ANALISIS DEL CRECIMIENTO

ANLISIS DEL CRECIMIENTO

EN LOS PROCESOS
BIOTECNOLGICOS

GESIRA DE AVILA MONTIEL

INGENIERA QUIMICA
MAGSTER EN ING. QUMICA
nfasis en bioprocesos

Cartagena Colombia
2016

DEFINICIONES DE BIOPROCESOS

Toda aplicacin tecnolgica (proceso industrial) que utilice sistemas

biolgicos y organismos vivos o sus derivados para la creacin o
modificacin de productos o procesos para usos especficos (Instituto
de investigacin de Recursos Biolgicos Alexander von Humboldt,
2013).
Cualquier tcnica o conjunto de tcnicas (proceso industrial) que
utilizan organismos vivos o sus partes para obtener o modificar
productos, para mejorar plantas o animales, o para desarrollar
microorganismos de uso especfico (COLCIENCIAS, 1999).
La aplicacin de la ciencia y la ingeniera al uso innovador, directo o
indirecto de organismos vivos o de sus partes en su forma natural o
modificada, para la produccin de bienes y servicios o para el
mejoramiento de los existentes (Ernest and Young, 2002).
Tecnologa clave para el nuevo milenio, que tiene un inmenso rango de
aplicaciones en medicina, agricultura, procesamiento de alimentos,
proteccin ambiental, minera e incluso nanoelectrnica (United
Nations Conferenca on Trade and Development, 2002)

Biotecnologa - Tecnologa clave

Biotecnologa: Campos de aplicacin

(Biotecnologa y

biomedicina. Informe sectorial, 2013. Unin Europea)

Biotecnologa aplicada a la salud, comprende las aplicaciones

teraputicas, diagnsticas, de salud animal y de investigacin
biomdica, incluyendo el desarrollo de alimentos funcionales y
nutraceticos (producto natural con accin teraputica).
Biotecnologa aplicada a los procesos agroalimentarios: diseo de
plantas transgnicas capaces de crecer en condiciones ambientes
adversas, resistentes a plagas y enfermedades, se espera que pueda
aportar soluciones para mejorar los mtodos tradicionales de la
agricultura industrial, hacindola ms sostenible (arroz dorado,
compuestos con propiedades anticancergenas como el licopeno en
el tomate, plantas centinelas, fibra de leche de cabra)
Biotecnologa industrial, aplicada a procesos industriales, como el
diseo de microorganismos para producir un producto qumico o el
uso de enzimas como catalizadores industriales para destruir
contaminantes qumicos peligrosos. Adems se puede aplicar en
transformar la biomasa de desecho en plsticos o textiles
biodegradables y en la produccin de biocombustibles no
contaminantes (bioetanol y biodiesel como fuentes de energa limpia) y
mucho ms sostenibles.

Biotecnologa: Campos de aplicacin

(Biotecnologa y

biomedicina. Informe sectorial, 2013. Unin Europea)

Biotecnologa azul, basada en los recursos del mar para la generacin de

productos y aplicaciones de inters industrial. El mar cuenta con la mayor
biodiversidad del planeta, por lo que potencialmente existe una gran variedad
de sectores que pueden beneficiarse de la biotecnologa azul. Si bien algunos
productos de la biotecnologa azul ya se utilizan, muchos todava estn en
fase de investigacin.
Biotecnologa aplicada al medio ambiente. Estas aplicaciones se pueden
subdividir en dos ramas de actividad. Por un lado el mantenimiento de la
biodiversidad (aplicacin de la biologa molecular al anlisis gentico de
poblaciones y especies integrantes de ecosistemas, o las tcnicas de clonacin
con el fin de preservar especies). Por otro lado, la eliminacin de contaminantes
que utilizan microorganismos y especies vegetales para el aislamiento y
eliminacin de sustancias (metales pesados, hidrocarburos, entre otros, con la
posibilidad de aprovechar estas sustancias o utilizar subproductos derivados de
esta actividad.

