Biotecnologia no

Melhoramento Animal
Dionia Magda Everling
Doutoranda em Zootecnia
Melhoramento Gentico

O que isso???
qualquer tcnica que utilize
organismos vivos ou suas partes,
para fazer ou modificar produtos,
melhorar plantas ou animais ou
desenvolver microorganismos para
usos especficos.

Amplificao reprodutiva
Reproduo animal: Limitao na
capacidade natural na reproduo
Capacidade de servio
Produo e qualidade de smen
Nmero de prognie por reprodutoras

Inseminao Artificial

Processo de espermatognese:
Bovinos 61 dias;
Eqinos 55 dias;
Ovinos 47 dias e
Sunos 39 dias;

Fatores que afetam a produo de espermatozides

Idade
Ambiente
Nveis hormonais
Tamanho do testculo

Etapas da Inseminao Artificial

Seleo de machos
Informaes sobre os animais ( DEP)

Coleta do smen
Vagina artificial
Eletro ejaculao
Mtodos manuais

Avaliao do smen

Motilidade
Concentrao
Morfologia
volume

Diluio do smen
Utilizao do smen
Fresco
Refrigerado
Congelado

Usos da Inseminao Artificial

Melhoramento gentico
Diminuir a relao macho/fmea
Organizao de Testes de prognie
Acasalamento em diferentes raas
Absoro de raas que se deseja criar
Conservao de raas em perigo de extino
Controle de doenas
Eliminao de custos de produo e manuteno de
machos no estabelecimento
Facilidade de coletas de dados sobre paternidade
Disseminao de genes superiores de animais
corretamente avaliados que levam ao aumento de
produo

Transferncia de embrio (TE)

Definio: Implantar em fmeas
receptoras embries produzidos por
fmeas doadoras (0 at 30 Embries)
No que consiste a TE???

Estimulao hormonal superovulao

Inseminao Artificial ou fecundao Natural
Coleta e armazenamento de embries
Preparao das receptoras e transferncia

ETAPAS DA TE
Seleo de doadoras para TE
Machos e fmeas com gentipo comprovadamente
superiores
Escolha das caractersticas a serem melhoradas
Escolha das receptoras
Aspectos sanitrios

Superovulao
Resposta das doadoras ( 10 -15 % no respondem)
Hormnio mais utilizado FHS

ETAPAS DA TE
Inseminao Artificial
7 dias aps o inicio da superovulao;
Utiliza-se smen congelado.

Coleta de embries
6-7 dias aps a IA;
Recuperao de embries (transcervical)
PBS a 25C, Ph 7,2
Sonda de coleta, fixada num dos cornos
Taxa embrio x corpo lteo : 70 %

Etapas da TE
Isolamento e classificao de embries
Avaliao morfolgica: microscopia ptica
Observa-se

Tamanho;
Forma ;
Cor ;
Citoplasma;
Membrana pelcida e vesculas

6 categorias ( excelente e no fecundado)

Etapas da TE
Estocagem de embries
Objetivo: Manter a viabilidade dos embries
por varias horas ou dias fora do trato
reprodutivo da fmea
A fresco: fmeas aptas a transferncia.
Congelado (Crio preservao): glicerol,
etileno-glicol, ISOCRIOGEN.
Tcnicas de descongelamento: Banho maria,
re-hidratao

Etapas da TE
Sincronizao do ciclo estral das
receptoras
Objetivo: conseguir que as fmeas estejam
em cio no momento desejado tanto para a IA
como TE.
Melhora as chances de implantao, melhora
a taxa de prenhes
Hormnios utilizados: prostaglandina,
progestagenos.

Etapas da TE
A transferncia do embrio (inovulao)
Objetivo: Posicionar o embrio no tero da receptora
Tcnica: No cirrgica ( inovulao trans-cervical)
Local da introduo do pailletes: corno uterino com
deposio do embrio na juno tero-tubrica.
Resultado: 2 a 3 meses aps a TE realiza-se o
diagnostico de gestao nas vacas receptoras, que 9
meses aps a TE daro origem a animais
geneticamente semelhantes a prognie das vacas
doadoras de embries e aos touros utilizados na IA.

FATORES QUE AFETAM A

EFICCIA TE:
Resposta individual de cada vaca a estimulao
hormonal
Nvel tcnico da equipe que conduz a TE;
Escolha das tcnicas da coleta e TE;
Grau de sincronizao do cio entre o ciclo estral das
fmeas doadoras e receptoras;
Fertilidade natural das doadoras;
Qualidade do smen utilizado
Qualidade dos embries
Nutrio e manejo dos animais
OBS: Embries normais, equipe capacitada,animais
saudveis e em poca de ciclo adequados : taxa de
eficincia de 50 %.

