SEMINARIO 1

INMUNOLOGA
5FM1

BAZO
rgano

localizado detrs y a la izquierda del

abdomen.

Forma:

Ovoide en humano
Alargado y aplanado en rata

Color rojo vino.

 Envuelto

por
una
cpsula fibrosa de la que
desprende trabculas.
Pulpa roja (eritrocitos)
Pulpa
blanca
(leucocitos):
alrededor
de las ramas de la
arteria esplnica central
formando
estructuras
envolventes (separadas
parcialmente de pulpa
roja con una capa de
tejido
linfoide
laxo
conocido como zona
marginal).

 Pulpa Blanca
Las clulas linfoides se distribuyen:
forma dispersa: tejido linfoide interfolicular y zona marginal

(predominan clulas T)
agrupadas en ganglios o folculos (predominan clulas B)

 Zona Marginal

Ocurre el encuentro entre las clulas procesadoras y

presentadoras de antgeno y las clulas T.
Las clulas T y B son adyacentes y se entremezclan en
la zona marginal

TIMO
rgano situado en:

Mamferos: el mediastino anterior y superior del trax

Humanos: mediastino superior (apical a corazn), protegido
por la caja torcica.

Bilobulado. Color rosa plido.

Clulas T terminan su proceso de maduracin.
Eliminacin de las clulas auto reactivas.

 Corteza:
Gran nmero de linfocitos de todos tamaos, adems de
macrfagos y algunas clulas cebadas.

Mdula:
Similar a la corteza pero su densidad celular linfoide es menor.
Estructuras de funcin incierta conocidas como corpsculos
tmicos o de Hassal (grupos de clulas epiteliales queratinizadas
ordenadas concntricamente y sobrepuestas unas sobre otras)

Las clulas T maduras se colectan en los senos linfticos y

sanguneos medulares y desde aqu son llevados por la
circulacin sangunea y linftica a los rganos linfoides
secundarios.

GANGLIOS LINFTICOS

Estructuras ovoides ordenadas en forma de rosarios.

Distribuidos en todo el organismo, particularmente
en:
Cuello, cavidad torcica, axilas, tronco, ingles, regin
popltea y cavidad peritoneal.

 Se encuentran envueltos por una capsula de tejido

fibroso, por debajo de la cual se descarga la linfa
aferente en la regin subcapsular contigua a la
corteza.

Linfocitos,

clulas
plasmticas,
macrfagos,
clulas interdigitantes, clulas dendrticas y
algunos granulocitos y eritrocitos.

 Corteza:

las clulas se
distribuyen de manera
dispersa o formando
folculos linfoides.

El

tejido linfoide se
extiende a la mdula
en forma de cordones o
columnas
donde
abundan
clulas
plasmticas
y
macrfagos.

 Corteza: LcB
Centros germinales:

LcB en proceso activo

de proliferacin
Los folculos y de ah a los cordones medulares,

donde se transforman a clulas plasmticas y

descargan su contenido en anticuerpos.
Los Ac son recogidos por la linfa y por la sangre, para
ser transportados a otros rganos linfoides y a la
circulacin mayor.

Paracorteza: LcT

PLACAS DE PEYER
Tejido linftico asociado a mucosas.
Abundan en leo terminal.
Varan en tamao de 1-30 cm

 Los linfocitos forman

un folculo que consta

de un domo central
grande de linfocitos B
rodeado por nmeros
ms
pequeos
de
linfocitos
T.
Las
clulas
dendrticas
residentes dentro de
la placa de Peyer
presentan el antgeno
a linfocitos T.

 Folculos

linfoides

(LcB)

T.

linfoide
interfolicular (LcT)

Regin

del
domo
(clulas dendrticas y
la
parte
ms
superficial
est
recubierta por una
capa de clulas M)

Clulas M: actividad de

pinocitosis
selectiva,
tolerancia oral

FAGOCITOSIS
Ellie

Metchnikoff en 1880 descubri la funcin de las clulas

fagocticas.

La

palabra fagocitosis proviene del griego phagos = el que

come y Kytos= clula.

