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Sinalizao Celular

Receptores so protenas que interagem com seus ligantes,


ativando vias de sinalizao intracelulares, gerando

efeitos biolgicos.

ligante

vias de sinalizao

receptor
efeitos biolgicos

ncleo

domnio externo

meio
extra-celular

receptor

domnio transmembrnico

meio
intra-celular

domnio interno

Efeitos Biolgicos:
correspondentes ao tipo celular e natureza do ligante

ligante
extracelular
receptor

intracelular

vias de sinalizao

efeito biolgico

alterao no potencial de membrana


dilatao/contrao celular
estimulao/inibio de expresso gnica
etc....

Vias de Sinalizao
so reaes em cascata no meio intracelular,
que traduzem os sinais extracelulares,
via ativao de segundos mensageiros.

ligante
extracelular
receptor

intracelular

vias de sinalizao
efeito biolgico

Ativao
de segundos mensageiros

Ligantes
so substncias capazes de ativar receptores
e desencadear efeitos biolgicos
Peptdeos, neurotransmissores, aminocidos,
hormnios, drogas, etc..
ligante

extracelular
receptor

intracelular

vias de sinalizao

efeito biolgico

Molcula sinalizadora

TRANSDUO DE
SINAIS

CRESCIMENTO

SOBREVIVNCIA

PROLIFERAO

DIFERENCIAO

MIGRAO

Passos envolvidos na comunicao


clula-clula
(1) Sntese da molcula sinalizadora por
uma clula
(2) Liberao da molcula pela clula
sinalizadora
(3) Transporte da molcula sinalizadora
para a clula alvo
(4) Interao da molecla sinalizadora
com um receptor celular na clula alvo
(5) Desencadeamento da sinalizao
intracelular
(6) Alterao do metabolismo, funo,
expresso gnica ou desenvolvimento
da clula alvo
(7) Remoo do sinal e consequente
trmino da resposta celular

Molculas sinalizadoras podem atuar


localmente ou a distncia
Sinalizao endcrina

Sinalizao parcrina

Vaso sanguneo

Secreo do hormnio
pela glndula endcrina no
vaso sanguneo

Clulas alvo distantes

Sinalizao autcrina

Clula secretora

Clula alvo adjacente

Sinalizao clula-clula
Sinal extracelular
Receptor

Clula sinalizadora
Stios alvos sobre a mesma clula

Clula alvo adjacente

Agentes sinalizadores
1. Peptdeos e protenas (insulina e
PDGF)
2. Esterides (estradiol, testosterona)
3. Gases solveis (NO, CO)
4. Nucleotdeos, retinides, derivados
de cidos graxos
5. Luz

Receptores Celulares
Existem 4 modelos estruturais propostos de protenas receptoras:

1 Receptores Intracelulares
2 Receptores acoplados Protena G
3 Receptores com e sem Atividade Enzimtica
4 Receptores do tipo Canal Inico

Natureza das molculas sinalizadoras


Receptores de superfcie
receptor

m. plasmtica

Hidroflicas

Molcula
hidroflica

Receptores intracelulares
Molcula
hidrofbica
carreador

Receptor intracelular

ncleo

Hidrofbicas

Hormnios esterides e seus receptores intracelulares

citoplasma

DT

DL
inibidor

DNA
Ncleo

RECEPTORES ACOPLADOS A PROTENA G


(GPCR)
Funes Biolgicas dos GPCRs
1. Odor e paladar
2. Percepo da luz
3. Neurotransmissores
4. Funes endcrinas
5. Quimiotaxia
6. Exocitose
7. Controle da presso arterial
8. Embriognese
9. Crescimento e diferenciao celulares
10. Oncognese

Metade de todas as drogas conhecidas utilizam


como alvo os GPCRs

O projeto genoma revelou um vasto nmero de


novos GPCRs (receptores orfos - possveis
alvos para novas drogas)

Receptores acoplado a protena G (GPCR)