MODULO I

Conceptos Bsicos
Medios de cultivo

Estequiometria
reacciones
biolgicas

de

las

Factores ambientales
afectan el crecimiento

que

DISEO DE MEDIOS DE
CULTIVO
Sumario:

Esquema general del proceso de

fermentacin
Tipos de medios de cultivos
Etapas de diseo del medio

Seleccin

Formulacin

Optimizacin

INTRODUCCIN
Clula

Medio

Efectos
Intracelulares

Reactor

Efecto
Extracelular
(Fsico)
Efecto Extracelular
(Qumico)

Procesos de
Purificacin

Producto

ETAPAS PARA EL DESARROLLO

DEL BIOPROCESO

1. Cultivo mixto

2. Acetobacter sp

8. Producto
obtenido

7. Extraccin
con solvente

3. Caja de petri

6. Medio lquido

4. Cultivo a
escala pequea

5. Fermentador 1L.

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

(cont.)
MEDIO DEFINIDO

Estudio fisiolgico
Produccin
Ventajas

Composicin conocida
preparacin

Desventajas
Estricto procedimiento
Alto costo

Mayor reproducibilidad
en el proceso
Mayor estabilidad durante
el almacenamiento
Mas fcil de purificar

de
Tiempo

Factores de crecimiento

Microorganismos

MICROORGANISMOS
Mohos

Levaduras

Microalgas
Microalgas

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

(cont.)
MEDIO COMPLEJO

Se basa en componentes naturales y su composicin

es desconocida.
Este medio contiene extracto de levadura, peptona,
licores de maz, etc.
Usualmente puede proveer factores de crecimiento
necesarios como vitaminas, hormonas y elementos
trazas, dando como resultado un rendimiento celular
bastante alto.
Son medios baratos

ETAPAS PARA EL DISEO DEL

MEDIO DE CULTIVO

SELECCIN

FORMULACIN

OPTIMIZACIN

ETAPA DE SELECCIN:
Ingredientes del medio

Aspectos a tener en cuenta:

Funcin de los ingredientes

Inters crecimiento vs Formacin de

producto

Informacin sobre el MO, los sustratos y el

proceso

ETAPA DE SELECCIN
LOS MACRO Y MICRO ELEMENTOS
para el crecimiento y la formacin de producto

Macroelementos (90 - 95% masa seca)

C, N, O, H, S, P, K, Mg.

Microelementos
Ca, Mn, Fe, Cu, Co, Zn, B, Cr y Mo

Vitaminas (Acido flico, Biotina, Vitamina k)

Aminocidos (Triptfano, Metionina, Valina, entre

otros.)

Otros compuestos (ej. cidos grasos, cidos

Nucleicos)

MACRONUTRIENTES

Carbono: Fuente de energa

Nitrgeno: Constituye cerca del 10% al 14% fuente de nitrgeno
Oxgeno: El agua celular constituye cerca del 20% de su peso seco.
Principal aceptor de electrones en el metabolismo aerobio
Hidrgeno: Constituye el 8% de su peso seco. Recurso de energa
Fsforo: Constituye el 3% de su peso seco, est presente en cidos nucleicos y
en la pared celular de algunas bacterias Gram positivas
Azufre: Constituye cerca del 1% de su peso seco. Est presente en protenas y
enzimas
Potasio: Es un cofactor de algunas enzimas y es requerido en el metabolismo
de carbohidratos
Magnesio: Es un cofactor de algunas enzimas y es est presente en pared
celular y membranas.
Cofactor: Cuando se trata de iones o molculas inorgnicas. Algunos cofactores
entran a formar parte del sitio activo y son integrantes de la protena enzima;
otros al parecer, establecen un enlace entre la enzima y el sustrato.
Coenzima. Cuando es una molcula orgnica. Aqu se puede sealar, que
muchas vitaminas funcionan como coenzimas.