Es

el proceso en el cual las clulas especializadas buscan,

localizan, identifican e introducen a su citoplasma partculas o
grmenes extraos para matarlos y digerirlos

Cuando

un agente agresor sobrepasa las barreras naturales

constituidas por la piel y las mucosas, el segundo mecanismo
de defensa entra en accin: la fagocitosis, esta funcin es
ejercida principalmente por los PMN y Macrfagos.

 ADHERENCIA del fagocito con el endotelio vascular.

Este proceso es promovido por citosinas y otras

molculas reguladas de la respuesta inmune como IL-1,
IFN y el TNF producidas por macrfagos y leucocitos en
el tejido que sufri agresin.
Estas molculas al difundirse llegan a las clulas del
endotelio vascular y generan en ellas la produccin y
expresin en la membrana de molculas de adherencia
como las selectinas y los ICAMs (ICAM-1, ICAM-2, VCAM1, MAdCAM-1).
Por influjo de las mismas citosinas los fagocitos expresan
en su membrana otras molculas de adherencia llamadas
inegrinas (LFA-1, CR-3, VLA-4 y LPAM-1), que son
complementarias de las expresadas en las clulas
endoteliales a las que se unen vidamente.

 QUIMIOTAXIS:

tanto los PMN como los monocitos

responden a molculas que se forman en el
tejido agredido.
Dos quimiocinas los atraen, la MCP-1 o molcula

quimioatrayente para los monocitos y la IL-8 para los

PMN.
En un punto especfico, determinado por la presencia y
activacin de quimiocinas, los fagocitos movilizados
establecen interacciones intercelulares de gran afinidad
con el endotelio por medio de integrinas y otros
ligandos endoteliales.

En especial las molculas endoteliales LFA-a, CR3 y VLA-4

se adhieren a ligandos especficos sobre los fagocitos,
entre ellos VCAM-1 e ICAM-1. La expresin de estos
ligandos sobre la superficie del fagocito es regulada por
protenas inflamatorias, como el TNF y la IL-1.
Es en ese punto de movilizacin lenta cuando los
fagocitos, atrados por gradientes de concentracin de las
quimiocinas, atraviesan el epitelio vascular hacia el foco
de infeccin patgena.

 OPSONIZACION es el proceso por el que se marca

a un patgeno para su ingestin y destruccin

por un fagocito.
Implica la unin de una opsonina, en especial, un

anticuerpo a un receptor en la membrana celular del

patgeno.
Tras la unin de la opsonina a la membrana, los
fagocitos son atrados hacia el patgeno.
La porcin Fab del anticuerpo se une al antgeno, en
tanto que la porcin Fc del anticuerpo se une al
receptor Fc del fagocito, facilitando la fagocitosis.
El complejo receptor-opsina tambin puede crear otros
productos como las protenas del sistema del
complemento C3b y C4b.
Estos componentes se depositan en la superficie celular
del patgeno y contribuyen a su destruccin.

 Tambin se puede destruir la clula por un proceso

denominado citotoxicidad dependiente de anticuerpo

en el cual el patgeno no necesita ser fagocitado
para su destruccin.
Durante este proceso, el patgeno es opsonizado al unrsele

un anticuerpo IgG.
El anticuerpo desencadena la liberacin de productos de lisis
de clulas como monocitos, neutrfilos, eosinfilos y clulas
asesinas naturales. Este proceso puede provocar la
inflamacin de los tejidos circundantes y daar las clulas
sanas.

 INGESTIN

La unin a receptores de adherencia promueve seales

de comunicacin intracelular que resultan en la
invaginacin de la membrana del fagocito rodeando al
receptor y su ligando patognico.
Al rodear por completo al complejo receptor: molcula, la
membrana se une en sus extremos y libera al interior de
la clula un fagosoma.
Esto puede ocurrir en ms de un punto de la membrana
celular.

