Universidad

Jurez Del
Estado De
Durango

Microbiologa Industrial
Cintica microbiana
Margarita Jurado Prez
Gissela Rodrguez Avalos

Cintica Microbiana
Constituye una de las operaciones ms
utilizadas en la ingeniera alimentaria y
biotecnologa, por lo que es importante
conocer los diferentes mecanismos de
crecimiento.
Forma de
cuantifica
cin de
los
mismos

Formas
de
aplicacin

Ventajas
y
desventaj
as de los
mtodos

El monto
econmic
o

CURVA DE CRECIMIENTO
MICROBIANO
Rezago*

Aceleraci
n

Exponenci
al*

Declinaci
n*

Estacionar
ia
Mxima*

De retraso

Curva de Crecimiento
Microbiano

Tcnicas de evaluacin del

crecimiento microbiano
En
condiciones
de
crecimiento
equilibrado todos los parmetros del
cultivo
evolucionan
de
forma
proporcional, y por consiguiente al
medir uno de ellos podemos medir el
resto.
Se
puede
medir
el
crecimiento
microbiano
siguiendo
diferentes
parmetros.
Los mtodos para el seguimiento de la
evolucion de un cultivo microbiano se
pueden
clasificar
en
directos
e
indirectos.

indirectos

directos

se basan en la medida de algn

parmetro del cultivo que nos
permite deducir informacin sobre la
evolucin del nmero de
microorganismos

se basan en la medida de la
evolucin del nmero de clulas vivas
(tcnicas de plaqueo) o del nmero
de partculas

Mtodos para el recuento

de microorganismos
1.- Recuento de microorganismos viables totales

Contaje en placa
estndar (standard plate
count)
Numero mas probable
NMP
Mtodos basados en la
reduccin de colorantes
por viables
Contaje microscopio
directo
Filtros de membrana

Microcolonias en
DEFT
Contaje de
colonias al
microscopio
Gotitas de agar
Films secos
Petrifilm
Tubos rodantes

Contaje en Placa estandar

(Standard Plate Count)
Es un medio utilizado para el recuento de
bacterias aerbicas a partir de agua, aguas
residuales, alimentos y productos lcteos.
Corresponde a la cantidad total de
bacterias viables en un ml de muestra.
Es un reflejo de la sanidad involucrada en la
ordea y de la efectividad de la higienizacin
del sistema. Para mantener este ndice bajo,
influyen la produccin de grandes volmenes
de leche y la capacidad de refrigerar la leche
rpidamente

Determinacin Del
Nmero Mas Probable
Basado en
series de
diluciones y
clculo
estadstico del
nmero de
bacterias
presentes en
las diluciones
ms altas. Se
puede hacer
con 3 5
tubos. El
mtodo es
popular
aunque poco
excto.

Azul de metileno
o resazurina
mtodo
indirecto

El tiempo
necesario para
la reduccin del
colorante est
relacionado con
el # de de la
muestra.

basados en la
medicin de la
actividad
metablica de
las bacterias

azul de metileno de
azul a blanco
resazurina de azul
apizarrado a rosa o
blanco

poseen enzimas
deshidrogenasas
, las cuales
transfieren
hidrgeno de un
sustrato a un
aceptor
biolgico
reducindolo

al reducirse
cambian de color
y esto es
medible.

que los mtodos

de reduccin no
funcionan
eficazmente en
leches
refrigeradas

Mtodos
Basados En La
Reduccin De
Colorantes

Azul de
metileno

Contaje Microscpico
Directo
Permiten determinar el nmero de clulas
microbianas, por observacin directa en el
microscopio.
Presentan una gran ventaja ya que la
muestra puede utilizarse tal cual o puede
prepararse una dilucin tal como se realiza
para otros mtodos de recuento.
Se basa en contar en una cantidad
conocida de muestra utilizando frotis
coloreados, cmaras del tipo de las de
contar glbulos, o las especialmente
diseadas para contar hongos en alimentos
como la cmara de Howard.

 Se determina el nmero TOTAL de

clulas presentes (VIABLES Y NO
VIABLES) Ocasionalmente se
pueden utilizar colorantes que
indiquen diferentes estados
metablicos de las clulas.