OPTIMIZACIN DEL MEDIO

Significa:

Hallar la mejor concentracin para el mejor

proceso

Herramientas a tener en cuenta:

Cambiar un componente y mantener el resto igual

Cultivo continuo
Tcnicas estadsticas

Reactor

ESTEQUIOMETRA DEL CRECIMIENTO

Y FORMACIN DE PRODUCTO

El crecimiento celular y la formacin de producto son

procesos complejos. Muchas reacciones intracelulares
pueden ser observadas dentro de la clula, desde el
puto de vista cintico y de estequiomtria.
Clculos estequiomtricos:
Balance elemental.
CHmOn + a O2 + b NH3c CHON + d H2O + e CO2
1 mol de carbohidrato
C: 1 = C + e
H: m + 3b = C + 2d

O: n + 2a= C + d + 2e

N: b = C

RQ = e/a = moles de CO2 / mol de O2 consumido

ESTEQUIOMETRA DEL CRECIMIENTO

Y FORMACIN DE PRODUCTO
Conversin del sustrato, oxgeno y
nitrgeno para el crecimiento celular

CwHxOyNz + a O2 + b HgOhNi c CHON + d

CO2 + e H2O + f CjHkOlNm

Rendimiento de biomasa:

Yx/s =g de clulas/g de sustrato = c (Mwclulas)/

(Mwsustrato).

Yp/s = g de productp formado/g de sustrato consumido.

Yp/s =f (Mwproducto)/ (Mwsustrato).

A = (Ws - C b f j p).

EJERCICIO

Las clulas de Candida utilis convierte la glucosa a CO2 Y

H2O durante el crecimiento. La composicin celular es
CH1.84O0.55N0.2 ms el 5% de su peso. El rendimiento de
biomasa a sustrato es 0.5 g/g, el amonaco es usado como
fuente de nitrgeno. Cul es la demanda terica de
oxgeno?
Solucin:
a = (Ws - C b f j p)
s = 24+12-12/6= 4 ; b =4+1.84-2(0.55) -3(0.2)/1= 4.14
P.M (biomasa) = 25.44x1.05=26.78 g
C = 0.5 g/gx180g/gmolx1gmol/26.78g=3.36gmol/gmol
w=6
a=2.52 gmol O2/gmol glucosa; f j p =0, por qu?

FACTORES QUE AFECTAN

EL CRECIMIENTO

Efecto de la concentracin de sustrato

Sustrato limitante: es el nico sustrato que ejerce un

efecto dominante sobre la velocidad de crecimiento

Ecuacin de Monod: = max (S/Ks + S), donde:

: Velocidad especifica de crecimiento (h-1)
max: Velocidad mxima especifica de crecimiento (h1)
S: concentracin del sustrato limitante (g/L)
Ks: Constante de Monod (g/L)

TEMPERATUR
A
organismos tienen una T ptima de crecimiento,
la cual vara segn la especie:

Bajas temperaturas: Psicrfilos (Tpt. < 20C)

Medias: Mesfilos (20 < Tpt. < 50C)

Mayores de40 grados: Termfilos (Tpt. 50C)

La temperatura afecta la formacin de producto y el

rendimiento. Sin embargo la T. ptima de crecimiento
puede ser diferente de la T. ptima de formacin de
producto

pH

Influye en el metabolismo celular y la permeabilidad de

la membrana, fuera del rango fisiolgico puede inhibir
el crecimiento celular.
El pH ptimo de crecimiento puede ser diferente del pH
ptimo de formacin del producto
Causa del cambio de pH en una fermentacin.

Fuente de nitrgeno
NH 4+: H+ es liberado al medio y el pH baja
NO 3-: H+ es consumido y el pH sube

Produccin de cidos orgnicos

Utilizacin de aminocidos (Tirosina, valina, entre otros)

OXIGENO DISUELTO

Es un sustrato importante en cultivos aerbicos

y puede ser limitante. En tal caso, vara con
la TOD de acuerdo con una cintica de
saturacin.
Por debajo de una concentracin crtica de
oxgeno (Ccrit.), depende de TOD. Por encima
de Ccrit, es independiente de TOD.
Ccritc. bacterias y levaduras: 5 10%
Ccritc hongos:
10 - 50%.
Estos dos parmetros determinan la
concentracin de oxgeno disuelto en el medio
de cultivo.
N: velocidad de agitacin (rpm) y Q: Flujo de
aire

OTROS FACTORES
Composicin del medio de cultivo: Debe
proporcionar los nutrientes en cantidades
necesarias y no inhibitorias puede influir
negativamente en el costo del proceso
:
Influye de forma significativa en la
productividad
del
proceso
puede
favorecer la formacin de metabolitos
inhibitorios. La ptima de crecimiento
puede diferir de la ptima de formacin
de producto

MODULO II

Conceptos Bsicos
Cultivo Batch
Cultivo Continuo

Quimiostato

TIPOS DE FERMENTADORES Y MODOS

DE OPERACIN

Qu es un fermentador?.

