380 nm

470 nm
Espectroscopa UV/Visible

Gran parte de los mtodos analticos que se basan en principios pticos se hacen estudiando
soluciones tal es el caso de los mtodos colorimtricos.
SI se hace pasar una luz blanca por una solucin colorida, la radiacin electromagntica de
cierta longitud de onda es absorbida por la solucin, mientras que otras pasan libremente.
Estas ltimas son responsables del color observable (trasmitido), mientras que las que se
absorben se conocen como colores complementarios
La cantidad de energa que se absorbe, resulta de una frecuencia determinada y constituye la
base de la Ley de Lambert y Beer.
La absorbancia es directamente
proporcional a la concentracin de
especies absorbentes presentes en la
muestra

A = bc

Po
b
P = potencia de la radiacin
C = concentracin moles/litro
b = anchura de la rejilla
= Coeficiente de extincin molar
Litros /mol x cm

La absorbancia (A) se designa

tambin como actividad ptica y se
encuentra
definida
por
la
transmitancia (T)
La transmitancia es la relacin que
existe entre la intensidad de luz que
pasa o es transmitida por una
muestra (P) con aquella que incide
sobre la muestra (Po)

A = Log 1/T

T = Po/P

Un espectro de absorcin es un grfico que

representa en que forma la absorbancia (o )
depende de la concentracin

La Ley de Lambert y Beer es

vlida,
solamente
para
soluciones diluidas, un aumento
considerable en la concentracin
puede originar interacciones
entre las molculas del soluto o
alteraciones en el ndice de
refraccin.

La Ley de Lambert y Beer tambin

puede presentar desviaciones:
Desviaciones
qumicas:
inestabilidad de las sustancias en
las condiciones en las que se
realiza el anlisis.
Desviaciones instrumentales: uso
inadecuado de la longitud de onda
que se selecciona para la
realizacin de un anlisis.

La ley de Lambert y Beer es valida para

una longitud de onda determinada, es
decir para una luz monocromtica

Existe una relacin logartmica entre la

trasmitancia (T) y la absorbancia (A):

Efecto batocrmico: es el desplazamiento

de la banda de absorcin haca longitudes
de onda mayores como consecuencia de
un aumento de temperatura. Se produce
cuando un grupo auxcromo
se
encuentra unido a uno cromforo.

-log T = A
La evaluacin de los errores posibles
debido a esta relacin, como funcin de
la concentracin del soluto indican
menor
fuente
de
error
para
concentraciones de entre 10 y 70 % de
Transmitancia
La temperatura, es una variable que
tambin puede originar desviaciones a la
ley de Lambert y Beer. Otros aprmetros
que lo origina son el pH, cambios de
concentracin,
mecanismos
de
copigmentacin.

Efecto
hipsocrmico:
ocurre
como
consecuencia de un desplazamiento de la
banda de absorcin a longitudes de onda
menores al disminuir la temperatura. Se
observa a menudo al cambiar de
disolventes no polares a polares

Anlisis colorimtrico
Se emplea para analizar sustancias
que
absorben
radiacin
electromagntica en la regin visible
del espectro electromagntico. Estos
mtodos se basan en la comparacin
del color de una sustancia de
concentracin desconocida con otra de
concentracin conocida
Cromforo: grupo funcional que
absrobe radiacin en el ultravioleta
cercano o el visible cuando est unido a
un residuo saturado que no absorbe y
que no tiene elecrones de valencia no
compartidos ni de no enlace, La
mayora de los grupos cromforos no
tienen enlaces saturados
Auxcromos grupos funcionales tales
como OH, NH2, Cl, que tienen
electrones de valencia de no enlace y
no absroben radiacin a longitudes de
onda mayores a 200 m pero tienen
una absorcin intensa en el UV lejano.