Contaje En Placa
Consiste en el plaqueo de una
muestra de volumen conocido del
alimento que se analiza. Provee un
estimado general de bacterias
aerbicas vivas
Evala calidad
Predictor de durabilidad shelf-life
Monitoreo ambiental
Excluye
Anaerobios obligados
Microaeroflicos

 Con este mtodo se asume que cada

colonia proviene de una sola clula
bacterial
Algunas colonias pueden ser
originadas de un agrupamientode
bacterias
Se reporta como Unidad formadora de
colonias (CFU)/gramo ml, NO como
bacterias totales

Evala la sanitizacin de un
producto
Predice la durabilidad (Shelflife)
Indicador de seguridad (Safety)
Monitorea el ambiente

utilizados cuando el
nmero de bacterias
es bajo.

Son filtros con un poro

de 0,45 mm que
retienen las bacterias.

La muestra puede
haber sido procesada
para epifluorescencia
previamente, lo que
facilita el recuento

Se filtra un volumen
dado y se coloca el
filtro sobre una placa
del medio de cultivo
apropiado.

la epifluorescencia se
puede provocar con
naranja de acridina que
tie especficamente
los cidos nucleicos.

Filtros De
Membrana

 Esta tcnica tiene muchas

aplicaciones tiles, unas
de las cuales son:
Se pueden examinar
grandes volmenes de agua.
La membrana se puede
pasar de un medio a otro
para seleccionar y
diferenciar los .
Se obtienen resultados mas
rpidos.
Se logran estimaciones
cuantitativas de ciertos tipos
de bacterias cuando se usan
los medios apropiados.

Microcolonias en DEFT
DEFT son las iniciales en ingls de Direct
Epifluorescence Filter Technique (tcnica
deepifluorescencia directa en filtro).
Las bacterias se filtran para retenerlas en una
membrana apropiada que se trata con un agente
fluorescente (naranja de acridina) para teir las
clulas bacterianas (se somete el filtrado a un
tratamiento previo con detergentes para destruir
las clulas somticas).
La deteccin de los microorganismos ha de
hacerse mediante microscopa de fluorescencia o
por cualquier otro mtodo de medida de la
epifluorescencia.

Contaje de Microcolonias Al
Microscopio
Se aade un pequeo volumen de
agar-cultivo a un porta y se incuba
para seguir la formacin de
microcolonias al microscopio.

Gotitas de Agar
Se hacen diluciones de la muestra
(solucin madre) y se depositan
gotitas de 10 ml en una placa Petri
(gotitas de cultivo + agar). Se
examina el crecimiento de las
colonias en las gotitas tras la
incubacin.

Films Secos Petrifilm

Son pelculas deshidratadas de medios de
cultivos generales o selectivos en las que se
deposita 1 ml de la muestra que rehidrata el
medio. Tras la incubacin se hace el recuento.
Generalmente estan hechos de un agente
gelatinizante soluble en agua fria, nutrientes
e indicadores para la actividad del .
Un Petrifilm mide 10 X 7.5 cm, el centro esta
rodeado por una barrera de foami, logrando
una area central de 20 cm2) con una escala
impresa con cuadrados de 1X1 cm.

Conteo de aerobios
Conteo aerobio para bacterias
acido lcticas
Coliformes
Coliformes Rapido
Coliformes alta sensibilidad
E. coli /Coliformes
Enterobacteriaceae
Staphylococcus Express
Hongos y levaduras
Listeria ambiental

Preparar las
muestras, con
dilucin si es
necesario

Levantar la
pelcula
protectora del
petrifilm

Inocular 1 ml
de la muestra
en el petrifilm

Colocar la
pelcula
protectora, y
colocar el
dispersor

Incubar por 24
hrs.

Procedimiento

Tubos Rodantes
Son tubos hermticamente cerrados
en los que hacindolos girar se
forma una fina capa de agua.
tiles para recuento de anaerobios.