Es un biorreactor en el que ocurren transformaciones

qumicas y biolgicas.

Microorganismos
Medios de cultivo

Biomolculas
Biomasa
Metabolitos
secundarios

DE LOS FERMENTADORES /
MODOS DE OPERACIN

Cultivo por
lotes o batch

Cultivo
continuo

CULTIVO POR LOTES O BATCH

En qu consiste?
Se carga el fermentador con el medio completo, se esteriliza, se
inocula y no hay intercambio con el exterior durante todo el cultivo,
excepto en lo referente a los gases. Por lo tanto se puede decir que
se comporta como un sistema cerrado.

Aire
Preparacin del
medio de cultivo

Esterilizacin
del fermentador

Inoculacin
del fermentador

Fermentacin

Cosecha

CO2

VENTAJAS DEL CULTIVO BATCH

Simple

Bajo riesgo de contaminacin

Es muy til para estudios iniciales de un proceso

Permite:

Ajustar variables de operacin y determinar la interaccin entre ellas

Define los medios de cultivo

Determina la velocidad ptima de crecimiento y de formacin de

productos

Define rendimientos

Rendimientos: biomasa/sustrato (Yx/s) producto/sustrato (Yp/s)

biomasa/producto (Yx/p), biomasa/oxgeno (Yx/O2)

FASES DE CRECIMIENTO EN UN
CULTIVO BATCH
Fase lag o de adaptacin: Los microorganismo tratan de adaptarse a
las nuevas condiciones de cultivo.
IMPORTANTE: La productividad depende mucho de la duracin de esta
fase.

Cmo podemos minimizar la fase de adaptacin?

Fase exponencial: La actividad bioqumica y biolgica es mxima

Es donde se alcanza el mayor rendimiento biomasa sustrato.
Fase estacionaria: La concentracin de clulas se mantiene constante.
Su importancia industrial depende del producto de inters.
Fase de muerte celular: La velocidad de muerte supera a la de
reproduccin, tiene poca importancia desde el punto de vista
industrial.

BALANCES DE MASA EN UN
CULTIVO BATCH

Modelo de crecimiento para tanques agitados:

Suposicin:

Mezcla perfecta: todos los parmetros dentro del fermentador son

iguales en cualquier punto para un instante determinado de tiempo

Balance de biomasa en el fermentador batch
entra + crece = sale + consume + acumula

Balance general:

En el fermentador batch:

crece = acumula

Balance de biomasa en el fermentador batch

entra + crece = sale + consume + acumula

Balance general:

En el fermentador batch:

0 = consume + acumula

OTROS PARMETROS
CARACTERSTICOS EN UN CULTIVO
BATCH

Nmero de generaciones o duplicaciones

Tiempo de duplicacin

Rendimientos
Producto/sustrato (Yp/s)

Biomasa/sustrato (Yx/s)

Productividad
Productividad volumtrica (P)

Productividad especfica ( qp)

DESVENTAJAS DEL CULTIVO BATCH

La productividad es baja:

Existe inhibicin del crecimiento por alta concentracin de sustrato

No se puede controlar la velocidad de crecimiento

Los productos son menos uniformes que en otros tipos de cultivos

Aumentan los costos por tcnicas analticas y por facilidades auxiliares

como vapor para esterilizacin, agua para fregado, electricidad,
utilizacin de rea y fuerza de trabajo

CULTIVO
CONTINUO
ComienzaEN
comoQU
un cultivo
batch y a partir de un determinado
CONSISTE?
momento se comienza a alimentar medio fresco y a extraer clulas y
medio agotado de tal manera que se mantengan las condiciones en el
fermentador. Cuando las adiciones y extracciones se hacen muy
seguidas el cultivo es continuo y el volumen debe permanecer
constante
Medio de
cultivo fresco
Aire
Preparacin del
medio del
cultivo inicial
Preparacin
del incremento

Esterilizacin del
fermentador

Inoculacin del
fermentador

Fermentacin
Esterilizacin del
incremento

Adicin del
incremento

Cosecha

Medio de
cultivo CO2

QUIMIOSTATO

Cultivo en un tanque agitado al cual se le

alimenta de forma continua medio fresco y se
extrae cultivo a la misma velocidad. Consta
con toda la instrumentacin y facilidades
auxiliares de un reactor convencional.

