BIOQUMICA

Enzimologa

Enzimologa

Generalidades.
Clasificacin.
Modo de accin de las enzimas.
Cintica de las reacciones simples
catalizadas por enzimas. Ecuacin de
Michaelis-Menten.
Actividad enzimtica. Unidades.
Cuantificacin de la actividad enzimtica.
Coenzimas.
Factores que afectan la cintica enzimtica.
Inhibidores enzimticos.
Regulacin de la catlisis enzimtica.

Las enzimas son:

C6H12O6 + 6 O2 -> 6CO2 + 6

H2 O

-2
ATP

G -2870 kJ/mol

+ 2 NADH +
+ 2 ATP
+ 2 ATP
+ 2 NADH + H+

+
+
+

1 ATP
3 NADH + H+
1 FADH2

H+

Las
enzimas
son
protenas
altamente
especializadas. Funcin: catlisis (o regulacin
de la velocidad) de las reacciones qumicas en
los seres vivos.

E+
S

[ES]

E+P

Las enzimas son protenas* que catalizan

reacciones qumicas

Muchas reacciones requeriran condiciones extremas de

presin, temperatura o pH sin catalizador, pero ocurren
en condiciones fisiolgicas con enzimas.

Ej. Glc ----> CO2 + H2O en un calormetro =

Las enz. aceleran a 1010a 1014veces ms rpido que las

reacciones no catalizadas.
Ureasa en orina = 1014 (significa que una reaccin que
catalizada toma 1 segundo podra tomar 3 millones de aos sin
estar catalizada).
* En su mayora son protenas, hay ARN con capacidad
cataltica (ribozimas)

Estructura de una enzima

Las protenas enzimticas estn formadas por una gran cantidad de
aminocidos (AA), que cumplen funciones diferenciadas:

No esenciales, estructurales, de unin y

catalticas.
Los AA no esencialespueden ser reemplazados y, en
algunos casos, eliminados sin prdida significativa en la
funcin o conformacin de una enzima.
Los AA estructurales= conformacin de la enzima,
"forman su esqueleto".
Los AA de unin= asociacin entre la enzima y el sustrato.
Los AA catalticos= transformacin del sustrato.

Aspectos generales de las

enzimas

Las enzimas son catalizadores

especficos: cada enzima cataliza un
solo tipo de reaccin y casi siempre
acta sobre
un nico sustrato o
un grupo muy reducido de ellos.

Sustrato: sustancia sobre la que acta la enzima

Especificidad de funcin de las

enzimas

Mecanismo de la
reaccin enzimtica

En toda reaccin qumica se produce

la transformacin de una sustancia
inicial, denominada sustrato (S), en
una sustancia final o producto (P),
segn la siguiente notacin:

Reaccin catalizada por una

enzima:
centro activo regin concreta de la enzima donde el sustrato
se une
Enzima y su
sustrato

E+S
P

Unin al centro
activo

ES

Formacin de
productos

Complejo enzima-sustrato

E +

El centro activo
comprende

un sitio de unin formado por los aminocidos que

estn en contacto directo con el sustrato y

un sitio cataltico, formado por los aminocidos

directamente implicados en el mecanismo de la
reaccin

Centro activo: Es el sitio donde estn los AA de

unin al S y los AA que median el efecto cataltico
de la enzima.
(uniones intermoleculares de la enzima c/el S en una
orientacin tal que encajan correctamente, como las piezas en
un rompecabezas).

El sustrato se une a la enzima luego se inicia la

catlisis

Sitio de unin: es el que le da la especificidad a la

enzima

Sitio
cataltic
o

Nomenclatura
Hay varias formas de nombrar
una enzima:
nombres particulares
nombre sistemtico
cdigo de la comisin de
enzimas (EC = Enzyme
Comission) de la UIB

Nomenclatura:
nombres particulares

Antiguamente, los enzimas reciban nombres

particulares, asignados por su descubridor.

Ejemplos:

Al ir aumentando el nmero de enzimas

conocidas, se hizo necesaria una nomenclatura
sistemtica que informara sobre la accin
especfica de cada enzima y los sustratos sobre
los que actuaba.

amilasa (hidrolisa el almidn)

glucoquinasa
Glc + ATP Glc-6P + ADP

Nomenclatura:
nombre sistemtico
Consta actualmente de 3 partes:
el sustrato preferente
el tipo de reaccin catalizada
terminacin "asa"
ejemplo: la glucoquinasa
ATP:glucosa fosfo transferasa
Glc + ATP Glc-6P + ADP

Comisin de Enzimas
Nomenclatura: __.__.__.__.
El nombre es identificado por un cdigo numrico:

encabezado por las letras EC (enzyme commission)

seguidas de cuatro nmeros separados por puntos .

el primer nmero indica a cual de las seis clases
pertenece la enzima,
el segundo se refiere a distintas subclases dentro
de cada grupo,
el tercero y el cuarto se refieren a los grupos
qumicos especficos que intervienen en la
reaccin y el n de orden en la lista.

