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de mutations.
Fidlit de la rplication
La prennit du gnome est assure par la rplication
les mcanismes qui en assurent la fidlit permettent,
quelques erreurs prs ( l'origine de certaines
mutations), la conservation de l'information au fil des
gnrations.
Cependant, des contrles sont tout moment exercs et,
si des modifications de l'ADN ponctuelles ou plus
importantes apparaissent les mcanismes de rparation
sont activs.
Origine
Spontanes ou induites (mutagnse)
Bases:
Incorporation dune mauvaise base
Analogue de base
Modification chimique des bases
Glissement pendant la rplication
Mutagne spcifique (Beth par exemple)
Coupure dans le squelette phosphodiester
Radiation ionisante
Blocage de la rplication
Dimres de thymine induits par les UV
Mutations ponctuelles
Les mutations ponctuelles concernent un seul
nuclotide. Il existe diffrents types de mutations
ponctuelles :
- Conservatives.
- Faux sens.
- Non sens.
- Dcalantes.
- Purine / purine
- pyrimidine / pyrimidine
AT en GC
Transition
C G en GC
Transversion
Taux de mutation
Probabilit quun mutant apparaisse partir dun gne de type sauvage
Diffrent de la frquence des mutants
3.2
Mutation
Taux
par
E. Coli
His+->His-
2.10-6
division cellulaire
4.10-5
gamte
Polypose intestinale
1-3.10-5
Hmophilie
2-4.10-5
Drosophile
Humain
il blanc
W -> w
3.3
3.4
pousse
mme
en
prsence
dun
compos
toxique.
1\ Slection.
Si la frquence de mutation de rsistance lampicilline est de 10-9, on
fait une structure dau moins 109 cellules ; on centrifuge puis n tale
sur une boite contenant de lampicilline. Sur les 109 cellules, une seule
poussera ? La souche est isole.
2\ Reprage.
Reprage de mutants dauxotrophie, de sucre et conditionnels.
Si la frquence Arg rsistance est gale 10-6, on tale sur une
premire boite de milieu complet : tout pousse. On repique ensuite sur
une seconde boite sans arginine et lon regarde ce qui ne pousse pas
et
par
corrlation
avec
la
boite
1,
on
repre
la
souche.
La slection directe
crible positif
seuls les mutants avec le phnotype recherch survient; tous les autres
phnotypes sont limins
La slection indirecte
crible ngatif
Crible positif
-la rsistance un des antibiotiques (ex. rifampicine )
sans slection Sans rifampicine mlange RifS+ RifR
croissance en tapis
avec slection + rifampicine
gne
processus biologique
phnotype
Rifampicine
Acide nalidixique
Streptomycine
rpoB
gyrA
rpsL
Transcription
Rplication
Traduction
RifR
NalR
StrR
Antibiotique Gne
Processus biologique Phnotype
Ttracycline tetR Traduction
TetR
Chloramphnicol cam Traduction
CmR
Ampicilline ampPeptidoglycane
AmpR
Rsistance au phage
La rsistance au bactriophage lambda est dpendante de ltat du
gne lamB dE. coli
avec le rcepteur membranaire
LamB
sensible
rsistante
Milieu slectif:
absence dun nutriment
prsence dun antibiotique
prsence de virus
Phnotypes:
croissance
morphologie des colonies
AAT ADN
UUA ARNm
Leu acide amin
CUA GUA AUA UCA UUC UUG UUU UCA UGA UAA
Leu
Val
Ile
Ser
Phe
Leu
Phe
Ser
Stop Stop
G en C
Transversion
G en C
Transversion
A en T
Transversion
- Mutation dcalante
il sagit ici de la dltion ou de linsertion dun nuclotide qui
dcale le cadre de lecture. Il y a souvent engendrement dune
mutation faux sens et apparition dun peptide incorrect et donc
un phnotype mutant.
NH2 Gln Lys Thr Leu Val Ala Trp Gly Pro Thr Leu Ser Arg COOH
-A
+C
CAA AAA ACU UUA GUU GCU UGG GGU CCU ACU UUA UCU CGU
CAG AAG ACC UUG GUC GCC
GGC CCC ACC UUG UCC CGC
ACA CUU GUA GCA
GGA CCA ACA CUU UCA CGA
ACG CUC GUG GCG
GGG CCG ACG CUC UCG CGG
CUA
CUA AGU AGG
CUG
CUG AGC AGA
5 CAG AAG ACA UUG GUG GCA UGG GGU CCC ACU CUA UCA AGG 3
NH2 Gln Arg His Trp Trp His Gly Val Pro Leu Leu Ser Arg COOH
CAA CGU CAU UGG UGG CAU GGU GUU CCU UUA UUA UCU CGU
CAG CGC CAC
CAC GGC GUC CCC UUG UUG UCC CGC
CGA
GGA GUA CCA CUU CUU UCA CGA
CGG
GGG GUG CCG CUC CUC UCG CGG
AGG
CUA CUA AGU AGG
AGA
CUG CUG AGC AGA
5 CAG AGA CAU UGG UGG CAU GGG GUC CCA CUC CUA UCA AGG 3
Tautomrisation
Appariement
Cytosine
Imino
Adnine
Thymine
Guanine
Enol
Erron
Normal
Adnine
Guanine
Cytosine
Thymine
Guanine
Adnine
Thymine
Cytosine
O
CH3
HN
O
kto
N
N
HO
CH3
Tautomresdelaguanine
O
N
HN
H 2N
OH
N
kto
N
H
N
H 2N
N
H
Forme nol
Forme ctone
Forme amino
Dsamination
Adnine
Cytosine
Guanine
Appariement
Hypoxanthine
A-T
en H-C
Uracile
C-G
en U-A
Xanthine
G-C
en X-C
Dpurination
Dpurination de lADN
glycosylase
et
l'hypoxanthine-N-glycosylase,
peuvent
Fidlit de la rplication
La prennit du gnome est assure par la rplication
les mcanismes qui en assurent la fidlit permettent, quelques
erreurs prs ( l'origine de certaines mutations), la conservation de
l'information au fil des gnrations.
Cependant, des contrles sont tout moment exercs et, si des
modifications ponctuelles ou plus importantes de l'ADN apparaissent
les mcanismes de rparation sont activs.
Pour que deux cellules hritent par division du mme patrimoine
gntique, pour que la reproduction conforme soit assure, l'ADN,
support de l'information gntique, doit tre au pralable dupliqu
fidlement.
Gnes mutateurs
L'exprience montre que des mutations dans les gnes polA ou dnaQ diminuent
le taux de correction et donc augmentent le taux de mutation.
Chez E. coli, on a identifi plusieurs gnes qui, l'tat mut, sont la cause
d'apparitions trs frquentes de mutations dans l'ensemble du gnome.
3 - Ainsi les gnes mutH, mutL, mutS et mutU dont nous verrons aussi le rle
dans la rparation post-rplicative des
appariements errons.
4 - D'autres mutateurs existent comme mutD, mutY, mutT, la fonction de
certains est identifie mais d'autres ne sont pas encore bien caractriss.