Evaluacin por IHQ de la expresin

de hormonas hipofisiarias y del

marcador de proliferacin celular
Ki-67 en tejido de adenoma causantes
de acromegalia
Julio Brito, Lya Saez, Melchor Lemp, Claudio Liberman,
Harold Michelsen, A Veronica Araya.
Recibido: 10/Octubre/2007, Aceptado: 27/Marzo/ 2008
Natalia Arellano Bianca Jimnez Marcelo Muoz
Cristian Ziga

ACROMEGALIA
DEFINICION:
La acromegalia es una enfermedad
crnica la cual es causada por una
secrecin excesiva de la hormona del
crecimiento o somatotropina (GH), la cual
es producida en la glndula pituitaria lo
cual se traduce en crecimiento anormal
de las extremidades y los rganos
internos del organismo.

De los tumores provenientes de

pacientes con acromegalia:
60 % corresponden a adenomas
somatotropos puros.
25% son adenomas mixtos (clulas
somatotropas y mamotropas)
10% son adenomas de clulas
mamosomatrotropas
5% corresponden a adenomas
acidfilos derivados de una stem cell
primordial (clulas GH y PRL)

Estudios inmunohistiquimicos y
estudios ultraestructurales
Han

permitido demostrar que los

pacientes acromegalicos no solo
expresan y secretan GH sino que
tambin expresan:
Prolactina (PRL)
Hormona glicoproteica tiroestimulante
(TSH)
Foliculoestimulante (FSH)
Luteinizante (LH)

Pit - 1
Stem

cell primordial plurihormonal

Factor de transcripcin especifico de la
hipfisis pit-1 que regula la sntesis :
( GH-PRL y TSH)
Expresin de GH-PRL mayor capacidad
tumorignica de las celulas de la
hipofisis anterior
Presencia simultanea de en tumores de
GH y hormonas
glicopreoteicasproliferacin normal de
celulas de la hipofisis anterior

ki67
Antgeno

proteico nuclear
expresado en todo el ciclo celular
excepto en G0
Es un marcador de la actividad
proliferativa , su expresin seria
directamente proporcional :
1. Al tamao
2. Capacidad de invasin
3. Recidiva del adenomas
hipofisiarios

Oncogn subtipo 4
Existe

una correlacin de ki67

con este oncogn subtipo 4 de
factor de crecimiento
fibroblastico (FGFR4) cuya
expresin en tejido hipofisiario
esta directamente relacionado
con proliferacin celular y
crecimiento tumoral.

Objetivos del estudio

Evaluar

por medios
inmunohistoquimicos la expresin de las
diferentes hormonas hipofisiarias en
pacientes intervenidos por
acromegalias.

Establecer

si la secrecin plurihormonal
se asocia con un mayor ndice de
proliferacin de ki67 y evaluar si existe
o no diferencias clnicas segn la
expresin de otras hormonas y de ki67

MATERIAL Y MTODO
Del

archivo de Anatoma Patolgica del

Hospital Clnico de la Universidad de Chile:

Muestras

de 45 pacientes operados en el
Servicio de Neurociruga (aos 1985 y 2004)

Diagnstico

de acromegalia documentado
por prueba de tolerancia a la glucosa.

Se

descartaron 4 (2 hipfisis normales, 1 con

fibrosis isqumica y 1 muestra no
diagnstica).

En

las 41 muestras en las que se hallo

tejido tumoral, se investig por IHQ:

La

localizacin concomitante de GH,

PRL, FSH, LH, TSH, ACTH.

Expresin
La

de Ki-67.

indemnidad del tejido y la calidad de

la tincin IHQ, fueron certificadas por un
patlogo experto.

Las

muestras fueron cortadas en secciones de 4 m,

desparafinadas y rehidratadas con agua destilada.

Anticuerpo

primario por 30 min a TA.

El

set de anticuerpos usados fue anti GH, PRL, FSH,

LH, TSH (Biosgenes), anti ACTH (Neomarkers), Ki-67
(Dakocitomation).

Anticuerpo

secundario biotinilado y, se agreg

estreptavidina- HRP y revelado con solucin
cromgena DAB (3,3-diaminobenzidina), por 20 min.

Bloqueo

3 min.

de peroxidasa endgena con H2O2 al 3% por

Para

medir la presencia de Ki-67, se realiz primero la recuperacin de

los antgenos nucleares, con incubacin en buffer Tris- EDTA, a pH 9,
en microondas por 6 min a potencia mxima y 1 h a baja potencia.