Cromforo

Tipo de compuesto

Ejemplo

Alqueno

RC=CR

Etileno

Alquino

RC = CR

Octino

Carbonilo
(cetona)

R-CO-R

Acetona

Carbonilo
(aldehido)

R-COH

Acetaldehido

Carboxlo

R-COOH

Acido actico

Amido

R-CO-NH2

Acetamida

Nitro

R-NO2

Nitrometano

Nitrato

R-O-NO2

Nitrato de n-butilo

Nitroso

R-N=O

Nitrosometano

Azo

R-N=N-R

Azobutano

Existen diversas tcnicas de anlsis colorimtrico:

Tubos de ensayo:
1.- Preparacin de una solucin de concentracin
conocida
2.- Preparar disoluciones de la solucin de
concentracin conocida en tubos de ensaye
(dimensiones 1 x 15 cm).
3.- Comparar la solucin problema con las
disluciones.
Muestra
problema

Luz

Dilucin

Desventaja: est
fuentes de error

sujeto

Series de estndares

Observador

muchas

Tubos de Nessler:
Ventajas:
1.- Preparacin de
concentracin conocida

una

solucin

de

2.- Preparar disoluciones de la solucin de

concentracin conocida en tubos de Nessler.
3.- a) Comparar la solucin problema con las
diluciones.
b)Comparar los colores observando a lo
largo del tubo

De acuerdo a la Ley de Lambert y Beer:

Log Po/P = abc
Si las dos soluciones absorben igual
cantidad de luz:
b1c1 = b2c2

Permite realizar determinaciones cuantitativas

en soluciones ms diluidas. Debido a la mayor
longitud el paso de luz.
No es necesario tener volmenes iguales y por
lo tanto , tampoco concentraciones iguales de
estndar yproblema

Espectroscopa UV-Visible
Espectroscopa atmica
Luminiscencia
Absorcin atmica
Emisin atmica
Espectroscopa IR
Espectroscopa RAMAN
Mtodos Radioqumicos
Espectroscopa RMN

Mtodos
espectroscpicos
El efecto de la interaccin de la radiacin electromagntica con
la materia es uno de los medios ms poderosos para obtenerse
informaciones sobre su estructura microscpica
Caractersticas de las especies absorbentes
Las sustancias pueden absorber radiacin por s solas
Se puede aadir un reactivo para formar una especie
colorida
El reactivo que forma el color debe reaccionar
selectivamente en forma rpida y cuantitativamente

Espectros de absorcin: es una grfica

de la reduccin de la potencia radiante
(absorbancia) en funcin de la longitud
de onda o frecuencia. Su aspecto
depende de la complejidad, estado fsico
y medio ambiente de la especie
absorbente

Anlisis cualitativo

Anlisis cuantitativo

Una de las aplicaciones primarias de la

espectroscopa
UV/Visible
es
la
identificacin de molculas orgnicas. Se
basa en el principio de que dos molculas
no presentan exactamente la misma
distribucin electrnica, as la absorcin
mxima y la absortividad molar resultan
carctersticas de cada especie

Est tcnica es ampliamente usada para medir

concentraciones de especies absorbentes
presentes en la muestra. Deben existir dos
condiciones para que el anlisis pueda ser
realizado:

la potencia radiante I0
como
funcin de un plano perpendicular
a la direccin del flujo de la
radiacin Experimentalmente, la
radiacin absorbida por una
muestra
es
determinada
comparndose la potencia radiante
del haz transmitido en la ausencia
de especies absorbentes, con la
potencia radiante transmitida en
la presencia de estas espcies.

La especie de inters debe absorber luz en el

rango del espectro electromagntico localizado
entre los 200 y 800 nm, o ser convertido en
otra molcula que absorba radiacin en dicho
rango.
Otras especies que absorban luz a la misma
regin que la especie de inters deben ser
consideradas y descontadas

P0

Segmento A

dP: disminucin del poder radiante en

una capa infinitesimalmente pequea
N: nmero de especies absorbentes
K: constante de proporcionalidad

