Efecto de concentracin de enzima y

sustrato en la actividad enzimtica

Equipo 5 | Dra. En C. Beni Camacho Prez |4QBT3

CINTICA ENZIMTICA
Estudia las propiedades de la actividad enzimtica en relacin con varios
parmetros, que son de importancia fundamental para entender el
funcionamiento de los sistemas enzimticos dentro de la clula.
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas
por enzimas.

 La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima puede medirse con

relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o
aislar el enzima. La medida se realiza siempre en las condiciones
ptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc.
En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad
mxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin
de los productos o la desaparicin de los reactivos.

Tiempo de incubacin
Para medir la actividad enzimtica hay que incubar la
preparacin enzimtica, generalmente a 37C por periodos
de tiempo y medir el producto de la reaccin enzimtica en
un tiempo dado.
Si la reaccin es lineal en el tiempo en un tiempo
determinado se puede expresar la velocidad enzimtica en
trminos de velocidad

Algunas causas de que la grafica no sea lineal son:

La reaccin alcanzo un equilibrio "el sustrato se haya agotado para formar
mas producto
La protena se desnaturaliza y pierde su actividad

Concentracion del Sustrato

Cuando interactua el sitio activo de la enzima, el sustrato forma con esta el
complejo enzima-sustrato, en donde el sustrato reacciona mucho mas fcil y
rpidamente que en ausencia de la enzima, por una disminucin de la
energa de activacin. Apartir de l complejo enzima-sustrato re sulta de los
productos de la reaccin.

Esquema de la saturacin progresiva de los sitios activos

de una enzima al aumentar la concentracin de sustratos.

Constante de Michaelis (Km)

Cintica de Michaelis - Menten
Las reacciones enzimticas se caracterizan porque aunque se aumente la
concentracin de sustrato la velocidad no aumenta linealmente, aparece un efecto
de saturacin. La saturacin se debe a que todos los centros activos estn
ocupados. La velocidad depende de la cantidad de enzima con sustrato suficiente.
Consideraremos slo la velocidad inicial de las reacciones para cada
concentracin de sustrato cuando se construya una grfica, evitando el error
introducido por el deterioro del enzima. Como en el primer momento no hay
producto no consideraremos la reaccin contraria.

Ecuacin

v = Vmax[S]/(Km + [S])

Vmax = kcat [E0]

v: velocidad observada a una concentracin dada de sustrato

Km suele ser inversamente proporcional a la afinidad de la enzima por el sustrato.

 Para determinar Km y Vmx la opcin mas usada es la de las dobles

reciprocas de Lineweaver y Burk, los cuales encontraron que la ecuacin de
Michaelis poda convertirse en la ecuacin de una lnea recta, con solo tomar
las reciprocas de v y (S) y hacer arreglos algebraicos necesarios.
Esta ultima ecuasion se le llama doble reciproca y tiene la misma forma que
la lnea recta(y=ax+b) donde 1/v= x , Km/Vmx =a( que es la pendiente de la
curva) y 1/Vmx =b( que es la ordena al origen)

Concentracin enzimtica
Como ya hemos observado la velocidad de una reaccin es proporcional a la
concentracin de la enzima, por lo tanto el sustrato se encuentra siempre
en condiciones saturantes y medimos la velocidad de la reaccin a distintas
concentraciones de la enzima por lo que se obtendr una lnea recta en una
grafica .

Ejemplos
Una enzima que cataliza la reaccin X ,Y se aisl de dos especies
bacterianas diferentes. Las enzimas tienen el mismo valor de Vmax, pero
diferente valor de Km para el sustrato X. La enzima A tiene un valor de Km
de 2.0 mM, mientras que le enzima B tiene un valor de Km de 0.5 mM. En la
siguiente grfica se presenta la cintica de la reaccin a la misma
concentracin de ambas enzimas Qu curva corresponde a la enzima A y
cual a la enzima B?
Vmax= 2.0 mM m-1/ min-1
Km(A)= 2.0mM
Km(B)=0.5mM
[S]=0.5 mM

v = Vmax[S]/(Km + [S])
v(A)= [2.0 mM ml-1/ min-1 ][0.5mM]/(2.0mM + 0.5mM)
v(A)=0.4 ml-1/min-1
v(B)= [2.0 mM ml-1/ min-1 ][0.5mM]/(0.5mM + 0.5mM)
v(B)=2.5 ml-1/min-1

Referencias:
RUBN HERNNDEZ GIL, PHD. (2001). Fisiologa Vegetal, Departamento
de
Botnica, Facultad de Ciencias Forestales y Ambientales. Universidad de
Los Andes.Mrida.

*EMMANUEL SORIANO NOGUEZ.(2010, Junio).Bioqumica.Universidad

Autonoma