Clasificacin y
Nomenclatura:
Comisin de
Enzimas
Clases

1. xidoreductasas
2. Transferasas
3. Hidrolasas
4. Liasas
5. Isomerasas
6. Ligasas

Nomenclatura:
Comisin de Enzimas

Ej.: la ATP:glucosa
fosfotransferasa
(glucoquinasa)
Glc + ATP Glc-6P + ADP

Glucoquinasa

EC 2.7.1.2.
2: transferasa
7: fosfotransferasa
1: el aceptor es un grupo OH
2: es un OH de la D-glucosa el que acepta el
grupo fosfato.

Creatin fosfo quinasa

Dmero: M (msculo) B (cerebro)

separables por electoforesis (mtodo
de estudio)
Cerebro = BB (CPK1 - rpida)
Msculo esqueltico= MM (CPK3 lenta)
Corazn = MB (CPK2 - intermedia) h.
6% de la CPK total = 10-50 UI/L a 30C.

Clasificacin de
enzimas
CK o CPK = EC 2.7.3.2: Creatina kinasa
Clases
Subclases
Subsubclases
Orden
Wiki

CPK o CK
ATP + Creatina (c. Alfa-metil guanido-actico)

ADP
HO3P-

Fosfocreatina

CH3

Lactato deshidrogenasa
LDH
Tetramrica c/2 subunidades distintas:
H de corazn y M de msculo, que se
combinan de 5 formas.
LDH1 HHHH Miocardio y
LDH2 HHHM - Miocardio y GR
LDH3 - HHMM Cerebro y rin
LDH4 HMMM Hgado y Msc.
Esquel.
LDH5 MMMM Msculo Esqueltico

Isoenzimas de Amilasa
(AMI)
alfa-Amilasa -amilasa, EC 3.2.1.1 (1,4--D-glucan
glucanohidrolasa; glicogenasa) metaloenzima
(dependiente de Ca). Corta enlaces glicosdicos alfa-1,4 al azar

o at random.
En animales es la mayor enzima digestiva y su pH ptimo es 6.77.0.
En el H amilasa salivar y pancretica son alfa-amilasas. Esta
forma es tambin hallada en plantas, hongos y bacterias (Bacillus).
-Amilasa (EC3.2.1.2) (1,4--D-glucan maltohidrolasa;
glicogenasa) es tambin sintetizada porbacterias,hongos
yplantas. Cataliza la hidrlisis del segundo enlace -1,4 glicosdico
desde el extremo no reductor, separando 2 unidades de glucosa
(maltosa).
Presente en semillas y granos de cereales; en muchos
microorganismos que degradan el almidn extracelular. Los tejidos
animales no contienen -amilasa, pero puede estar presente en
microorganismos del TD. El pH ptimo es 4.0-5.0.

-Amilasa
(EC3.2.1.3)

Glucan
1,4-alfaglucosidasa

amiloglucosidasa

Exo-1,4-glucosidasa glucoamilasa; -glucosidasa lisosomal;

1,4--D-glucan glucohidrolasa.

Rompe los enlaces (1-6) glicosdicos, como tambin el

ltimo enlace(1-4)glicosdico del extremo no reductor
de amilosa y amilopectina, produciendo glucosa. Es
ms activa a pH 3.

MODO DE ACCIN DE
LAS ENZIMAS

La accin de los catalizadores consiste en disminuir la

Energa de activacin

Las enzimas son catalizadores especialmente eficaces, ya que

disminuyen la Ea an ms que los catalizadores inorgnicos.

Por ej, la descomposicin del agua oxigenada (H 2O2) puede

ocurrir
sin catalizador
E a= 18 Kcal/mol
con un catalizador inorgnico (platino) E a= 12 Kcal/mol
con una enzima especfica (catalasa)
E a= 6 Kcal/mol

As, se puede calcular que el platino acelera la reaccin

20.000 veces, mientras que la catalasa la acelera 370.000
veces.

MODO DE ACCIN DE LAS

ENZIMAS
Dos modelos sobre la forma en que el sustrato
se une al centro activo del enzima:
el modelo llave-cerradura
el modelo del ajuste inducido

MODELO LLAVE-CERRADURA

La estructura del sustrato y la del centro activo

son complementarias

Este modelo es vlido en muchos casos, pero

no es siempre correcto

MODELO DEL AJUSTE INDUCIDO

el centro activo adopta la conformacin idnea slo en

presencia del sustrato.