 DESGRANULACIN
Una vez endocitados, y como consecuencia de la fusin entre

fagosomas y los grnulos citoplsmicos, los microorganismos

se ponen en contacto con las enzimas hidrolticas contenidas
en los grnulos.
Aunque hay varios tipos de grnulos (tambin llamados
lisosomas), aqullos relacionados con la funcin hidrolticadigestiva de las clulas fagocticas son los grnulos primarios o
azurfilos y los grnulos secundarios o especficos.
Los grnulos azurfilos contienen adems, lisozima, elastasa,
catepsina G, mieloperoxidasa, varias glicosidasas cidas y
otras hidrolasas, mientras que los grnulos secundarios
contienen lisozima, lactoferrina y colagenasa.
Si bien algunas de las enzimas hidrolticas, como la lisozima, la
elastasa y la catepsina G, pueden participar en la resistencia a
la infeccin por algunos microorganismos, la actividad de la
mayora de ellas est ms bien relacionada con los procesos
digestivos que siguen a los eventos bactericidas.

CLASIFICACIN DE LOS
MECANISMOS BACTERICIDAS DE
LA CLULA

Independientes de O2
Dependientes de O2

MECANISMOS BACTERICIDAS Y
CITOLITICOS INDEPENDIENTES
DE O2

El NO es producido por accin de molculas inductoras

como:
- IFN
- TNF-

- IL-1
- LPS

Unidas a sus respectivos receptores activan factores de

transcripcin en macrfagos

Estos ltimos activan la produccin de xido ntrico

sintasa inducible o iNOS2

Bases
qumicas
de
citotoxicidad
del
NO
dependen de su unin con Fe
de
ciertas
enzimas
esenciales de algunos ciclos
vitales del microorganismo

Forman
complejos
nitrosulfuroferrosos
que
inactivan
la
enzima
y
bloquean los procesos vitales

Provocan la muerte
microorganismo

El NO puede reaccionar con

el anin superxido y formar
el peroxinitrito (ONOO)

del

PROTEINA BACTERICIDA
INCREMENTADORA DE LA
PERMEABILIDAD
Presente en grnulos de neutrfilos jvenes
Tiene un efecto especial en bacterias Gram
A mayor incremento en la permeabilidad de
membrana,
mayor
susceptibilidad
microorganismo al efecto de otras enzimas

la
del

OTROS SISTEMAS
CAMBIO DE pH
Con la produccin del NO, el pH dentro del

fagosoma se eleva
Se facilita la accin de las protenas
catinicas o defensinas
Posteriormente, el metabolismo anaerbico
lleva a la rpida produccin de cido lctico
y cido carbnico (pH entre 6.5 y 4)

LIBERACIN DE LISOZIMA
Dentro de grnulos de
los PMN:

- Proteasas
- Enzimas hidrolticas
- Lisozima
- Otras enzimas

Destruyen

microorganismos al
alterar su estructura

MECANISMOS BACTERICIDAS Y
CITOLITICOS DEPENDIENTES DE
O2
Formado el fagosoma hay un incremento del metabolismo de
la clula conocido como estallido respiratorio

El estallido respiratorio se caracteriza por el rpido aumento

del consumo de O2

La oxidacin de la Glc se incrementa por la va de la hexosa

monofosfato

Se produce una serie de radicales de distinta actividad

biolgica, responsables de la destruccin de muchos
microorganismos

 La Glc dentro del fagocito en reaccin

con ATP genera Glc-6-P y NADPH

La enzima reductasa de glutatin

(GSSG) interacta con Glc-6-P y
genera mas NADPH y pentosa

Se garantiza la disponibilidad de
NADPH

El NADPH iniciara el metabolismo del

O2 molecular

FORMACIN DE 1O2

El oxigeno puede ser oxidado generando singletes

La produccin de singletes genera luz (quimioluminiscencia)

La perdida de un e- le da gran inestabilidad a la molcula

El singlete intenta volver a la forma de triplete u O2
Esta alteracin electrnica le confiere una gran actividad
qumica

FORMACIN DE SUPERXIDO
O 2 + H 2O 2
2O2 + 2H+
El H2O2 tambin puede originarse por accin de la
mieloperoxidasa (MPO)