Porcentagem
Estimada
No genma

extracelular

intracelular
Domnios de
interao
com a protena G

A classe mais numerosa de receptores superfcie (fungos - mamferos)


Mamferos: clulas olfatrias usam de 500 a 1000 diferentes GPCrs
e outras clulas usam outros 500 diferentes tipos de GPCRs para responder a
diversos estmulos

Protena G trimrica

Diferentes tipos de subunidades G

M. Plasmtica

Protena G

Mecanismo de ativao
dos GPCRs

GPCR
Molcula
Sinalizadora
Espao
extracelular

citosol

Protena G ativada

Subunidade

ativada

Protena alvo
Subunidade
ativada

Ativao da protena alvo


Pela subunidade

inativao

Reconstituio da
protena G trimrica

Protena alvo inativa

subunidades Gapresenta atividade


GTPsica = so capazes de hidrolizar
GTP em GDP

Enzima ativada

Subunidade
ativada

Substrato

Sntese de molculas mensageiras que atuam


em protenas alvo intracelulares

Enzima
substratos

Segundos
mensageiros

Protena G pode ativar ativa canais inicos

Canal de K+

Substratos alvos ativados pelos


GPCRs
Os maiores segundo
mensageiros produzidos a
partir da ativao dos
GPCRs:
CanaldeK+

PLC
IP3DAG
Ca2+PKC

Adenilato
ciclase

cAMP

cAMP

Inositol trifosfato
(IP3)

PKA

Diacilglicerol (DAG)

Mecanismo de ativao
da Adenilato-ciclase por GPCRs

Molcula
sinalizadora

Adenilato-ciclase
ativada

Mecanismo de ativao
da Adenilato-ciclase

receptor
Subunidade
ativada

AMP cclico

Protena quinase A
(PKA) inativa

Protena quinase A
(PKA) ativa

Poro nuclear

Fosforila e ativa o fator de


transcrio CREB que regula
a expreso gnica

Protena quinase A
(PKA) ativa

CREB inativo

Gene alvo ativado


Transcrio
Traduo
Nova protina

AMPcclicoPKAestimulaaquebradeglicognio
masinibeasuasntese
Aumento do AMPc
Estimulao da quebra de
glicognio

Inibio da sntese de
glicognio

Enzimas fosfodiesterase
catalizam:
AMPc + H2O AMP

NH2

cAMP

A fosfodiesterase que cliva o


AMPc ativada pela PKA
Assim, o AMPc estimula a sua
prpria degradao levando a
uma rpida dimuio do sinal
gerado pelo AMPc

N
H2
5' C 4'
O
O

O
H

H 3'
P
O
O-

1'

2' H

OH

GPCR

PKA = protena quinase A


GPK = quinase glicognio fosforilase
GP = glicognio fosforilase
GS = glicognio sintase