Segmento A
P

P-dP

P0

P: potencia radiante
y

Pt

b: anchura de la celda de absorcin

= coeficiente de absorcin molar a
A = Absorbancia
T = Transmitancia
P0= Potencia radiante incidente

x
db
b

Pt= Potencia radiante transmitida

especie

N 6.02 x10exp23

mmol

Si

mmol
db.x. y.ml
ml

N = kc db

mmol
db.x. y.ml
ml

= Nmero de milimoles =Concentracin x volmen

k 6.02 x10exp23 .xy

especie
cm
mmol

Nmero de choques N P
Por lo tanto = dP N P = kP c db

Entonces:

dp = -kP c db

Entonces:

dP = -kP c db

log

Po

Pt

b
dPo
k cdb
b
Po

in

Pt
kPcdb
Po

Pt
2.303 log
kPcdb
Po

Pt
kbc
log

Po
2.303

Pt
bc
Po

Si,

Pt
T
Po

LogT bc

LogT A

LogT A bc
Ley de Lambert y Beer

Si se tienen el valor de T o A, y se conocen

y b, entonces se puede hallar la
concentracin de una sustancia determinada

A= b c

Representacin grfica de la Ley de Beer, para soluciones de KMnO4 en l = 545 nm y un

camino ptico de 1 cm. a) En %Transmitancia (%T vs C - ; b) En Absorbancia 8 A vs c) -.

Problema:
emplea
las
relaciones
de
la
Ley
de
Lambert y Beer para resolver
el siguiente ejercicio:

En que intervalo de concentracin se podra

realizar el anlisis de un quelato de fierro (II), que
posee un valor de de 12000, si se limitan las
lecturas de transmitancia entre 0.200 y 0.650,
suponiendo una trayectoria ptica de 1 cm

Fenmenos involucrados cuando un haz (monocromtico)

de radiacin incide sobre una cubeta conteniendo una
solucin que absorbe en la longitud de onda incidente.

El efecto ms significativo ocurre

cuando parte de la radiacin es
absorbida por el medio que est
siendo analizado. Sin embargo, este
no es el nico efecto que puede ser
observado.

Io = Ir + Ie + Ia + It

Io = Intensidad del haz incidente,

Ir = Intensidad del haz reflejado, resultado de las diferencias del ndice de refraccin
entre la especie absorbente y el ambiente,
Id = Intensidad del haz dispersado, resultado de un medio no homogneo
(suspensin) y/o de fluctuaciones trmicas,
Ia = Intensidad del haz absorbido por el medio
It = Intensidad del haz transmitido

Parte de la radiacin incidente puede

ser reflejada, dependiendo de la
especie
absorbente
o
de
las
diferencias entre el ndice de
refraccin del medio donde la
radiacin se propaga e del medio que
est siendo analizado (inclusive por
las paredes de la cubeta), al mismo
tiempo
que
otra
parte
podr
simplemente ser dispersada, en el
caso de que el medio no sea
transparente y homogneo

 LogT A bc

De esta expresin, se deduce que si se tienen el

valor de T o A, y se conocen y b, entonces se
puede hallar la concentracin de una sustancia
determinada

Las leyes de absorcin se basan en el

postulado de Lambert y Berr, el cual
nos da la razn de la transmitancia y la
energa radiante, de acuerdo a los
siguientes principios:
La energa radiante monocromtica,
transmitida en un medio homogneo
istropo es proporcional a la energa
radiante incidente.
La relacin entre la energa radiante P
y la energa radiante transmitida es
una constante, dada por la siguiente
expresin:

Pt
T
Po

La energa de radiacin transmitida

decrece
en
progresin
geomtrica
cuando la longitud del camino ptico
aumenta en progresin aritmtica. Es
decir, capas iguales en espesor absorben
fracciones iguales de energa de
radiacin incidente sobre ella
Postulado de la ley de Beer:
Incrementos sucesivos en el nmero de
molculas identicas absorbentes que se
encuentran en la trayectoria de un haz de
radiacin
monocromtica
absorben
fracciones iguales de la energa radiante
que las atraviesa.

Ley de la aditividad de las absorbancias

La ley de Beer se aplica a soluciones
que tengan ms de una clase de
especie absorbente, es decir, la
aditividad
total
de
un
sistema
multicomponentes es igual a la suma
de las absorbancias individuales:

Para el caso
substancias:

particular

de

LogT bc A

dos

Donde A 1 e A 2 son los valores de

dos
a
medidas
absorbancia
longitudes de onda diferentes, 1 e 2,
y los ndices 1 y 2 representan las
dos sustancias diferentes.

a) Espectro de absorcin de una solucin de Co/ EDTA (20

ml Co/Cl2 0.150 M/50 ml EDTA-PO4. b) Disolucin similar
preparada con Ni (20 ml NiCl2 0.250 M/50 ml). c) Mezcla de
las dos disoluciones.