La unin del sustrato al centro activo de la enzima

desencadena un cambio conformacional que da lugar a la
formacin del producto.

Modelos de la interaccin E
-S

Modelo del Ajuste Inducid

Cofactores Coenzimas
A veces, una enzima requiere p/su
funcin la presencia de sustancias no
proteicas que colaboran en la catlisis:
Los

cofactores. Pueden ser iones

inorgnicos como el Fe++, Mg++, Mn++,
Zn++ etc. Casi un tercio de las enzimas
conocidos requieren cofactores.
Cuando

el cofactor es una molcula

orgnica se llama coenzima.

Cofactores Coenzimas

Muchas de estas coenzimas se sintetizan a partir

de vitaminas.

Cuando los cofactores y las coenzimas se

encuentran unidos covalentemente a la enzima se
llaman grupos prostticos.

La forma catalticamente activa de la enzima =

holoenzima. La parte proteica de una holoenzima
se llama apoenzima (inactiva), de forma que:

apoenzima + grupo prosttico=

holoenzima

Coenzima: NAD+
Deriva de la Vitamina B5
(cido nicotnico)

Coenzima:

FAD
Es grupo prosttico

Deriva de la Vitamina B2 (flavina)

FAD

forma oxidada

FADH2 forma reducida

CINTICA ENZIMTICA

La cintica enzimtica estudia la

velocidad de las reacciones catalizadas
por enzimas.

La velocidad de una reaccin catalizada por

una enzima puede medirse con relativa
facilidad, ya que en muchos casos no es
necesario purificar o aislar la enzima.

Estos estudios proporcionan informacin

directa acerca del mecanismo de la reaccin
cataltica y de la especificidad de la enzima.

CINTICA ENZIMTICA

CINTICA ENZIMTICA

MODELO CINTICO DE
MICHAELIS-MENTEN

Finales del siglo XIX: estudios sistemticos del efecto de la

concentracin inicial del sustrato s/la actividad enzimtica.
En 1882 se introdujo el concepto del complejo enzima-sustrato
como intermediario del proceso de catlisis enzimtica.
En 1913, Leonor Michaelis
y
Maud
Menten
desarrollaron esta teora y
propusieron una ecuacin de
velocidad
que
explica
el
comportamiento cintico de las
enzimas.

MODELO CINTICO DE MICHAELISMENTEN

v = v3 = k3 [ES] =

V = velocidad de la reaccin catalizada por la enzima

La v de una reaccin catalizada por una

enzima puede medirse con relativa
facilidad (en muchos casos no es necesario purificar
o aislar la enzima).
La medida se realiza siempre en:
condiciones ptimas de pH, temperatura,
presencia de cofactores, etc,
C/concentraciones saturantes de sustrato.
En estas condiciones, la velocidad de
reaccin observada es la velocidad
mxima (Vmax).
Se expresa en aparicin de los productos o la
desaparicin de los reactivos

MODELO CINTICO DE MICHAELISMENTEN

CLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA
v = v3 = k3 [ES]

V = velocidad de la
reaccin catalizada por
la enzima

La representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Menten es una hiprbola . La

Vmax corresponde al valor mximo al que tiende la curva experimental, y la KM
corresponde a la concentracin de sustrato a la cual la velocidad de la reaccin es la
mitad de la Vmax.

La constante de Michaelis-Menten (KM) es un

parmetro cintico importante por varias
razones:

KM = [S] para la cual la velocidad de

reaccin es la mitad de la velocidad
mxima.

El valor de KM da idea de la afinidad de la

enzima por el sustrato:
a menor KM, mayor afinidad del enzima por el
sustrato, y
a mayor KM, menor afinidad.

Hay enzimas que no obedecen la ecuacin de MichaelisMenten. Se dice que su cintica no es Michaeliana.

Esto ocurre con las enzimas alostricas, cuya grfica

de v frente a [S] no es una hiprbola, sino una sigmoide

En la cintica sigmoidea, pequeas variaciones en la

[S] en una zona crtica (cercana a la KM) se traduce en
grandes variaciones en la velocidad de reaccin.

Regulacin de la actividad
enzimtica
Como ocurre con toda protena, la actividad de una
enzima depende de factores tales como:
la temperatura,
el pH,
las disoluciones salinas,
los solventes,
los activadores y los inhibidores,
el tiempo de reaccin.

Factores que afectan la

cintica enzimtica
La actividad puede estar afectada por:

pH - Temperatura -

Fuerza inica

Inhibidores

La mayora de las enzimas son muy sensibles a los cambios de pH.