Electrodos de pH, sensor de temperatura,

flujmetro, filtro de aire. Suministro de vapor,
aire de proceso y de instrumentacin, agua
de enfriamiento. Sistema de adicin de medio
y de extraccin de cultivo.

Mezcla Perfecta:
El quimiostato se considera una mezcla perfecta, o sea que no
existe diferencia de concentracin de sustrato, biomasa ni producto
entre los diferentes puntos del reactor y el medio fresco al caer se
une instantneamente al cultivo que contiene los microorganismos.

Procedimiento para llevar a cabo un quimiostato

Se realiza un procedimiento igual al cultivo batch, se inocula el
fermentador con el microorganismo, se espera la fase de
adaptacin y al llegar a la fase de crecimiento se comienza la
adicin de medio y extraccin de cultivo.

Ecuaciones bsicas del quimiostato: (Fermentador

simple etapa con alimentacin estril.)

Estas ecuaciones se obtienen de los balances de masa que se pueden

plantear para biomasa, sustrato y producto.
Estado Estacionario
dx/dt = ds/dt = dP/dt = 0
Balance de biomasa
B entra+ B crece=B sale +B Acumula (1.1)

Entra en el tiempo = Fx0

Crece en el tiempo = XV

Sale en el tiempo = FX

Acumulacin en el tiempo = dx/dt

BALANCE DE BIOMASA
Al ser alimentacin estril y no haber acumulacin.

X V = FX (1.2)
X V (1.3)
V = F (1.4)
= F/V (1.5)

= D (1.5)

Esta ecuacin significa que los microorganismos se

extraen del reactor a la misma velocidad que se forman,
determinando el estado estacionario del fermentador.

Sustituyendo Monod en (1.5)

D = mx.

S
S+Ks
De esta expresin se define que fijada una concentracin de sustrato
se fija la D. Con esta ecuacin no se puede conocer la concentracin
de biomasa a alcanzar en el fermentador.
Veamos con un balance de sustrato.
S entra = S sale +S consumido +S acumulado
Entra = F S0
Sale = F S
Consumo = X V + mx
Y x/s
Acumula = ?

FS0 = FS + X V
Y x/s

(2.1)

F (S0 S)= X V (2.2)

Y x/s
Dividiendo entre V
F (S0 S)= _ X (2.3)
V
Y x/s
D (S0 S)= _ X_ (2.4)
Y x/s
X = Y x/s (S0 + S) (2.5)
D = mx. _S_

(1.5)
S+Ks

X= Y x/s (S0 + S) (2.5)

Estas son las ecuaciones bsicas de diseo del quimiostato.

Ejercicio:
Consideremos un quimiostato en el cual se produce
biomasa a partir de glucosa con las siguientes condiciones:
F=100l/h, S0=5g/l, V1=500L,
m=0.3h1,ks=0.1g/l,Yx/s=0.4g/g.
Determinar la concentracin de clulasy glucosa en el
efluente del reactor?
X = Y x/s (S0 + S)

= F/V

D= Ks D/m -D

CULTIVO CONTINUO
Ventajas

Prolonga an mas las condiciones del cultivo (meses)

Diluye constantemente compuestos txicos presentes

(nunca llegan a la concentracin txica)

El o los sustratos principales son suministrados en la

misma medida en que son consumidos, por lo que no se
acumulan

Se produce biomasa y productos de inters

constantemente

Aumenta el rendimiento del proceso

CULTIVO CONTINUO
Ventajas (continuacin)

Permite controlar en
produccin manipulando
sustrato principal

el
la

valor optimo de
alimentacin del

Aumenta la productividad delproceso porque

disminuyen los tiempos improductivos (fregado,
esterilizacin, carga y descarga)

El producto es ms homgeneo

CULTIVO CONTINUO

Desventajas del cultivo continuo

Riesgo de contaminacin

Posibilidad de que ocurran mutaciones

Alto costo inicial del equipamiento