Cual es la absortividad molar de un colorante desconocido a 295 nm y 348 nm, dado el espectro
de absorcin mostrado en la figura anterior. Este espectro fue obtenido mediante espectrocopa
UV-Vis y una disolucin 1 mM de dicho colorante, en una clula de 1 cm de paso ptico.
Ahora, ha decidido llevar a cabo medidas cuantitativas del colorante en diferentes disoluciones.
Basndose en el espectro, Cul longitud de onda utilizara para sus medidas?. De dos razones
para las cuales esta sea la longitud de onda ptima

Alcances de la ley de Beer

Muchos sistemas siguen la ley de
Lambert y Beer en soluciones diulidas,
pero en otras las absorbancias varan
en forma no lineal respecto a las
concentracin.
Las concentraciones que se requieren
deben ser inferiores a 10-2 M con un
lmite
inferior
de
10-7.
A
concentraciones elevadas el ndice de
refraccin de la radiacin absorbida
vara.

Soluciones con bajas concentraciones

y altas concentraciones de otras
especies, especialmente electrlitos,
alteran la absorcin molecular debido a
las interacciones electrostticas.
Presencia de iones o molculas de
gran tamao.
Alteraciones en el ndice de refraccin
de las soluciones debido a cambios de
concentracin.

Desviaciones a la ley de Beer

Limitaciones propias de la ley de Beer
A concentraciones mayores 0.01 M, la
distancia promedio entre las especies
absorbentes disminuye alterando la
capacidad de absorcin a una
determinada
longitud
de
onda,
provocando alteraciones entre la
absorbancia y la concentracin.

Desviaciones qumicas: cuando un

analto absorbente se disocia, asocia o
reacciona con el disolvente formando
productos
o
intermediarios
con
diferentes espectros de absorcin

Influencia del PH
1.- en los casos de desviaciones
qumicas como el anlisis de in
dicromato, donde a pH cercano a la
neutralidad existen los equilibrios

A pH constante, la fraccin disociada

no vara

Cr2O7-2 + H2O 2HCrO4- 2H+ + 2CrO4-2

Si las diferentes formas del analto, (por

ejemplo ionizada frente a neutro),
poseen absortividades diferentes, no se
observa una relacin lineal entre
concentracin y absorbancia.

Cada in de Cr (Cr VI y Cr III) tienen

absorciones distintas . Esta desviacin
se evita efectuando el anlisis en
soluciones fuertemente cidas.

3.- En complejos inorgnicos, es

necesario ajustar el pH a un valor
elevado para lograr la formacin total del
complejo

2.- En soluciones acuosas de cidos

dbiles no amortiguados la fraccin
disociada vara con la concentracin
total
HB + H2O H3O + BFraccin disociada:

( HB)
( HB)

CHB ( HB) ( B)

Desviaciones instrumentales a la
ley de Beer
Nivel de error aleatorio asociado a
la propia medida de A/T. Se mide a
partir de medidas repetidas de una
nica muestra homognea.
La incertidumbre relativa est dada
por:

Sc
C
Sc = desviacin tpica de la muestra
C = Concentracin medida

Las
principales
causas
de
desviaciones instrumentales son:
Ausencia de monocromatismo
Radiaciones parsitas
Cambios en la sensibilidad del
detector
Fluctuaciones de potencia en la
fuente de radiacin y amplificador
del detector
Longitud de onda inadecuada

Para medidas tomadas en el rango

ptimo, la incertidumbre relativa en
la concentracin que se considera
aceptable se encuentra en el rango
de 0.5 hasta 1.5 %.

Ruido Instrumental
Ruido trmico

Calibracin y estndares
En
anlisis
instrumental,
las
concentraciones de las especies de inters
se hallan a travs de mediciones indirectas
basadas en mtodos de calibracin: es
decir la determinacin de la relacin entre
la concentracin del analto y la respuesta
de una seal de medicin.