USOS da TE
Obteno de maior nmero de prognie de
fmeas de alto valor gentico;
Expanso rpida de ncleos de vacas
selecionadas;
Controle na transmisso de doenas;
Comrcio de embries;
Teste de homozigose para genes dominantes.
Conservao de raas em perigo de extino,
pela crio-preservao

Limitaes da TE
Impacto menor no melhoramento gentico
do que a IA;
Tecnologia complexa e mais cara;
Uso de mo de obra especializada.

SEXAGEM DE SEMN

Determinao do sexo do espermatozide: Y ou X

Vantagens:

Melhor programao das populaes

Maior ganho na produo de carne e leite
Facilidade em direcionar reposio de matrizes
Ganhos genticos e reduo de tempo na seleo de plantis
Garantia de acurcia acima de 85% na determinao do sexo
Melhor direcionamento nos testes de prognies
Poder de deciso passa para as mos do pecuarista

A aplicao comercial de smen sexado j existe no Brasil de 2004.

Atualmente a acurcia fica em torno de 90 %.
Devido ao alto custo, em relao ao smen no sexado,
recomenda-se utilizao de fmeas com bom histrico reprodutivo,
e em condies ideais de mineralizao, vermifugao, vacinao e
conforto

Fertilizao IN VITRO
Definio : Embries so produzidos fora do
corpo da fmea
Etapas:
Coleta de ovcitos na fmea: Laparosopia
Maturao dos ovcitos in vitro;
Capacitao dos espermatozides;
Desenvolvimento do embrio at blastocisto.
Implantaoes de embries nas femeas
receptoras.
OBS: Eficincia da tcnica at 40% (embries
viveis / ovcito maduro)

Sexagem de embries
a disponibilidade de embries cujo o
sexo j esteja previamente determinado.
Tcnica: Amplificao enzimtica dirigida
de DNA ( PCR), com kit comercial.
Vantagem: Produo de machos ou
fmeas de acordo com os objetivos da
produo
Desvantagens: As tcnicas ainda so
caras e sujeita a erros

CLONAGEM
Definio: a clonagem um processo de reproduo
assexuada, onde so obtidos indivduos geneticamente
iguais (microorganismo, vegetal ou animal) a partir de
uma clula-me
Ocorre de forma natural ano caso de gmeos univitelneos
um meio de propagao comum em plantas, bactrias e
protozorios
Ainda no existe comercialmente a venda de embries
clonados
Uso no melhoramento: Possibilidade da multiplicao de
animais geneticamente superiores em larga escala.
Desvantagem no melhoramento gentico: Perda da
variabilidade gentica, no aspecto de resistncia a
doenas, fatores climticos

Animais trangnico
Definio : Possui em seu genoma um DNA estranho
(de outra espcie geralmente), integrado de forma
estvel, em que se transmite a sua descendncia de
acordo com as leis de gentica Mendeliana.
Tcnica: micro manipulao ou virus: introduo,
modificao ou inativao de um gene.
Aplicao no melhoramento: aumento de produo:
carne, l, resistncia a doenas, e modificao de
produtos (maciez da carne, nvel colesterol da carne,
lactose)
Limitao: tcnica ainda em desenvolvimento, aceitao
quanto ao consumo dos produtos, pouco connheimento
sobre os efeitos na sade humana.

Estudo com animais trangnicos

Sunos: bGH ( hormnio de crescimento bovino)
Vantagens: aumento do crescimento; aumento na
converso alimentar; mudana na composio da
carcaa; reduo da espessura de gordura
subcutnea
Efeitos adversos: aumento dos nveis circulantes do
plasma ( ulceras, artrites problemas cardacos,
dermatites e IR: pouco tempo de vida)

Bovino: lacto albumina ( protena humana)

Esse leite transgnico mais nutritivo para humanos
que o leite natural, e poderia ser introduzido na
alimentao de crianas com carncia de nutrientes
especficos .

Controle na produo de Animais

trangnicos
Comisso do Codex alimentarius (Lei alimentar
ou Cdigo alimentar, em latim), estabelecida
conjuntamente pela FAO (Organizao das
Naes Unidas para a Agricultura e a
Alimentao) e pela OMS (Organizao Mundial
da Sade), est trabalhando em colaborao
com vrios pases, dentre eles o Brasil, com o
objetivo de criar normas de aplicao
internacional visando a segurana de alimentos
produzidos a partir desses animais.

MARCADORES GENTICOS
Identificar ou etiquetar alguma coisa
1923: feijo com ausncia de cor escura no tegumento x
tamanho do semente : seleo de forma indireta
(tegumento claro = marcador
Qualidade de um bom marcador

Herdvel
Fcil observao
Herdabilidade alta
Intimamente relacionado ao aleloque desejamos selecionar

OBS: Essas qualidades tornam mas eficientes a seleo

indireta
Os marcadores genticos podem ser morfolgiocos e
moleculares.