MTODOS FSICOS PARA LA

DETECCIN DE MICROORGANISMOS

Microcalorimetr
a
Citometra de
flujo

Microcalorimetra
Estudio de los pequeos cambios de
calor producidos como consecuencia
del anabolismo de nutrientes.
Usando un medio de cultivo con una
composicin definida de azcares
pueden llegar a identificarse diferentes
tipos de bacterias lcticas mediante
los termogramas de su metabolizacin
de los azcares presentes en el medio

Citometra de flujo
Mtodo basado en hacer pasar
una a una las clulas de una
suspensin por un sistema de
deteccin
Este sistema puede contener un detector capaz
de medir diferentes parmetros(Fluorescencia,
Absorbancia, Dispersion a la luz), lo que le
permite identificar las bacterias durante su paso
La principal contribucion de
por tcnica
el detector
Esta
es muy
esta tcnica es su habilidad
til cuando el
para detectar la presencia de
organismo a analizar
poblaciones heterogeneas
no puede ser
con diferente suceptibilidad
cultivado
a los tratamientos
antimicrobianos

MTODOS QUMICOS DE DETECCIN

DE MICROORGANISMOS

PCR
Radiometra
Substratos Fluoruro y cromognicos

PCR

Mtodo para detectar nmero

extremadamente bajos de
microorganismos con una
cierta rapidez basado de la
produccin de copias de genes
especficos de un
microorganismo en cuestin
Deteccin de Listeria monocytogenes en carnes por
PCR

Permite detectar este patgeno en carnes y productos

procesados para llevar un control mas eficiente en el
proceso de produccin, adems de reducir costos.

Radiometra
Se ahorra tiempo (15-20 das) en la
deteccin del crecimiento, mayor
sensibilidad, tanto para el aislamiento
Utilizan viales
de M. tuberculosis como de otras
que contienen 4
micobacterias. Hay la posibilidad de
ml de medio
identificar M. tuberculosis en 4-5 das
7H12 de
y de realizar antibiogramas a los
Middlebrook que
frmacos de primera eleccin en
admiten inculos
tiempos medios de 3-6 das, en lugar
de hasta 0,4 ml
de los 21-42 das que exigen los
Detectan automticamente
el crecimiento
micobacteriano
mtodos
convencionales.
midiendo la cantidad de 14CO2 producido por la
metabolizacin de sustratos marcados con 14C.
el tiempo necesario para detectar el 14CO2 es inversamente
proporcional a la cantidad de microorganismos presente.

Substratos Fluoruro y
cromognicos
Se aaden como aditivos a los medios de
cultivos para facilitar y acelerar la
deteccin de los microorganismos.
Medio
cromognico
para Salmonella

typhimurium

Medio
cromognico
para E. coli

Medio
cromognico
para S. aureus

MTODOS
INMUNOLGICOS

Anticuerpos
Fluorescentes

Se utiliza anticuerpo marcado con una molcula

fluorescente o un segundo anticuerpo que reconozca al
primero
La inmunofluorescencia directa se emplea para identificar
antigenos como los que se encuentran en la superficie de
los estreptococos del grupo A, y para diagnosticar E. coli,
Neisseria meningitidis, S. typhi, Shigella sonnei y L.
monocytogenes.

Serologa de
enriquecimiento

Fue desarrollado
especialmente para
la deteccin de
Salmonella

El antisuero no se
aade al alimento,
si no que se efecta
un paso previo de
enriquecimiento del
cultivo y de
seleccin para
evitar falsos
positivos.

Radioinmunoensayo
Se basa en el marcaje de un antgeno determinado
(toxina generada por una bacteria patgena) y su
posterior deteccin por anticuerpos especficos
fijados sobre un soporte slido
Emplea un
antgeno
purificado de
concentracin
conocida que se
marca con un
radioistopo; este
conjugado
compite con el
antgeno (tal vez
presente en la
muestra
experimental) por
unirse a un
anticuerpo
especfico.

La radioactividad
asociada al
anticuerpo se
detecta despus
por medio de
analizadores de
radioistopos y
autorradiografa

Si existe mucho
antgeno en la
muestra
experimental,
competir con el
antgeno marcado
con el
radioisotopo por
los lugares de
unin al antgeno
y se ligar poca
radiactividad

Examen de Superficies
Mtodos dirigidos a detectar y medir los
nmeros de microorganismos presentes en
superficies contaminadas

Hacer
examen de
superficie a
la banda

transportado
ra de carne,
para
detectar
posibles
contaminacio
nes

Algunas veces es necesario aadir agentes

neutralizantes para eliminar el efecto de
detergentes que han sido utilizados para
limpiar la superficie

Las muestras se recogen en seco o en

hmedo y se depositan sobre medios de
cultivo lquido (de enriquecimiento

Recuento de hongos y
levaduras
Se realiza directamente en el alimento
humedecido e incubado a 22C
Agregar
cido
tartrico al
medio PDA
lo acidifica
e inhibe el
crecimient
o de
bacterias