Existen dos tipos de mtodos de

calibracin: los que utilizan estndares
externos y los que utilizan estndares
aadidos a la muestra
Un estndar es una muestra conocida
con diferentes concentraciones

Las sustancias interferentes, son

aquellas que absorben radiacin en la
misma regin espectral del analto,
influyen en la absorbancia del analto
reaccionan con reactivos modificadores
supuestamente especficos para el
analto.
Las curvas de calibracin, son
potencialmente si incognita y patrn
difieren con respecto a pH, fuerza
inica, viscosidad, tipos de impurezas y
dems factores semejantes.
Curva de calibracin tpica

Estndar externo: es aquel que se

analiza separadamente de la muestra
que se est analizando
(mtodo de la curva de calibracin).
Requiere una serie de estndares con
concentracin conocida del analto.
Matriz similar o idntica a la de la
muestra a analizar

Estndar
aadido:
requiere de cantidades
conocidas de estndar
aadido a las muestras
que se analizan. Puede
ser de dos tipos:

Estndar interno: requiere adicionar el

patrn a la muestra, as como a la
disolucin blanco.
Estndar suficientemente diferente
qumicamente al analto: para evitar
interferencias
Estndar suficientemente similar al
analto: su recuperacin debe reflejar la
recuperacin del analito y cualquier
prdida compensada
Es necesario realizar calibraciones del
estndar y del analto antes de realizar
las mediciones
Debe aadirse antes de la preparacin
de
la
muestra
(calibracin
y
recuperacin) o antes de la medida
(proceso de medida)

Adicin de estndares: las adiciones

de estndares son cantidades fijas del
analto
que se aaden al cada
muestra.
Despus de una medida inicial, la
medida se vuelve a realizar de cada
adicin.
Las medidas se llevan a cabo una o
dos veces y por extrapolacin se
determina la concentracin de la
muestra
Adicin de patrones despus de la
preparacin de la muestra
Calibracin perteneciente nicamente
a la etapa de medida

Anlisis cuantitativo mediante medidas

de absorcin
La primera etapa del anlisis implica el
establecimiento de las condiciones del
mtodo analtico y la seleccin del mtodo
de calibracin, para posteriormente realizar
la medicin propiamente dicha.

Recipiente para las muestras

Estos recipientes deben de ser fabricados
de materiales que permitan el paso de
radiacin en la longitud de onda de
inters.

Anlisis cuantitativo mediante medidas

de absorcin

Seleccin de la longitud de onda: la luz

monocromtica presenta una anchura de
banda finita, de ah se pueden hacer las
siguientes consideraciones:
La luz con ancho de banda estrecho
puede producirse a una longitud de onda fija

La intensidad de luz puede medirse sobre

un ancho de banda estrecho
Se puede cambiar la longitud de onda
continuamente y sin problemas sobre
algunos intervalos de longitudes de onda
(barrido)

a)

Anchura de banda espectral: la longitud de

onda nominal se encuentra en el mximo de
intensidad del espectro con la intensidad
decreciendo a ambos lados

b)

Desde el punto de vista de un observador en

la salida del monocromador proyectado
sobre una pantalla

As pues, las medidas espectrofotomtricas

se realizan a una longitud de onda
correspondiente a un pico de absorcin,
en el cual el cambio en la absorbancia por
unidad de concentracin sea mximo.
En este punto se alcanza la sensibilidad
mxima

La curva de absorcin es a menudo

recta (Ley de Beer)
Las mediciones son menos sensibles a
fluctuaciones debidas a impresiciones en la
seleccin de la longitud de onda del
instrumento.

Banda A: se desva poco,

porque no vara mucho
en toda la banda
Banda B: muestra unas
desviaciones
acusadas
porque
experimenta
cambios significativos en
esta zona

Variables
que
absorbancia:

influyen

en

la

Determinacin de la relacin entre la

absorbancia y la concentracin:
Mtodos de calibracin

Naturaleza del absorbente

pH de la disolucin
Temperatura
Concentraciones
electrolito

elevadas

del

Sustancias interferentes.