Fuerte actividad bactericida

Muchas bacterias poseen catalasas que desactivan el H 2O2
Puede difundirse al citoplasma y ser txico para las clulas
fagocticas

Es captado por el perxido de glutatin (GSH) y se produce

nuevamente H2O y se evita que la clula tenga un efecto

nocivo

FORMACIN DE -OH

El H2O2 genera radicales hidroxilo

Los radicales hidroxilo son muy
inestables
y
rpidamente
con
material orgnico

reaccionan
cualquier

ACTIVACIN DE HALOGENOS
Al formarse el fagolisosoma se libera MPO
La MPO hace que halgenos como el Cl- y el I- sean
activados por la presencia de H 2O2 para dar un hipohalgeno

El hipo-halgeno funciona directa o indirectamente

actuando sobre el amonio

Se genera mono y dicloroaminas que oxidan residuos

que tengan Cys, Met, Trp y Tyr

DESCARBOXILACIN DE aa

R-CHNH2-COOH

R-CHO + CO2 +

NH3

Esta controlada en parte por MPO

Degrada aa de la membrana bacteriana
y da lugar a la muerte del
microorganismo

No est suficientemente esclarecido

cul de todos los procesos es el ms
importante, pero parece que la
formacin de hipo-halgenos y de 1O2
son los de mayor actividad bactericida

NITROAZUL DE TETRAZOLIO
La forma oxidada del colorante esta formada por
dos grupos tetrazoleo sustituidos en las posiciones
2,3,5 por grupos metoxifenil, nitrofenil y fenilo
respectivamente.

NITROAZUL DE TETRAZOLIO

oxidado

La reduccion provocada por la adicion de dos

protones a los nitrogenos en posiciones 3 del
grupo anillo de tetrazoleo rompe este
sistema
entre los nitrogenos 2 y 3,
generando el producto de color azul intenso.

NITROAZUL DE TETRAZOLIO

Reducido

PROCESO DE REDUCCIN
La
reduccin
del
NBT
ocurre
cuando,
compitiendo con el oxgeno, la molcula es
reducida por el sistema de la NADPH-oxidasa
hasta su estado de formazan, un producto
insoluble de color azul.

REACCION DE REDUCCIN

NADPH-oxidasa
anion
superoxido

La reduccin del NBT tambin ocurre por

efecto directo del anin superxido. Las
clulas de los pacientes con deficiencia en la
G6PDH son incapaces de reducir al colorante
tanto en condiciones de reposo como de
fagocitosis.

Separaciones
cromatogrficas Electroforesis
.
Purificaci
n
Ultracentrifuga
cin.

Solubilidad de
las protenas

Mtodos de solubilizacin.
primer paso de la purificacin de una protena es
tenerla en solucin.
El

Por lo general deben liberarse de la clula que las

contiene. Para ello se induce la lisis celular (si la
protena de inters se localiza en el citosol):
Suspender las clulas en solucin hipotnica.Clulas animales
Uso de la lisozima. - Pared celular bacteriana.
Uso de detergentes o solventes orgnicos.

Procesos de ruptura mecnica:

o
o
o
o

Trituracin con arena o almina.

Uso de molinillo a alta velocidad (licuadora)
Homogeneizador
Prensa French (Rompe las clulas al hacerlas
pasar por un pequeo orificio).
o Sonicador
Luego se filtra o centrifuga para eliminar restos
celulares.

Estabilizacin de protenas
Para evitar que se daen irreversiblemente las
protenas separadas, ya que de no hacerlo puede
hasta anularse el rendimiento de la protena
purificada.
Para prevenir que se vea daado por el pH suele
disolverse en soluciones Buffer.
Temperatura- desnaturalizacin.
Minimizar la formacin de espuma
desnaturalizacin por la interface aire-agua.

SEPARACIONES CROMATOGRFICAS
CROMATOGRAFA DE FILTRACIN
EN GEL

Basada

en el tamao, tambin conocida

como cromatografa de exclusin molecular.

