico SPSS 9.0
 DISCUSION.
 Seobservó diferencia significativa en la frecuencia
de MN en células epiteliales entre los grupos
expuesto y control.

 Los resultados se atribuyen a la exposición laboral

a los MP.

 Polvosde metales y humos causaron el daño al

material genético; ambiente laboral sin otros
elementos de riesgo genotóxico.
 Sedesconoce a que metales se
expusieron los trabajadores; manipulación
de aleaciones de diferentes metales.

 Estudiosanteriores reportan frecuencias

altas de MN por exposición a humos de
metales y otros agentes genotóxicos.

 Existen otros estudios con incrementos no

significativos.
 Variabilidadexplicada por diferencias en
los niveles de exposición de los sujetos
estudiados.

 Se demostró la eficiencia de la técnica de

MN en células bucales, a pesar de que se
le considera menor que la eficiencia del
MNT en linfocitos.

 Latécnica con ambos tipos celulares es

capaz de dar resultados seguros y
confiables para determinar potenciales
genotóxicos de una sustancia.
 No se encontraron asociaciones
significativas entre la frecuencia de MN
con la edad y TE, para descartar su
asociación por completo se debe ampliar
el número de muestra.

 Resultados similares reportan no

asociación entre variables analizadas y
otros si reportan asociaciones.

 Explicado por las diferencias de

sensibilidad entre agente de exposición y
los individuos.
 Cuando el tejido blanco es el estudiado el
efecto del compuesto es más evidente al
evaluar sustancias de distinto estado físico.

 Factores que influyen en los resultados:

 Criterios de conteo, número de células
contadas, cigarros, alcohol, drogas, edad y
sexo.

 Debe considerarse que el riesgo genético

no solo depende del potencial genotóxico
sino también de la susceptibilidad genética
hacia sus efectos adversos.
CONCLUSIONES.
 Los individuos laboralmente expuestos
a los agentes contaminantes
presentaron un incremento de la
frecuencia de MN en sus células
epiteliales bucales en comparación con
su grupo control.

 Los trabajadores de esta industria

deben considerarse un grupo de riesgo
por su exposición laboral.
 Al no identificarse otras fuentes de exposición
genotóxica, podría considerarse a los metales
como el agente xenobiótico de exposición.

 Los metales representan un grupo de

contaminantes con potenciales genotóxicos que
pueden afectar a las células a diversas
concentraciones.

 La técnica de MN en células epiteliales es un

biomarcador confiable para determinar los
posibles potenciales genotóxicos de una
sustancia.
RECOMENDACIONES.

 Realizarotros estudios de biomonitoreo

para identificar el tipo de daño
cromosómico inducido por los metales.

 Implementar medidas de seguridad

(cubrebocas, guantes, mascaras, ropas
de trabajo, buena ventilación)
 Usode filtros para reducir partículas en
suspensión en humos arrojados a la
atmósfera.

 Difundir
información sobre los efectos
de estos agentes en el organismo, para
generar un interés en la protección e
implementación de medidas de
seguridad.
Consumatum est
 Este trabajo se realizó en las
instalaciones del Laboratorio de Genética
del Centro de Investigaciones Regionales
“Dr Hideyo Noguchi” de la Universidad
Autónoma de Yucatán.