Limpieza y manipulacin de las cubetas:

estos recipientes que han de contienen las
muestras
deben
ser
de
calidad
contrastada
(contra
patrones
estandarizados) y calibrarse unas contra
otras para detectar diferencias por rayado
o desgaste y ser sometidos a procesos de
limpieza adecuados.

Empleo de blancos: el blanco de una

curva de calibracin (tambin empleado
en la medicion de las muestras), es
est constituido por el disolvente y los
constituyentes de la muestra que no
sean
las
especies
absorbentes
principales.
Con el blanco en la celda, la radiacin
transmitida corresponde a la radiacin
incidente, menos las prdidas por
dispersin,
reflexin
y cualquier
absorcin de otros componentes
diferentes de la muestra.

Curva de calibracin.
Existen dos aplicaciones importantes de
ste mtodo:
Para calibrar un procedimiento de medida
cuando los componentes de la matriz,
incluyendo los reactivos que se emplean no
causan interferencias
Cuando se tiene suficiente control sobre
las condiciones de medida de manera tal
que las interferencias analticas puedan
mantenerse constantes
La curva de calibracin de la respuesta del
instrumento se realiza utilizando estndares
que contienen distintas concentraciones del
analto.
En una determinacin ideal, solo la
concentracin ideal de la especie ensayada
debera cambiar en una serie de diluciones
estndares.

La curva de calibracin se obtiene

empleando el mtodo de los mnimos
cuadrados a una serie de valores de A/T
vs Concentracin.
Al realizarse un grfico en funcin de la
concentracin, deber obtenerse una lnea
recta, cuya pendiente es la absortibidad
molar () y la constante (b) se relaciona
con factores tales como el instrumento, su
condicin durante la determinacin y las
interferencias de matriz despus del
tratamiento.

La recta de calibracin se construye de

acuerdo a la ecuacin:
y = mx + b

m = pendiente de la recta

2
y
x
x xy

N x 2 ( x) 2

y= Absorbancia
x = Concentracin del estndar o de la
muestra
b = Constante

N xy ( x)( y )
N x 2 ( x ) 2

r= coeficiente de regresin

N x

N xy x y

( x ) 2 N ( y 2 ( y ) 2

Adicin de estndares
Existen tres condiciones en los
cuales la estandarizacin se efecta
aadiendo un estndar a la misma
muestra:
Muestras con matriz slida o lquida
desconocida o tan compleja que no
se pueda emplear un estndar externo
con suficiente garanta
Proceso de preparacin complejo o
muy variable
Dependencia de la medicin de
condiciones
instrumentales
muy
precisas y dificilmente controlables

Mtodo 1.
Adicin de una cantidad de estndar
en una disolucin en blanco para
calcular porcentajes de recuperacin
durante el desarrollo de un mtodo.
ensayo
Adicin a la muestra de otra sustancia
que pueda adicionarse al analto como
estndar que pueda separarse del
mtodo de ensayo

Mtodo 2
Adicin de un compuesto con
propiedades
qumicas
muy
relacionadas con el analito, pero
suficientemente diferentes como
para que la sustancia adicionada y el
analto
puedan
cuantificarse
separadamente.
Este
tipo
de
calibracin se emplea cuando:
No se puede obtener un blanco
Se empleen tcnicas de anlisis que
no requieran istopos puros, caros o
radiactivos
Existe una importante e inevitable
variabilidad en alguna parte de la
metodologa analtica

Con este mtodo se puede emplear la

proporcin analito/sustancia como
medida.
Esta proporcin corrige las prdidas o
cambios en las respuestas del
instrumento.

Ejemplo:
La recuperacin de la mitad de un
estndar al final del anlisis hace
suponer la prdida de la mitad del
analto relacionado con el estndar.
Para cada serie de muestra se
establece
el
porcentaje
de
recuperacin y de calibracin

Mtodo 3: adicin de estndares

Esta tcnica solo puede emplearse
cuando la respuesta del ensayo sea lo
suficientemente selectiva como para
que sea debida solo al analito. El
mtodo se lleva a cabo de la siguiente
manera:
1.Medicin de la muestra a analizar
2.Adicin de una cantidad conocida del
analito (estndar de adicin)
3.La muestra, adicionada, es medida
nuevamente
bajo
las
mismas
condiciones
4.Se repiten los pasos 1 y 2 unas veces
ms

