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HPLC-RMN/ LC-RMN

A RMN uma tcnica de


espectroscopia nuclear

Matria

Espectro de Radiao
Eletromagntica

Curto
Energia

Comprimento de
onda ()

Longo
Energia

Grandeza fsica envolvida em


RMNSPIN
NO POSSUE

NO APRESENTAM MOMENTO
GULAR
12 ASSOCIADO
16

NO EXIBEM PROPRIEDADES
GNTICAS
6
8

C O

AUSNCIA 32
DE SINAIS DETECTVEIS
R RMN

O SO APLICVEIS
ANLISES DE
16
N

H
13
6

C
Spi

Princpio

Ncleos magneticamente ativos so expostos um campo magntico


externo;
Absorvem energia e saltam para nveis energticos superiores;
Ao retornarem, liberam energia, que ser processada por um
computador e interpretada na forma de um grfico.

No Espectro de
RMN

Campo
baixo

Campo
alto

Onda Contnua (RMN CW)

RMN

Onda pulsada

Onda
Principal vantagem: alta razo sinal/rudo para um mesmo
pulsada
tempo de medida
RMN no Domnio de Tempo (RMN-DT)
Utilizam ms permanentes de baixo campo
magntico (<60 MHz) e menos homogneos
Baixa resoluo
Intensidade x Tempo
RMN com Transformada de Fourier (RMNTF)
Utilizam ms oscilantes de alto campo
magntico
(>100 MHz), mais homogneos e estveis.
Alta resoluo

Interface LC-RMN

Modo de Operao: Stopped


Flow
Evaporao do
solvente

Dissoluo do
composto em
solvente delterado

Equipamento
de RMN
Tubo de RMN
(5mm)

Modo de Operao:
Continuous - Flow

Pr-requisitos

Instrumentao do HPLC;
Instrumentao da RMN;
Sonda de fluxo contnuo;
Vlvula instalada antes da sonda para registrar tanto o espectro no
modo stopped-flow quanto continuous flow.
Uso de solventes deuterados j na fase de separao por HPLC

LC-RMN
Tcnica hifenada;
Fornece informaes estruturais da molcula;
Tcnica com baixa sensibilidade;
Alto custo;
Condies de fase reversa
Mtodos de supresso de
solvente

Cuidados gerais
Amostras devem ser solveis em solventes deuterados
Ex. CDCl3,DMSO-d6,MeOH-d4,MeCN-d3,acetona-d6,benzeno-d6,D2O.
Quantidade ideal de amostra
RMN de H 5-10 mg
(amostras muito concentradas alargam as linhas do espectro)

Observaes:
As amostras devem ser filtradas, pois a presena de partculas insolveis pode
prejudicar o ajuste de homogeneidade do campo magntico.
Transferir a soluo para um tudo de RMN de 5 mm limpo, seco e isento de
trincas.
Aps a anlise, a amostra deve ser imediatamente retirada do tubo de RMN, pois
ela poder ficar parcialmente impregnada em sua parede, tornando com o tempo
inadequado para anlise de RMN.

Condies Cromatogrficas
- Coluna C18 250 mm x 4,6 mm
- Fase mvel : D2O com 1% cido Triclorofluoractico 80:20
Acetonitrila
- Fluxo 1 mL/min
- UV 254 nm
- HPLC acoplado a RMN stopped-flow
- Amostra um extrato metanlico diludo em D2O

Standard

20-hydroxyecdysone

2-deoxy-20-hydroxyecdysone

Resultado Cromatogrfico

Ecdisterides presentes no extrato


de Silene otites
(A) 20hydroxyecdysone

(B) 2-deoxy-20hydroxyecdysone

(C) 2-deoxyecdysone

Estruturas Qumicas

(A) 20hydroxyecdysone

B) 2-deoxy-20hydroxyecdysone

(C) 2-deoxyecdysone

Concluso
Estes resultados demonstram claramente que
o HPLC-RMN eficientemente utilizvel para
a identificao dos ecdisterides presentes
neste extrato parcialmente purificado atravs
da
separao
realizada
no
HPLC
de Silene otite.

Referncias
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