Una

mezcla de protenas en un volumen

pequeo se colocan en una columna rellena
con bolitas porosas compuestas por un
polmero insoluble pero altamente hidratado
(dextrano o agarosa). Como las protenas
grandes no pueden penetrar en el volumen
interno de las bolitas, se eluyen antes que
las pequeas.

CROMATOGRAFA DE
INTERCAMBIO INICO
Mtodo por el cual se separan en base a su carga

neta. Si una protena tiene carga neta positiva,

se unir normalmente a una columna de bolitas
que contengan grupos carboxilatos. Las protenas
con carga negativa fluirn ms rpido, seguidas
por las protenas con densidad baja en carga
positiva.

CROMATOGRAFA DE AFINIDAD
En

esta tcnica se aprovecha la alta afinidad de

muchas
protenas
por
grupos
qumicos
especficos.

Se usa para aislar factores de transcripcin.

Este mtodo es efectivo en la purificacin de
protenas que reconocen a determinados grupos X
por:

1.

Unin covalente de X o un derivado suyo a una

columna.

2. Adicin de una mezcla de protenas a esta

columna, luego se lava con amortiguador
para eliminar protenas no unidas.
3. Elucin de la protena deseada aadiendo una
concentracin elevada de una forma soluble
de X o cambio de las condiciones para alterar
la afinidad de la unin .

Solubilidad de las protenas

Efectos de los solventes orgnicos.

Solventes miscibles con el agua (acetona y el etanol).
Suelen ser buenos precipitantes de protenas.
Debido a que sus bajas constantes dielctricas reducen
el poder de solvatacin de sus soluciones acuosas
hacia los iones disueltos como las protenas.
Se hace a 0 C
A elevadas temperaturas desnaturalizan a las
protenas.

ELECTROFORESIS EN GEL
Electroforesis: Migracin de iones en un campo
elctrico

En

este mtodo se purifica de acuerdo a masas

moleculares; el gel sirve como un tamiz
molecular que potencia la separacin. Las
molculas ms pequeas que los poros del gel se
desplazan fcilmente a su travs, mientras que
las molculas mucho mayores que los poros
permanecen casi inmviles.

Mezcla de protenas se disuelve en un medio

con
dodecilsulfato
sdico
para
romper
interacciones no covalentes en las protenas
nativas.
Los aniones del SDS se unen a la cadena
principal a razn de un anin SDS por cada dos
residuos de aminocido.
Este
complejo
SDS
con
una
desnaturalizada tiene una carga
proporcional a la masa de la protena.

protena
negativa

Los complejos se someten a electroforesis y

despus se visualizan al teir con plata o con
azul de Coomasie.

ISOELECTROENFOQUE
Mtodo para separar protenas de acuerdo a su
punto isoelctrico
Se establece un
gradiente de pH
en un gel

Se carga la
muestra y se
aplica voltaje

Las protenas
forman bandas
que se pueden
separar para
futuros
experimentos

Las protenas
emigran hacia su
pH isoelctrico

ELECTROFORESIS DIMENSIONAL

Una muestra
se fracciona
inicialmente
por
isoelectroenfo
que

El gel de
isoelectroenfo
que se une a
un gel de SDSpoliacrilamida

Se realiza una
segunda
electroforesis
en una
segunda
dimensin

Ultracentrifugacin.
Las protenas se mantienen en solucin por el
movimiento trmico al azar (browniano).
Solo cuando se somete a estas a estas
molculas
a
aceleraciones
enormes
su
comportamiento empezara a parecerse al de
los granos de arena en agua (sedimentar).

Ultracentrfuga desarrollada en 1923 por el

bioqumico sueco The Svedberg (80, 000 rpm).

Sedimentacin
La velocidad a la que sedimenta una partcula
se relaciona con su masa (la densidad de
solucin y la forma de la partcula tambin
afectan la velocidad de sedimentacin).

El coeficiente de sedimentacin de una

protena (coeficiente de sedimentacin
por fuerza centrfuga).
Se expresa en Sbedbergs (S).

Unidades de 10-13 s

Ultracentrifugacin
analtica.

Ultracentrifugacin
zonal

Centrifugacin por
equilibrio en
gradiente de
densidad o
isopcnica.