adrenalina

Gs

= ativao
= inibio da
ativao

Adenilato-ciclase
AMPc
Fosfodiesterase
de
AMPc

GPK

Quebra do glicognio
P

GP

Glucose 1- fosfato

PKA
P

GS

citoplasma
Ncleo

CREB
Transcrio gnica

Inibio da sntese de glicognio

Algumas Respostas celulares mediadas pelo


AMP cclico

Molcula sinalizadora

Tecido-alvo

Resposta principal

Adrenalina

cardaco

Aumento da taxa e fora


de contrao cardaca

Adrenalina

muscular

Degradao de glicognio

ACTH e glucagon

adiposo

Degradao de gordura

ControledaativaodaAdenilatociclase
dependedaclassedeprotenaGtrimricaativada

Hormnio
estimulatrio

Hormnios
inibitrios

Adenilato
ciclase

Receptor
-adrenrgico

Receptor
-adrenrgico
Complexo G
estimulatrio

Complexo G
inibitrio

Efeito de exotoxinas bacterianas sobre a ativao


dos GPCRs
Toxina do clera

Interage com resduos de arginina de Gs


e inibe a sua atividade GTPsica trancando
Gs no seu estado ativo

Toxina pertussis

Interage com resduos de cistena de Gi


impedindo a sua interao com GPCR
permanecendo no estado inativo

Mecanismo de ativao da Fosfolipase C


atravs da ativao do GPCR

Mecanismo de ativao da fosfolipase C


Molcula sinalizadora
GPCR

fosfatidil inositol
bi-fosfato (PIP2)
Fosfolipase C-

diacilglicerol

subunidade G

ativada inositol
tri-fosfato

Lmem do reticulo
endoplasmtico

protena quinase
C
(PKC)

Canal de Ca+2

calmodulina

Inativa

ativa

Ca/calmodulina
Quinase
ativa

Mecanismo de ativao da Calmodulina quinase (CaM-quinase)


Domnio inibitrio
Protena fosfatase

Inativa
Domnio
cataltico

calmodulina

Ca+2/calmodulina

Auto-fosforilao

Ativao
total

Ativa

GPCR
Fosfolipase C
IP3

DAG
PKC

Ca

+2

Calmodulina
Proliferao celular
Calmodulina
Quinase
CaM-quinase abundante nas sinapses
Importantes para a memria

Sinalizao induzida pela luz em clulas


Fotorreceptoras bastonadas da retina

Bastonete da retina

Luz

citosol
Disco
lmem

Fosfodiesterase
inativa

Fosfodiesterase
ativa

Membrana
plasmtica
dos
bastonetes

rodopsina
Diminui a conc.
De GMPc
Fechamento do canal inico
aumenta a conc. Adaptada ao escuro
de GMPc

abertura do canal inico

Principais classes de protena G trimrica


e seus efetores
Classe da
protena G

Efetor alvo

2 mensageiro

Ex. de receptores

Gs

Adenilato-ciclase

AMPc (aumento)

Receptor -adrenrgico,
Receptor para glucagon,
serotonina, vasopressina

Gi

Adenilato-ciclase

AMPc (diminuio)

Receptor -adrenrgico,
receptor acetilcolina

Canal de K+
AMPc (aumento)

Receptores de olfato

Golf
Gq
Gt

Adenilato-ciclase
Fosfolipase C
GMPc
fosfodiesterase

IP3 e DAG
(aumento)
GMPc (diminuio)

Receptores 2adrenrgico
Rodopsina (receptores
de luz)

NO signaling
The Nobel Prize in
Physiology or
Medicine 1998
"for their discoveries concerning nitric oxide as a signalling
molecule in the cardiovascular system"

Robert F.
Furchgott

Louis J.
Ignarro

Ferid Murad

USA

USA

USA

SUNY Health
Science Center
Brooklyn, NY,
USA

UCLA School of
Medicine
Los Angeles, CA,
USA

University of Texas,
Health Science
Center
Dallas, TX, USA

1916 -

1941 -

1936 -

xido ntrico (NO)


- Diversas atividades biolgicas (funciona como segundo mensageiro)

NO sintases (NOS)

Arginina
+
O2

NOS 1 ou NOS neuronal


NOS 2 ou NOS endotelial
NOS 3 ou NOS induzida

NOS
(nNOS, eNOS, iNOS)

Citrulina

NO

Ca+2

Lmem do vaso
sanguneo

acetilcolina
GPCR

Fosfolipase C

Clulas
endoteliais

Clulas da musculatura lisa

Relaxamento da
musculatura lisa

Estimulao
sexual

Guanilato
ciclase

Relaxamento
da
musculatura lisa

fosfodiesterase
Ereo

NO
Guanilato ciclase
GMP

GMP cclico

GMPc
Fosfodiesterase

PKG

Relaxamento da
musculatura lisa

1 - Receptores com atividade quinase intrnsica


Receptores tirosina quinase (RTK)
(Receptores de fatores de crescimento)

Receptores serina/treonina quinase


(Receptores da famlia TGF-)