Se

consider (+) la presencia de marcacin para Ki-67 en citoplasma

difuso o Golgi, examinando el rea ms densa, en donde se contaron
100 a 200 ncleos por campo, dando un porcentaje en base al
recuento. Si en 500 ncleos aparece escasa marca, se considera <1%.

Segn

literatura marcacin inferior a 5% es baja y una marcacin

>10% de las clulas es un alto ndice de proliferacin y se relaciona
con capacidad de invasin.

El

examen microscpico se realiz con aumento de 400x, usando

grilla ocular, en un microscopio NIKON Alphaphot 2.

Este

protocolo de estudio fue aprobado por el Comit de tica del

Hospital Clnico de la Universidad de Chile.

Estadstica.
Los resultados se presentan como
promedio desviacin estndar.
Se utilizaron los tests de Mann-Whitnay
y 2 con correccin de Yates para
evaluar las diferencias entre medias y
proporciones respectivamente.
Se consider una diferencia significativa
a un p <0,05.

RESULTADOS.

De los 41 tumores fueron positivos para GH.

De los 41 tumores 4 correspondieron a microadenomas.
14 de los 41 tumores fueron monohormonales para GH.
27 de los 41 tumores fueron positivos para una o ms
hormonas.

Los niveles sricos de TSH, FSH y LH estaban

dentro del rango normal en todos los casos.

No se observo diferencias estadisticamente

significativa entre los parmetros evaluados.

En 32 de los 41 tumores estudiados, se obtuvo

muestra suficiente para realizar la tincin IHQ para Ki67.
3 tumores presentaron un porcentaje mayor o igual a
10%, estos fueron plurihormonales.
Los 3 correspondieron a macroadenomas y el tiempo
promedio de evolucin del cuadro clnico en los
pacientes fue de 1,5 aos.

Discusin
Este estudio demostr que:

Mas del 50% adenomas causantes de

Acromegalia presentaron inmunotincion (+)
para otras hormonas de la hipfisis anterior,
adems de GH.

No

se observo diferencia en niveles de GH

srica ni en el porcentaje de adenomas con
expansin extraselar entre tumores pluri y
monohormonales.

Discusin
En

los casos evaluados, no se observo

diferencias en la proporcin de adenomas con
tincin para PRL ni en porcentaje de
marcacin de Ki-67, en ambos grupos de
adenomas.

Aparentemente,

la inmunoreactividad para
una hormona especifica no necesariamente
se asocia con el aumento de los niveles
sricos o con la clnica correspondiente
(porque secretan hormonas biolgicamente
inactivas).

Discusin
Ki-67,

marcador de proliferacin celular, su

expresin seria directamente proporcional a
la capacidad de invasin y recidiva tumoral.

En

los casos estudiados, de adenomas

hipofisiarios, el porcentaje de marcacin
promedio fue levemente superior ( 2.64%) a
los descritos en la literatura (1.1%-5.5%). Y
en los adenomas plurihormonales fue mayor
a 3%.

Discusin
Aunque

el numero de muestras analizadas

fue reducido para aseverar que la condicin
plurihormonal, asociada a un elevado
porcentaje de Ki-67, confiere mayor
capacidad de proliferacin y un mayor riesgo
de crecimiento e invasin tumoral, esta
observacin es altamente sugerente, y
debera confirmarse con un futuro anlisis en
un mayor numero de adenomas.

En la literatura actual
Aun

existen controversias en cuanto a Ki-67, si

realmente es un marcador biolgico confiable
para predecir la capacidad de proliferacin y
recidiva en adenomas hipofisiarios, ya que se
ha observado una superposicin entre
adenomas indolentes y tumores invasores.

Es

importante tener en cuanto el momento de

comparar resultados cuantitativos, las
diferencias en la sensibilidad de los diferentes
kitts de anticuerpos para el antgeno Ki-67.

Conclusin
Adenomas

secretores de GH son
plurihormonales en mas del 50% de los
casos.
Aunque no se logro demostrar con
estadsticas, los adenomas plurihormonales
presentan una tendencia a un mayor ndice
de proliferacin (evaluado con Ki-67).
Por lo tanto, se requiere analizar un mayor
numero de muestras.

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FIN