5. Concentracin del componente

original se calcula por extrapolacin

Ejemplo
Adicin de una cantidad de estndar
en una disolucin en blanco para
calcular porcentajes de recuperacin
durante el desarrollo de un mtodo.
Adicin a la muestra de otra sustancia
que pueda adicionarse al analto como
estndar que pueda separarse del
mtodo de ensayo

Ejemplo: Se toman de la misma dilucin

original de la muestra tres alcuotas de 5
ml. No se aade nada a la primera
adicin, pero si se aaden 5 L y 10 L
de una solucin de cloruro de cobre
estndar de 100 ppm a la segunda y
tercera alcuota, respectivamente.
Ignorando las pequeas variaciones de
volumen, despus de la adicin, calcular
la concentracin del cobre en la muestra

Nmero de
alcuota de 5
mL(ppm)

Volmen de 100
ppm Cu2+ aadido

Concentracin
final de CU2+
aadido

0.10

10

0.20

Determinacines simultneas: cuantificacin de dos especies en presencia de interferencias espectrales

Interferencia espectral: radiacin de

luminiscencia o de absorcin a la
longitud de onda del anlisis que
interfiere en la cuantificacin del
analito, y pueden deberse a los
componentes de la matriz.
Si se dispone de suficiente informacin
de tipo espectrofotomtrica, se pueden
cuantificar todos los componentes de la
muestra sin separacin: los datos
requeridos son los siguientes:
Para una muestra desconocida, la
absorbancia a varias longitudes de
onda. El nmero de longitudes de onda
debe
ser
que
el
nmero
de
componentes de la muestra

Las absortividades molares

para cada componente por
separado a todas las longitudes
de onda elegidas para la mezcla.

Para dos componentes (1 y 2)

absorbiendo ambos a la misma longitud
de onda ( i), la absorbancia total es
Ai =A1 i + A2 i
Esto es, para cualquier longitud de onda,
la absorbancia total medida es la suma
de los dos componentes. De acuerdo a la
ley de Beer
Componente 1 :

A1i = 1i b C1

Componente 2 :

A2i = 2i b C2

Considerando el subndice i, tenemos

que las longitudes de onda son las
mismas para ambas especies. As
mismo, b tiene el mismo valor, por lo que
la absrobancia a i est dada por:
Ai = 1i b C1 + 2i b C2

Problema
En
una
disolucin,
dos
componentes absorben a la
misma longitud de onda, para i :
1i = 500

2i = 3000
0.450

Ai =

Para una segunda longitud de

onda j
1j= 2100

2j= 160
0.565

Aj =

Hallar la concentracin de cada

componente si la longitud del
paso ptico de la clula es de
1.00 cm y las unidades de
estn expresadas en Lmol-1 cm-1

Instrumentacin

Equipos de un solo haz:

Equipos de doble haz:

= 190 -1000 nm
Fuente: lmpara de tungsteno e hidrgeno
Sistema ptico: monocromadores
Detectores: tubos fotomultiplicadores y redes de
dispersin
Sistema de adquisicin de datos: sistemas
digitales, PC.
Ancho de banda: 2-8 nm
Exactitud fotomtrica: 0.5 y 2 nm

95 -8000 nm= 1
Fuente: lmpara de deuterio y tungsteno
Sistema ptico: monocromadores
Detectores: tubos fotomultiplicadores y
redes de dispersin
Sistema de adquisicin de datos: sistemas
digitales, PC.
Anchura de banda: 0.2 a 3 nm
Exactitud fotomtrica: 0.0030A

Fuente de radiacin.
Deben de emitir una radiacin de
suficiente intensidad en la regin
espectral deseada para poder ser
detectada con facilidad. Pueden ser
de tres tipos:
Fuentes continuas: la intensidad de
la radiacin vara en forma gradual
en funcin de la longitud de onda.
UV (deuterio, rango de 180-350 nm),
Visible (tungsteno, rango de 3502500 nm).
Fuentes de lneas: emiten un nmero
limitado de longitudes de onda, cada
uno de los cuales abarca un nmero
reducido de longitudes de onda.
Vapor de Hg y Na para UV/Visibles.
(ctodo hueco y descarga de
electrodos:
absorcin
y
fluorecsencia atmica).
.