2- Receptores sem atividade enzimtica


(Receptores de citocinas)

Evoluo e diversidade dos RTK


RTK so encontrados em organismos to primitivos como
porferos (Geodia cydonium) e cnidrios (Hydra vulgaris)

Porferos

Geodia cydonium

Cnidrios

Hydra vulgaris

eumetazoa
Parazoa
700 milhes

Receptores tirosina quinase

Mecanismo de ativao dos Receptores Tirosina Quinase


Monmeros
inativos

Dimerizao

trans-fosforilao

pY

pY

pY

pY

pY

pY

Domnio cataltico

Conformao do loop de ativao dos RTK


e mecanismo de autofosforilao

Hubbard, Stevan R. 1997

Ligante estabiliza a formao de dmeros ativos

Ligante estabiliza a formao de dmeros ativos

PPP-

-P
-P
-P

Transduo do sinal

PPP-

-P
-P
-P

?
COMO O SINAL TRANSDUZIDO APS A
FOSFORILAO DO RECEPTOR?

P-

-P P

P-

-P

P-

-P

Amplificao do sinal

COMO ESSAS PROTENAS INTERAGEM COM


O RECEPTOR ATIVADO?

-P

P- Ty

Ty

P- Ty

Ty -P

SH2

Reconhecem resduos de tirosina fosforilada

Domnios SH2 so mdulos compactos (~100 a.a)

Quinase Src

Vrus do sarcoma avirio

Domnios SH2 so encontrados em um grande


nmero de protenas envolvidas em sinalizao

SH2

Quinases
Protenas adaptadoras
Protenas do citoesqueleto
Fatores de transcrio

SH2

Cada domnio SH2 reconhece fosfotirosinas no


contexto dos a.a que ladeiam o resduo fosforilado
(1-6 a.a C-terminal)
SH2

NH2 -pTy-X-X-Z-B-S-T- COOH

ESPECIFICIDADE

Domnios proteicos em transduo de sinais

SH2

PH

1-6 aa
NH2-pTy-X-X-Z-B-S-T-COOH

SH3
-P-X-X-P-XReconhecem protenas ricas
no aa prolina

Fosfolipdeo
PIP3

14-3-3
-R-S-X-pS-X-PSerina fosforilada

...

enzimas
adaptadores
Proteinas
plataforma
Fatores de
transcrio
Protenas do
citoesqueleto

Sinalizao Ras-ERK/MAPK
Protenas Ras so membros de uma superfamlia de
proteinas G de baixo peso molecular
Esto ancoradas na membrana plasmtica atravs de
ncoras lipdicas
So reguladas por fatores de troca de guanina (FTGs) e
por protenas ativadoras de GTPases (PAGs)

Pi

Ras
Ras GDP

PAG acelera a
atividade basal
GTPse
de Ras
H2O

FTG promove a
dissociao de GDP
GTP se liga
espontnemamente

Ras
Ras GTP

GAP Ras
PPP-

Raf

GDP
GDP

-P
-P
-P

GTP

GRB2

MEK -P

SOS
ERK -P

P- ELK1
Proliferao
Sobrevivncia
Diferenciao

PIP2
PIP3
PPP-

-P
-P
-P

PI3K

BAD

IKK

PDK1

FRKH

Controlam a sobrevivncia celular

AKT

PIP3
PIP2
PPP-

PIP2

-P PI3K
-P
-P

PTEN

PIP2

Receptores serina/treonina quinase


Receptores de TGF-
Crescimento
Diferenciao
Sobrevivncia
Desenvolvimento

Mecanismo de ativao do receptor TGF

Receptor do tipo II

Receptor do tipo I

quinase

quinase

quinase

FKBP12 FKBP12
-P
Smad-R

PPP
Smad-R Smad-4

Receptores que no apresentam


atividade quinase intrnsica

Olli Silvennoinen, 2004

JA
K
JA
JAK K

Stat
P- P-

Stat

P
P

Stat
Stat

-P-PStat

P
P

Stat

K
JA

K
JA JAK

P
P

Stat

Stat

Mecanismos de inibio da ativao

1- Ligao de antagonistas
SPITZ
Se liga ao receptor mas
no induz a sua ativao

EGFR
PP-

-P
-P

ARGOS

3- Desfosforilao

(Fosfatases )