O bien mediante diluciones sucesivas y

siembra en placa en superficie
Es necesario aadir agentes
antibacterianos al medio de cultivo
para evitar el crecimiento de bacterias,
que es mas rpido que el de los hongos

UNIVERSIDAD JUREZ DEL ESTADO DE

DURANGO
Facultad de Ciencias Qumicas

SELECCIN, MANTENIMIENTO Y
MEJORAMIENTO DE
MICROORGANISMOS
MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL
Karla Marina Ramrez Vzquez
Eduardo Sols Aguilar
TITULAR:
M.C. JANETH TOSTADO QUEZADA

KARLA MARINA
RAMIREZ
VAZQUEZ

SELECCIN
Debido

a que el xito o fracaso de un proceso

fermentativo comienza con el microorganismo utilizado,
en la eleccin del mismo se deberan tener en cuenta
ciertos criterios generales que se indican a continuacin:

1.

La cepa a utilizar deben ser genticamente estable.

2.

Su velocidad de crecimiento deberan ser altas.

3.

La cepa debe estar libre de contaminantes, incluidos

fagos. (virus que infectan slo las bacterias y no infectan a las
clulas de los mamferos o las plantas)

4. Sus requerimientos nutricionales deberan ser satisfactorias

a partir de medios de cultivo de costo reducido.

5.

Debe ser de fcil conservacin por largos periodos de

tiempo, sin perdidas de sus caractersticas.

6.

Llevar acabo procesos fermentativos en corto tiempo.

7.

Si el objeto del proceso es un producto, este debera ser de

alto rendimiento y de fcil extraccin del medio ambiente.

 Los microorganismos pueden ser obtenidos por aislamiento a

partir:
Fuente naturales
Una coleccin de cultivo (nivel industrial)

Son

mejorados por
ingeniera gentica.

tcnicas

clsicas

de

mutacin

En algunos casos se dispone de organismos modificados

genticamente para llevar acabo especificas de:

Biosntesis
Degradacin o biocatlisis

Existen en el mundo gran numero de colecciones depositarias

de cultivo. Entre ellas se destacan:
American

Type
Culture Collection, USA, baterias,
levaduras, algas, actinomycetes, mohos, protozoos, virus y
lineas celulares.

Colletion Nationale de Cultures de Microorganismo del

instituto Pasteur, Francia.

 Northern Regional Research Laboratory (NRRL), de Peoria,

University Street Peoria USA

National Collection of Type Cultures, Londres, Inglaterra

Si el organismo a utilizar es aislado de fuentes naturales

La eleccin del material de partida puede ser tomando en cuenta
Lo que el microorganismo exprese en ese ambiente
Las propiedades que son de inters.

TIPOS DE AISLAMIENTO:
Aislamiento directo:
En este caso es deseable que el medio que se utiliza para

el aislamiento permita la mxima expresin del material

gentico del organismo.
Para

la deteccin de productores de factores de

crecimiento tales como aminocidos y necletidos se
utiliza la estimulacin del desarrollo de bacterias
auxtrofas por un lisado del organismo.

Medios slidos

Se debe tener una

"rplica" de la caja a
ensayar

Esta caja es luego

cargada con agar
conteniendo una
suspensin del
organismo auxtrofo
al producto buscado.

Una vez obtenido el

crecimiento en la
primer caja, se replica
a una segunda

Despus de un
perodo de incubacin
se observa
crecimiento

En forma de halo
alrededor de las
colonias productoras

ENRIQUECIMIENTO DEL
CULTIVO:
Consiste en incrementar en una poblacin mixta el

numero de organismos de inters en relacin al resto.

Se busca el crecimiento mediante condiciones de cultivo

adecuadamente al mismo, o de condiciones inapropiadas

para el desarrollo de los otros.

Sustratos
especficos o
ciertos inhibidores

Mantener la fuerza
selectiva del
medio

Se modifica por el
crecimiento del
organismo
buscado

Facilita el
aislamiento en
medio solido.

Esto se lleva a que

el organismo de
inters sea el
domnate de la
poblacin

Se realizan
subcultivos
peridicos en
medio fresco

Se considera el efecto del medio sobre la velocidad especifica

de crecimiento ().