Lseres:
debido
a
las
propiedades
amplificadoras de la luz, los lseres originan
bandas de radiacin sumamente estrechas
en
el
espacio,
intensas,
altamente
monocromticas y coherentes, y con anchos
de banda de hasta 0.1 nm.

Selectores de longitud de onda. Un

ancho de banda estrecho tiende a
hacer ms sensible las medidas de
absorbancia, favoreciendo la relacin
lineal entre la seal ptica y la
concentracin.
Existen dos tipos de selectores de
longitud de onda, los filtros y
monocromadores.
Filtros
Filtros de absorcin
De utilidad en la seleccin de bandas
(30 y 250 nm) en la regin visible del
espectro electromagntico. El tipo
ms usual es un vidrio coloreado, o
una suspensin de un colorante en
gelatina colocado entre dos placas
de vidrio

El ancho de banda efectivo es una medida inversa

de la calidad de un dispositivo de medicin,
siendo mayor la resolucin, cuando ms estrecho
sea el ancho de banda.

Filtros de interferencia
utilizan las interferencias pticas para
proporcionar
bandas
de
radiacin
estrechas.
Consiste en un material dielctrico
transparente (fluoruro de calcio o
magnesio) colocado entre dos pelculas
metlicas semitransparentes, que a su vez
se coloca entre dos capas de material
transparente

Monocromadores
instrumentos de gran utilidad en la
realizacin de barridos espectrales en
las regiones UV, Visible e Infrarroja.
Se encuentran constituidos por:

Rendija de entrada: proporciona una

imagen ptica rectangular

Lente o espejo colimador: produce un

haz paralelo de radiacin

Prisma o red: dispersa la radiacin en

sus longitudes de onda individuales

Lente focalizador: forma de nuevo la

imagen de la rendija y la enfoca sobre
un plano focal

Rendija de salida en el plano focal,

que asla la banda espectral deseada.

Prisma

Recipiente para las muestras

Estos recipientes deben de ser fabricados de
materiales que permitan el paso de radiacin en la
longitud de onda de inters.

Detectores
Caractersticas de un detector ideal
Debe generar una seal directamente
proporcional a la potencia radiante del haz
de luz incidente sobre el
Altarelacin seal ruido
Respuesta relativamente constante ante
luz de diferentes longitudes de onda, de
tal manera que sea aplicable a un amplio
rango de longitudes de onda

Caractersticas:
En espectroscopa UV/Visible, existen
tres
diseos de uso generalizado,
basados en la deteccin de fotones:

La corriente del fototubo es proporcional al

poder radiante de la radiacin incidente

Fototubos de vaco: la radiacin causa la

emisin de electrones a partir de una
superficie slida fotosensible.

La corriente del fototubo es pequea (10 -11

amperes) y requiere de amplificadores para
operar con el sistema de adquisicin de datos.
Operan en rangos de 90 Voltios

Celdas fotovoltaicas (FOTODIODOS)

De uso comn en la regin visible,
presentando mxima sensibilidad
alrededor de 550 nm. Consiste en un
electrodo de cobre o hierro en la
cual se deposito una capa de
material conductor, cuya superficie
externa es cubierta por una capa de
oro o plata que acta como un
segundo electrodo. Todo el conjunto
se cubre con una envoltura
transparente

Caractersticas:
No requieren de fuente externa de
energa
Presenta resistencia interna, lo que
dificulta la amplificacin de la seal
Presentan fatiga de operacin
disminuyendo
gradualmente
la
corriente de salida

Tubos fotomultiplicadores
Caractersticas
Presenta una estructura similar a los
fototubos,
pero
con
nodos
adicionales llamados dnodos. Estos
actan como cascadas, permitiendo
la multiplicacin de electrones que
inciden aceleradamente sobre la
superficie catdica.

Altamente sensibles a la radiacin

UV/Visible
Tiempo de respuesta rpido
Ideal para medir radiaciones de
baja potencia