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Fotometria

Karin A. Riske

kariske@unifesp.br
ferramenta para: - caracterização de
Fotometria
substâncias
- determinação de concentração
estudo da difusão

experimento: determinação da concentração de uma substância


a partir de sua absorção de luz (fotometria ou colorometria)

muito utilizada em análises clínicas

- o que é luz (radiação eletromagnética) ?


- absorção de luz
- fotometria
- medidas e erros
variação de → variação de → variação de
radiação ...
eletromagnética
O que é luz?

variação dos campos elétrico e magnético λ

não depende de um meio material para se propagar

velocidade, comprimento de onda (frequência), energia

c λ ν ν = hc / λ

energia depende só de ν
E = hν energia de 1 fóton
e não da amplitude
O que é luz?
O que é luz?
Absorção de luz átomos e moléculas possuem níveis discretos de energia
Energy

níveis eletrônicos
E1

Eo
níveis vibracionais

rn
hν2 luz visível
.
V4 ..
V3 níveis rotacionais
r2
hν1 V2
r1
V1
ro
Vo
Absorção de luz espectro característico para cada molécula
Espectro de Absorção
Energy
Absorbância

λ
hv
Absorção de luz espectro característico para cada molécula
Absorção de luz medida de absorção de luz

λ Io I
detetor

c concentração

caminho óptico
deve depender de c,
e propriedades
Absorção de luz da substância
medida de absorção de luz

transmitância T
c concentração
x 100  T(%)

caminho óptico

Lei de Lambert-Beer

ε : coeficiente de extinção molar A≡


Absorção de luz medida de absorção de luz

Lei de Lambert-Beer

transmitância absorbância

linearização
Absorção de luz

Lei de Lambert-Beer

condições de validade da lei de Lambert-Beer

- absorvedores independentes
- meio homogêneo e não absorvente
- ausência de espalhamento de luz
- concentração baixa
Absorção de luz

Lei de Lambert-Beer

concentração

menor sensibilidade curva padrão


Absorção de luz

Lei de Lambert-Beer

região de validade da lei


Medidas e Erros

medidas experimentais estão sempre sujeitas a erros

acidentais estatísticos precisão


erros
sistemáticos tendenciosos exatidão
Medidas e Erros

erros acidentais erros sistemáticos

+ precisa - precisa + exata - exata

mesma exatidão mesma precisão


Medidas e Erros

exatidão boa precisão boa


Medidas e Erros

exatidão boa precisão ruim


Medidas e Erros

exatidão ruim precisão boa


Medidas e Erros

exatidão ruim precisão ruim


Medidas e Erros
erros acidentais

Absorbância

concentração
Medidas e Erros
erros sistemáticos

Absorbância

concentração
Experiência

Estudo da difusão do permanganato de potássio (KMnO4)


através de uma membrana de celofane

compartimento 1 compartimento 2

membrana de celofane
Experiência

Estudo da difusão do permanganato de potássio (KMnO4)


através de uma membrana de celofane

compartimento 1 compartimento 2

membrana de celofane
Experiência

Estudo da difusão do permanganato de potássio (KMnO4)


através de uma membrana de celofane

ANTES:
medir A(t)
construir curva padrão do KMnO4

c(t)
0,5 g/l
KMnO4

compartimento 1 compartimento 2
P
membrana de celofane
Experiência

obtenção da curva padrão do KMnO4

preparar soluções de diferentes concentrações de KMnO4

solução estoque [KMnO4] = 0,10 g/l

Tubo KMnO4 H2O Concentração


(ml) destilada de KMnO4
(ml) (g/l)
1 1 9 0,01
2 2 8 0,02
3 3 7 0,03
4 4 6 0,04

5 5 5 0,05
Experiência

obtenção da curva padrão do KMnO4

medida da absorbância de cada concentração

λ = 525 nm
Io I

caminho óptico 1cm


Experiência
fazer o gráfico A x c e Txc
achar ε
obtenção da curva padrão do KMnO4

medida da absorbância de cada concentração

Tubo Concentração Absorbância Transmitância


de KMnO4
(g/l)
x 100 
T(%)

1 0,01 0,16 0,69 69%


2 0,02 0.32 0,48 48%
3 0,03 0,48 0,33 33%
4 0,04 0,64 0,23 23%
5 0,05 0,80 0,16 16%
Experiência

obtenção da curva padrão do KMnO4

ε = 2,54 x 103 M-1 cm-1


Experiência

Estudo da difusão do permanganato de potássio (KMnO4)


através de uma membrana de celofane

medir A(t)

c(t)
0,5 g/l
KMnO4

a cada 5 min medir absorbância


Experiência

Estudo da difusão do permanganato de potássio (KMnO4)


através de uma membrana de celofane

5 min
0,5 g/l 10 min
KMnO4
15 min
20 min

a cada 5 min medir absorbância


Experiência

Estudo da difusão do permanganato de potássio (KMnO4)


através de uma membrana de celofane

Tempo Absorbância Concentração


(min) de KMnO4
(g/l)
0,5 g/l 0,0085
5 0,14
KMnO4
10 0,29 0,0180
15 0,43 0,0270
20 0,58 0,0360

fazer o gráfico c x t
calcular a permeabilidade P

assumindo estado estacionário dados: área da membrana 7 cm2


volume dos compartimentos 10ml
Experiência

Estudo da difusão do permanganato de potássio (KMnO4)


através de uma membrana de celofane

J = 4,3 x 10-8 g/cm2s

P = 8,6 x 10-5 cm/s