MANTENIMIENTO O
CONSERVACIN DE LOS CULTIVOS.
Los objetivos de la conservacin serian los siguientes:
a)

Preservar la pureza genticamente del cultivo sin perdida

de ninguna de sus propiedades bioqumicas.

b)

Preservar los niveles de su productividad inicial.

c)

Lograr que el cultivo pueda ser transportado y manejado

con facilidad.

En todo trabajo de microbiologa se debe conocer:

Propiedades morfolgicas y bioqumicas.

Usar tcnicas metodolgicas ya sea el que suministra o el

que recibe la cepa (conservacin y desarrollo del cultivo).

Usar mtodos reproducibles que no produzcan variaciones o

perdidas de las caractersticas (mantenimiento, preparacin

y propagacin de inoculas).

El conocimiento de las caractersticas del cultivo es esencial

en la eleccin de un mtodo de preservacin.
La identificacin del cultivo pueden conocerse en base a:
Caractersticas de crecimiento.
Propiedades macro y microscpicas.
Evaluacin de muchos ensayos

bioqumicos, biolgicos, inmunolgico

y gentico.

LO MTODOS DE PRESERVACIN O
MANTENIMIENTO MAS IMPORTANTES
SON LOS SIGUIENTES:
Subcultivos:
Es

un mtodo comn de conservacin, que

consiste en el repique peridico del cultivo en un
medio nutritivo fresco.

El

intervalo de transferencia vara con el

microorganismo, debiendo considerarse el medio
adecuado para cada especie.

Una vez desarrollados los cultivos se mantienen a

4 C durante lapsos que oscilan entre 15 das y 2

meses.

 Los inconvenientes que presenta son varios:

a) Incremento de la posibilidad de mutacin con cada

transferencia, con prdida de las caractersticas del
organismo;
b) Riesgo de contaminacin;
c) Alteraciones en el medio de cultivo, durante la estada en
fro, en la cual se produce una desecacin gradual del
mismo.

MANTENIMIENTO BAJO CAPA

DE ACEITE
Es una tcnica simple y efectiva para prolongar la

conservacin de muchos organismos y consiste en cubrir

completamente el cultivo despus de su desarrollo en
medio slido, con una capa de aceite mineral o vaselina
estril.

CONGELACIN
La congelacin es una tcnica de eleccin, ya sea para

cortos o largos perodos de tiempo.

Ha contribuido a la mayor disponibilidad de nitrgeno

lquido (-196 C) y el mejoramiento de los equipos de

refrigeracin.
La tcnica involucra el crecimiento del cultivo hasta la

fase estacionaria
Es aconsejable utilizar una densidad celular elevada en la

congelacin.

 Las

clulas a congelar pueden ser resuspendidas

directamente en un agente crioprotector o se puede
agregar el mismo como aditivo al medio de cultivo.

La suspensin celular es colocada en ampollas (vidrio o

plstico) y sellada
lquido.

antes de colocarla bajo nitrgeno

En cuanto a la temperatura de conservacin, la ms baja

recomendada es -70 C, ya que a temperaturas ms altas

ocurren algunas recristalizaciones, las cuales si son
intracelulares son letales para las clulas.

CULTIVOS EN TIERRA
La tierra estril puede ser inoculada con un cultivo e incubada

varios das para inducir esporulacin de bacilos aerobios y

anaerobios.
Una vez que la misma se manifiesta, la tierra es secada

(desecador) y el cultivo mantenido de esta forma en una

atmsfera seca o en refrigerador.
El mtodo ha sido utilizado ampliamente con hongos y

actinomycetes, los cuales han sido mantenidos en estas

condiciones varios aos. Tambin se puede utilizar tierra para
la conservacin directa de suspensiones de esporos.

PRESERVACIN EN
CELULOSA
La tcnica consiste en embeber tiras de papel

de filtro con una suspensin densa de

organismos en suero, glutamato de sodio u otro
agente, las mismas son posteriormente
colocadas en tubos para su posterior secado
bajo vaco.

De esta forma se han logrado conservar cepas

de Streptomyces y Salmonella por perodos de

hasta 2 aos a temperatura ambiente.

LIOFILIZACIN
La tcnica involucra el congelamiento de un cultivo

seguido por un secado bajo vaco, lo cual resulta en la

sublimacin de agua de la suspensin celular.
La liofilizacin es apropiada para la conservacin de la

mayora de las bacterias.