MARCADORES MORFOLOGICOS
Fentipo de fcil identificao
Normalmente determinada por nico alelo.
Exemplo 1: planta de milho jovem verde clara x
esterilidade masculina ( fentipo importante na produo
de hbrido mas de difcil identificao = esto em lcus
bastante prximos e tem alta probabilidade de serem
herdados juntos)
Exemplo 2: cor amarela do milho x teor de vitamina (o
mesmo alelo para ambas caractersticas: mais fcil
selecionara pela cor)
Limitao dos marcadores morfolgicos:
Ocorrncia em numero reduzido
Muitas caractersticas de interesse econmico no tem marcador morfolgico
Muitos marcadores que apresentam baixa herdabilidade

Marcadores moleculares
Marcadores de protenas ( Produtos direto
dos alelos);
Marcadores que utilizam o prprio DNA
(so os prprios genes ou seqncias de
DNA situadas prxima ao gene de
interesse):

RFLP
PCR
AFLP
Microssatlites

Marcadores de protenas
-bioqumicos
Mais comuns: isoenzimas ( esterases,
fosfatases, peroxidases...)
Procedimento consiste na extrao e
identificao da protena.
Exemplo: Cevada izoenzima esterase x
resistencia um virus ( seleo indireta)
Vantagem:
menor custo
Codominncia: identifica homozigotos e heterozigotos

Limitaes:
Reduzida variabilidade
Marcadores em numero reduzido

Marcadores que utilizam o prprio

DNA
So os prprios genes ou seus vizinhos, isto
seqncias de DNA situadas prxima ao gene
que se deseja marcar
Vantagens;
Grande variabilidade entre indivduos
Numero de marcadores suficientes para marcar todos os
alelos de todos os genes que se deseja marcar.

Desvantagens:
Tcnicas laboratoriais mais caras, que os bioquimicos e os
morfolgicos

RFLP Significa polimorfismo de comprimentos de

fragmentos de restrio (obtidos por corte de fita dupla de
DNA).

Isolamento do DNA dos indivduos

Enzimas de restrio que geram milhares de fragmentos
Separao por eletroforese ( tamanhos das seqncias)
Observa-se polimorfismo entre indivduos diferentes
Hibridizao com DNA marcado radioativamante
(sonda), P radioativo
Fotografia do fragmento identificado pela sonda
Admitindo-se que o fragmento de DNA identificado pela
sonda esteja intimamante ligado a um alalo de interesse,
pode se selecionar esse alelo por meio desse
fragmento. Assim o fragmento RFLP funciona como um
marcador ou etiqueta do alelo de interesse.

PCR
Polymerase Chain Reaction
Reao de polimerizao em cadeia
um mtodo utilizado para amplificar, in vitro,
uma seqncia especfica de DNA.
Ao contrario do RFLP que marca um segmento
do DNA, ocorre a sntese especifica de certos
segmentos de DNA.
Como ocorre?
Utilizao de um pequeno segmento: Primer
(iniciador) de um segmento desejado.
Vrios ciclos geram um nmero de seqncias
idnticas de DNA.

AFLP
AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphism)
Significa o Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos
Amplificados.
O AFLP combina a especificidade, resoluo e poder de
amostragem da digesto com enzimas de restrio e a
praticidade e velocidade do PCR.
ETAPAS
Clivagem com 2 enzimas de restrio;
Ligao de adaptadores especficos;
So sintetizados inicializadores complementares aos
adaptadores;
Amplificao seletiva ( reao de PCR)
Eletroforese.

Microssatlites
Seqncias curtas (300 pb)
Repeties em tandem (6 a 8
nucleotdeos = mais comuns TG/AC)
Mais utilizada em mapeamento gentico,
devido a sua grande

 P= G+A

VP = VG + VA

Uso de marcadores no estudo de

caracteres quantitativos
Caracteres quantitativos
Controlados por vrios genes de pequeno efeito
Sofrem maior influencia ambiental
No se sabe quanto ele contribui para o fentipo

QTL: Quantitative Trait Loci; Locos de um caractere

quantitativo identificado por marcadores moleculares.
Finalidade: determinar quanto de um caractere
quantitativo explicada por um ou mais marcadores
Como os caracteres quantitativos so medidos por meio
de mdias os varincias, pode-se ter idia da
porcentagem do fentipo do caractere que explicado
pelo marcador.

QTL
So regies cromossmicas relacionadas com
variao fenotpicas das caractersticas
quantitativas
Limitaes:
Dificuldade de avaliao dos caracteres quantitativos aliados
a necessidade de ligao dos marcadores com os QTL
Dificuldade de obteno dos prprios marcadores
Estudo difcil e trabalhoso

Obs: H necessidade de mais pesquisas para

tornar mais eficientes o emprego dos
marcadores moleculares no estudo das
caractersticas quantitativas