PP-

-P
-P

Protenas fosfatases desfosforilam o


Receptor inibindo a transduo do sinal

4- Inibio por endocitose

P
P

P
P

Aps a sua ativao, receptores podem


ser endocitados e degradados nos
lisossomos

5- Degradao por ubiquitinao

-UB
PP-

-P
-P
Proteosoma

Receptor TGF-

quinase

-P

quinase

Hepatcitos

Smad-R Smad-4

APOPTOSE

Hepatcitos
Receptor TGF-

Receptor de insulina

PIP2
PIP3
PPP-

quinase

quinase

-P

Smad-R

-P
-P
-P

PI3K

Inibio da apoptose
Smad-4

PDK1

AKT

Mecanismos de ativao
e inibio
Receptores

Transduo do sinal

1. Receptores tirosina quinase


2. Receptor serina/treonina quinase
3. Receptores sem atividade quinase
intrnsica

Domnios de reconhecimento

Como as clulas usam esse repertrio de vias de


sinalizao conhecidas para transduzir respostas
biolgicas especficas

ESTUDO DIRIGIDO SINALIAO CELULAR BIOCEL 2015


1- O que so vias de sinalizao celular?
2- A sinalizao celular pode ser classificada em autcrina, parcrina, endcrina e clulaclula. Descreva a diferena entre esses diferentes tipos de sinalizao.
3- O que determina o mecanismo de ativao dos receptores?
4- Cite os diferentes tipos de receptores. Como se caracterizam a estrutura destas molculas?
5- Ligantes podem atravessar a membrana citoplasmtica? Explique.
6- A insulina pode ativar receptores? Qual a sua funo na sinalizao para captao de glicose
pelas clulas?
7- Explique a ao nuclear decorrente da ativao de receptores hormonais.
8- Em receptores acoplados protena G (GPCR), o que faz com que a subunidade ative a
unidade efetora (enzima)?
9- Como ocorre a ativao de PKA pelo AMP cclico?
10- A toxina do clera, produzido pela bactria Vibrio Cholera, causa diarreia nos indivduos
infectados. Qual a base molecular para esse efeito causado por essa toxina?
11- O inositol 3 fosfato (IP3) e o diacilglicerol (DAG) atuam como segundos mensageiros.
Descreva como o IP3 regula a liberao de clcio do retculo endoplasmtico. Qual a enzima
responsvel pela formao do IP3 e DAG ?
12- Descreva o mecanismo de ao do viagra no relaxamento da musculatura lisa dos corpos
cavernosos.
13- O que a rodopsina? Como ela ativada? Qual a consequncia da ativao da rodopsina
para os bastonetes da retina.
14- O que so quinases e qual a sua relao com o ATP?
15- Aps a ativao de um receptor tirosina quinase, como ocorre a transduo do sinal
intracelular desencadeado pela sua ativao?
16- Descreva os diferentes mecanismos possveis de inibio de uma via de sinalizao.
17- Por que a transfosforilao importante para a auto-fosforilao de tirosinas do receptor
tirosina quinase?

19- Considere as vias de sinalizao abaixo. Descreva a seqncia de ativao da via 1


e 2. Quem 1? Por que somente depois da ativao de M, 1 capaz de inibir AA. Como
vc acha que ocorre a inibio de AA por 1.

Via 2

Via 1
X

M
1

7
10
23
AA
T

X = receptor tirosina quinase


Y, Z, M, 1 = quinases
W = protena
23 = Enzima
T = Fator de transcrio

= ativao
= inibio da ativao

7 = receptor GPCR
K = fator de transcrio
10 = Protena G-s
AA = PKA

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