La sedimentacin puede observarse pticamente.

Usado para caracterizar sistemas asociados no
covalentemente, subunidades de protenas.

La solucin macromolecular se coloca en una capa

sobre un gradiente de densidades (sacarosa).
Durante
la
centrifugacin
cada
tipo
de
macromolcula
forma una zona debido a su
coeficiente de sedimentacin.
El tubo se punza para recoger las fracciones.

Muestra disuelta en una solucin relativamente

concentrada de una sustancia densa (CsCl).
El campo gravitacional hace que CsCl forme un
gradiente de concentraciones.
Los componentes de la muestra forman bandas con
la parte de la solucin que es similar a su densidad.

Ultracentrifugacin zonal

Centrifugacin por equilibrio en

gradiente de densidad o
isopcnica.

Adyuvante
Sustancia

que incrementa la respuesta

inmunitaria a un antgeno con el que se
mezcla.

Vacuna acompaada con un adyuvante de Alumbre MF59 .

LOS ADYUVANTES ACTUAN MEDIANTE 3

1. Formando un deposito
de antgeno en el lugar de
MECANISMOS
la aplicacin de la vacuna a partir del cual se va
liberando el antgeno durante un periodo
determinado de tiempo.
2. Presentando el antgeno a las clulas implicadas
en la respuesta inmunitaria, en especial las APC,
actuando como una seal coestimuladora de los
macrfagos, lo cual aumenta su eficacia como APC,
este papel lo adquiere el adyuvante que contiene
productos bacterianos.
3. Induciendo la secrecin de factores estimulantes de
la respuesta inmunitaria (citosinas) que actan sobre
las clulas del sistema inmunitario, en especifico
clulas T y B.

 La inmunizacin activa

afecta a las personas un

vez en su vida, debido a
los LcB de memoria,
producidos durante la
primera infeccin dan
lugar a una respuesta
inmunolgica tan rpida
que no llega a producirse
una segunda infeccin.

Composicin y mecanismos de accin de los principales adyuvantes

Nombre del adyuvante

Composicin

Adyuvante incompleto
de Freund

Emulsin de aceite en agua

Adyuvante completo de
Freund

Emulsin de aceite en agua

con microbacterias muertas

Adyuvante de Freund
con MDP

Emulsin de aceite en agua

con muramildipptido (MDP),
un constituyente de las
microbacterias

Alumbre (hidrxido de
aluminio)

Gel de hidrxido de aluminio

Alumbre ms Bordetella
pertussis

Gel de hidrxido de aluminio

con bateras B. pertussis
muertas

Complejos
inmunoestimulables
(ISCOM)
MF59

Matriz de micelas lipdicas

que contienen protenas
virales
Emulsin de escualenoaceite-agua

Mecanismo de accin
Liberacin demorada de
antgeno; mejor captacin por
macrfagos
Liberacin demorada de
antgeno; mejor captacin por
macrfagos; induccin de
macrfagos coestimuladores
Similar al adyuvante completo de
Freund
Liberacin demorada de
antgeno; mejor captacin por
macrfagos
Liberacin demorada de
antgeno; mejor captacin por
macrfagos; induccin de
coestimuladores
Suministra antgeno al citosol;
permite la induccin de linfocitos
T citotxicos
Liberacin demorada del
antgeno

Vacuna
BCG

SABIN

DPT
Anti
sarampin

Adyuvante
Adyuvante
completo de
Freund
Adyuvante
incompleta de
Freund (vacuna
atenuada)
Hidrxido de
aluminio
------

PARMETROS QUE INFLUYEN EN

EL PROCESO DE INMUNIZACIN
Los

Ag son ms inmunognicos cuando se

presentan en una forma insoluble o con un
adyuvante; el adyuvante ms comnmente
utilizado es el adyuvante completo de Freund.

El

modo de accin del adyuvante no est claro,

pero es probable que la lenta liberacin del
antgeno del depsito de la emulsin acte
como una serie prolongada de pequeas
inyecciones.

