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Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de

Coimbra
Departamento de Zoologia
Diferenciação e Desenvolvimento

Trabalho realizado
por:
Ana Carina Maia
Ana Cláudia Pires
Ana Rita Graça
Diana Girão
Coimbra, 2 de Junho de
Hemorragia Intracerebral (ICH)
 Mortalidade aproximadamente de 50 % e
perda de capacidades neurológicas em
sobreviventes.

 20 % dos pacientes com ICH morrem 3


dias após o início da doença.

 Representa pelo menos 15 % de todos os


ataques na população ocidental. http://www.igc.gulbenkian.pt

 Na população asiática representa 50 – 60


% de todos os ataques .
Hemorragia Intracerebral (ICH)

Terapia médica:

 Remoção mecânica do hematoma

Eficácia
 Prevenção da formação do edema com drogas
Limitada

 Redução da pressão intracraniana


http://ptl.fenam2.org.br/portal/sho
wData/116954
Células Estaminais Neuronais
(NSCs)
Ao serem inseridas em modelos animais de ataque
eles irão apresentar uma melhoria nas
deficiências neurológicas.

Potencial terapêutico na reparação cerebral em


pacientes com ICH

http://universofarmaceutico.blogspot.com/ http://www.bbc.co.uk
Células Estaminais Neuronais
(NSCs)
NSCs isoladas de cérebro humano de feto

Propagadas Transplantadas para


o cérebro de
modelos animais de ataques

Permitindo restaurar a
função cerebral

http://saude.hsw.uol.com.br
Células Estaminais Neuronais
(NSCs)

• HB1.F3 (Linha de NSC humana) imortalizada

cendo.blogspot.com
http://sofiareeducandoeemagre
Apresentam um grande valor como fonte celular na
substituição de células no tratamento de desordens
neurológicas.
Procedimento
1. Tecido telencefálico humano de um embrião foi
dissociado em células isoladas.

www.ims.uni-stuttgart.de
2. Geração de NSC humanas imortais

pLSN.v-myc
NSC
Vector codificante de v- HB1
Linhagem
celular
myc

.jp
www.abcam.co HB1.F3
Linha
celular
Not
a:
HB1.F3 F3.Lac
Z
3. Imunocitoquímica para culturas

• Incubação com variados anticorpos específicos e

DAPI

• Microscopia de Fluorescência

4. Análise citogenética

www.olympuslatinoamerica.com
5. Modelos com ratos com ICH
Indução de ICH por administração intrastriatal de
colagenase.

www.thefinalsprint.
com
4.bp.blogspot.c
om
6. Transplante celular

F3.La
As NSC F3.LacZ foramcZ
dissociadas em células
individuais.

Grupo de estudo
Recebeu a suspensão celular de NSC
F3.LacZ.

Grupo de Controlo
Recebeu PBS.
7. Teste de Comportamento

 Teste de Rotarod

www.eurekalert.org

 Teste de posicionamento dos membros


8. Histologia e Imunohistoquímica

 Análise de áreas cerebrais marcadas para identificação da lesão


ICH;

Análise com anticorpos específicos para identificação das células


transplantadas;

Microscopia de Fluorescência.

passesvitesstrigo.blogsp
ot.com
Resultados
1. Caracterização das NSC humanas imortalizadas
• Cariótipo
normal
• Receptores específicos envolvidos na migração
celular
• Pluripotentes
• Divisão
assimétrica:

NSC Célula
Diferenciada

Neurónio + Células da glia


s
2. NSC melhoram défices funcionais em ratos com ICH

Grupo NCS -
Transplantados

Este grupo ao fim de duas


semanas teve uma melhor
performance, em relação ao
grupo de Controlo, persistindo
e seu efeito por mais de 8
semanas.

O gráfico A refere-se ao Teste de Rotarod e o gráfico


B refere-se ao Teste de posicionamento dos membros
3. NSC transplantados migram, sobrevivem e
diferenciam-se em neurónios e astrócitos
4. Regulação da expressão do
oncogene v-myc

Não ocorre a formação de


tumores

Regulação espontânea do v-myc nas NSCs

www.kaminhos.com
Discussão
• NSCs humanas são fonte valiosa de células para
terapia de pacientes com ICH baseada em células
estaminais.

www.bitspin.net
Discussão
• Linhas estáveis de NSCs clonais humanas:

 Fornecem células humanas Difíceis de obter!

 Fáceis de manter e multiplicar. 2.bp.blogspot.co


m

 Fornecem uma população homogénea de células.

 Fonte de células humanas prontas para serem implantadas em


regiões definidas do sistema nervoso.
- Corrigir defeitos específicos
- Restaurar funções
neurológicas
Discussão
• Cérebro e coluna vertebral com lesões

Receptivos a transplantes externos de NSCs, induzindo


a sobrevivência e a diferenciação destas células.

• NSCs implantadas migram preferencialmente para áreas


de patologia.
Discussão
As células F3 migram do local de implantação até
zonas bastante afastadas

Os potenciais migratório e de diferenciação são


fortemente afectados pelos sinais produzidos
pelas áreas vizinhas do cérebro

spacesuityoga.files.wordpress.com
Discussão
• NSCs multipotentes transplantadas para o cérebro de
ratos com um défice em mielina.

Oligodendrócitos

www.regenecell.com
Discussão
Terapia Celular:

 Estratégia promissora para tratamento de


doenças humanas.

 Objectivo:
• substituir células perdidas

• restaurar funções de células ou tecidos danificados


por doenças ou traumas

Transplante de NSCs renováveis, homogéneas e


multipotentes!
Discussão
• O transplante cerebral de F3 NSCs reduz
significativamente:

 Défices motores e neurológicos em animais


modelo de:

• Doença de Parkinson
• Doença de Huntington
• Isquémia Cerebral

www.qpcpesquisa.com
Discussão
Linhas de NSCs humanas imortalizadas estáveis

Expandidas facilmente

População renovada e homogénea de neurónios e células da


Glia

Recursos para estudos sobre


Neurobiologia do desenvolvimento;
Terapias celulares e genéticas;
Pesquisas e desenvolvimento de novas drogas e tratamentos.
Bibliografia
• Hong J. Lee, Kwang S. Kim, Eun J. Kim, Hyun B. Choi, Kwang
H. Lee, In H. Park, Yong Ko, Sang W. Jeong, Seung U. Kim.
Brain Transplantation of Immortalized Human Neural Stem
Cells Promotes Functional Recovery in Mouse Intracerebral
Hemorrhage Stroke Model. Stem Cells 2007; 25: 1204 –
1212.
• Apontamentos das aulas teóricas

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