Desviaciones de pocas dcimas del pH ptimo pueden afectar drsticamente
su actividad. Por ello, los seres vivos han desarrollado sistemas ms o menos
complejos para mantener estable el pH intracelular

Efecto el pH

Variaciones del pH del medio

producen cambios en el estado
de ionizacin de algunos grupos
de una enzima, afectando su
estructura tridimensional y su
actividad.
El cambio en la ionizacin de
grupos qumicos del sitio activo
puede alterar el reconocimiento
del sustrato o la reactividad de
los AA del sitio activo.
Todas las enzimas tienen dos
valores lmites de pH entre los
cuales son efectivas, ms all se
desnaturaliza y deja de actuar.

Efecto de la Temperatura

Factor temperatura
Si aumenta la temperatura, aumenta la energa cintica de las
partculas y su movilidad producindose un aumento en el nmero de
colisiones y la velocidad de la transformacin. Si la temperatura
contina aumentando, se comienzan a romper uniones
intermoleculares (responsables de la conformacin) y, as, comienza
a disminuir su actividad. Si la TC es excesiva, la enzima se

Factores que afectan la cintica

enzimtica: INHIBIDORES
Ciertas molculas pueden inhibir la accin cataltica
de una enzima: son los inhibidores.

Irreversibles
E + I EI
se unen fuertemente a la E y el complejo no se
disocia

Reversibles
E + I EI

Inhibidores Reversibles
Pueden actuar de 3 modos:
ocupan temporalmente el centro activo por
semejanza estructural con el S original:
inhibidor competitivo

Se unen a otro sitio en la Enz y alteran su

conformacin espacial, impidiendo su unin
al S: inhibidor no competitivo

Se unen al complejo E-S impidiendo la

catlisis
del
sustrato:
inhibidor
acompetitivo

Inhibidores Reversibles
inhibidor competitivo

Inhibidores Reversibles
inhibidor no competitivo

Inhibidores Reversibles
inhibidor acompetitivo

Inhibidores Reversibles
inhibidor acompetitivo

Regulacin de la catlisis
enzimtica

las concentraciones del sustrato y

de los productos finales
presencia de inhibidores
modulacin alostrica
modificacin covalente
activacin por proteolisis (zimgenos)
isoenzimas

MODULACIN ALOSTRICA DE
LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
Hay enzimas que pueden adoptar 2
conformaciones interconvertibles llamadas R
(relajada) y T (tensa).
R es la forma ms activa porque se une al sustrato
con ms afinidad. Las formas R y T se encuentran
en equilibrio R <==> T

Enzima alostrica

ACTIVADORES ALOSTRICOS

Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma

R actuando s/una regin de la Enz distinta del
centro activo.
Son los llamados moduladores positivos
activadores alostricos.
El propio S es a menudo un modulador positivo.

INHIBIDORES ALOSTRICOS

Las sustancias que favorecen la forma T y

actan en lugares distintos del centro
activo de la enzima y disminuyen la
actividad enzimtica: son los
moduladores alostricos negativos.
negativos

Regulacin de la actividad
enzimtica por MODIFICACIN
COVALENTE

Hay enzimas que pasan de la forma inactiva a la activa

por unin covalente a un grupo qumico de pequeo
tamao como el Pi o el AMP.

Tambin se da el caso inverso (E activa -> E inactiva)

El enzima no
fosforilado es inactivo

El enzima
fosforilado es

Regulacin de la actividad
enzimtica por ACTIVACIN
PROTEOLTICA

Algunos enzimas no se sintetizan como E activa, sino

como protenas precursoras sin actividad enzimtica.
Estas protenas se llaman proenzimas o zimgenos.

Para activarse, los zimgenos sufren hidrlisis que

origina la liberacin de uno o varios pptidos.

El resto de la molcula proteica adopta la

conformacin y las propiedades de la enzima activa.

Ej.: enzimas digestivas se secretan en forma de

zimgenos y en el tubo digestivo se convierten en la
forma activa. Es el caso de la quimotripsina, que se
sintetiza en forma de quimotripsingeno

Regulacin de la actividad
enzimtica por ACTIVACIN
PROTEOLTICA

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA POR MEDIO DE ISOENZIMAS

Algunos enzimas tienen distinta estructura molecular aunque

su funcin biolgica es similar. Se llaman isozimas o
isoenzimas.

Estas diferencias de estructura se traducen en ligeros cambios

en sus propiedades, de forma que cada isozima se adapta
perfectamente a la funcin que debe realizar.

As, podemos observar la existencia de isoenzimas en funcin de:

el tipo de tejido: Por ejemplo, la lactato deshidrogenasa
presenta isoezimas distintas en msculo y corazn.

el compartimento celular donde acta: Por ejemplo, la malato

deshidrogenasa del citoplasma es distinta de la de la mitocondria.
el momento concreto del desarrollo del individuo. Ej: algunos
enzimas de la glicolisis del feto son diferentes de los mismos
enzimas en el adulto.

APOENZIMA