 Una

proporcin de la subsecuente produccin de

Ac ocurre dentro del granuloma inducido por
Mycobacterium tuberculosis en el adyuvante.
El adyuvante completo de Freund es una mezcla de

El

aceite (Bayol F) y detergente (manoleato) que contiene

M. tuberculosis.
El adyuvante incompleto de Freund es una mezcla de
aceite y detergente.

adyuvante de Freund no es clnicamente

aceptado para uso humano, por lo que se debe
tener cuidado para evitar la contaminacin
durante su uso experimental.

RUTAS PARA INMUNIZACIN

Subcutnea: Para protena antignica emulsificada
en el adyuvante completo/incompleto de Freund.
Debe ser inyectado en mltiples sitios, y volmenes
razonables (100L para ratones, 400 L para
conejos).

Intramuscular: Para protenas antignicas. Hace

posible la lenta liberacin del antgeno en los nodos
linfticos locales. Tambin es til para preparaciones
de DNA, por ejemplo: plsmidos.

 Intradrmica: Usado para la lenta liberacin del

antgeno en animales grandes, por ejemplo conejo.

Intraperitoneal: Usado para administrar partculas o

antgenos solubles en solucin salina. Es una ruta
particularmente efectiva para generar anticuerpos
para clulas.

Intraesplnica: Aplicable cuando hay una mnima

cantidad de antgeno disponible.

Intravenosa: Usado para dirigir el antgeno a rganos

tales como el bazo. Es aplicable para estimulacin
final antes de la generacin de un hibridoma (clulas
plasmticas + clulas cancerosas).

ANIMALES DE EXPERIMENTACIN
Conejos:

Usar entre 50 y 500 g de protena antignica, en el

adyuvante completo de Freund, inyectado
subcutneamente en las reas de piel suelta. Cerca
de 0.1 mL en cada uno de los dos lados.
Repetir la inoculacin despus de dos semanas usando
el adyuvante incompleto de Freund, siendo cuidadoso
de inyectar en lugares diferentes a los que previamente
se hizo.

 Ratones y ratas:

Buenas respuestas de clulas B en ratones son

obtenidas por inmunizacin intraperitoneal con 0.1 mL
de protena precipitada por alumbre (400g) mezclado
con vacuna de tosferina estndar.
IgG e IgM pueden ser detectadas en el bazo despus de
8 das. El mximo nivel de Ac en suero se alcanza en
10-14 das.
Si se requieren clulas B de memoria, se deben esperar
al menos 2-3 meses despus de la ltima inmunizacin.
Si se requieren clulas T, se recomienda el uso del
adyuvante completo de Freund.

 Cabras, ovejas y cerdos.

Estos animales ms grandes pueden ser inmunizados

fcilmente y proveen volmenes relativamente grandes
de suero.
Se inmunizan por inyeccin subcutnea con cerca de 1
mg de protena antignica en el adyuvante completo de
Freund a un mximo de 0.25 mL.

PARMETROS EN EL ANIMAL QUE

INFLUYEN EN EL PROCESO DE
INMUNIZACIN

La edad

Se necesita un conejo de semanas

de edad de peso aproximado de
1.5 kg por que es cuando el
conejo comienza a desarrollar su
sistema inmune contra patgenos.

La inmunizacin se desarrollo para

que este produzca anticuerpos
especficos contra el patgeno
inducido.

MTODO DE ADMINISTRACIN
Se pueden emplear vas tales
como la va oral, nasal,
intramuscular, intravenosa,
intraperitoneal, intradrmica,
subcutnea.
El estado fsico del antgeno

los antgenos en solucin como

es este caso pueden la
subcutnea o intradrmica se
utiliza al antgeno acompaado
con adyuvante.

 Se debe tener cuidado y estar

revisando constantemente al
conejo ya que debido por el
adyuvante (adyuvante de
Freud) con el antgeno que
se
esta
administrando
ocasiona lesiones en la zona
donde se esta inmunizando.

DOSIS
La

dosis debe ser de 1 ml

del antgeno (soluble), en
distintos puntos del lomo