Tambin se emplea en la conservacin de esporos,

actinomycetes y muchos hongos incluidas levaduras.

No es adecuada para clulas animales, algas y hongos en

fase de micelio.

EDUARDO SOLIS
AGUILAR

MEJORAMIENTO DE
MICROORGANISMOS
INDUSTRIALES
Los organismos aislados de la naturaleza productores de

metabolitos de inters industrial producen a los mismos

en niveles muy bajos, por lo tanto se hace necesario
incrementar estos rendimientos para lograr una mayor
rentabilidad de los procesos.

FORMAS DE MEJORAR
RENDIMIENTO:
Optimizacin del medio de cultivo.
Condiciones de operacin.
Mejoramiento gentico de la cepa.

MXIMA
PRODUCTIBILIDAD

La obtencin de cepas
modificadas genticamente se
puede realizar por:

Seleccin
natural

Mutacin
inducida

Recombinaci
n gentica

1.- SELECCIN NATURAL:

Se refiere a la observacin de las caractersticas

morfolgicas de las colonias.

Se asocian con mayor o menor productividad.

Permite seleccionar y posteriormente estudiar

2.- MUTACIN INDUCIDA

Las

mutaciones pueden ser inducidas al exponer los

organismos (o las clulas) a una variedad de tratamientos.
Algunos de los ms comunes son:

a)

Fsicos.

b)

Qumicos.

FSICOS:
La radiacin es un inductor fuerte de mutaciones.

Diferentes tipos de radiacin causan diferentes tipos de

cambiosgenticos. EJ: La radiacin ultravioleta (UV).

Los rayos X pueden causar rompimientos en la doble

hlice del ADN y as conllevar a translocaciones,

inversiones y otros tipos de daos.

QUMICOS:
Se conocen de varios qumicos que causan mutaciones.

Estos qumicos causan sus efectos al unirse con el ADN o los

componentes bsicos del ADN e interferir con los procesos
dereplicacin o transcripcin.

Acido nitroso:

Transiciones
dilecciones.
Uniones cruzadas:
T-----G-C.

A-

N-metil-N-nitro-N- Ms potente
nitrosoguanidina: Alta tasa de mutacin.
(NTG)

MUTANTES CON NIVELES

MEJORADOS DE METABOLITOS
PRIMARIOS
Metabolitos primarios son aquellos esenciales para la vida

de un microorganismo:

Aminocidos
Nucletidos
Vitaminas
cidos orgnicos

Las concentraciones de los mismos estn reguladas por

sistemas de control por retroalimentacin ("feed back).

 Los principales sistemas involucrados son:

Inhibici
n

Represi
n

INVESTIGUE EN QUE CONSISTE CADA UNO DE

ESTOS PROCESOS Y EXPLIQUE SU IMP. A NIVEL
INDUSTRIAL.
En la inhibicin, el producto final de una va metablica

inhibe la actividad de una enzima (normalmente la

primera) de su va de formacin, cundo se ha
sobrepasado un valor mximo de concentracin
intracelular de dicho producto (caso de biosntesis de
aminocidos).
La primera enzima de la va es de tipo alostrica, lo

que significa que en este caso el producto final se une a

ella en el centro regulador (no compite con el sustrato
por el centro activo, como en la llamada inhibicin
competitiva), afectando la unin de la enzima al sustrato.
Es un control fino y casi instantneo.

 La represin es aquella donde el producto final de una va

metablica previene la sntesis de una enzima o de todas

las que catalizan la va mencionada. Esto ocurre a nivel
de cido desoxirribonucleico (ADN), impidiendo la
transcripcin del gen a cido ribonucleico mensajero
(ARNm).
Este mecanismo es de accin ms lenta que el anterior,

ya que permite actuar a las enzimas preformadas.

 Al no producirse el producto final de la ruta, el control es

eliminado.

Estos productos son esenciales para el crecimiento.

Hay mutantes auxotrficos: para uno o ms productos

finales.

El aislamiento de estos mutantes resulta de la obtencin de

una cepa altamente productora.

Los mutantes auxotrficos se utilizan para producir grandes

cantidades de muchas sustancias de interes.

MUTANTES PRODUCTORES DE
ENZIMAS DE INTERS INDUSTRIAL
Solamente se tendrn en cuenta las enzimas degradativas,

cuya produccin puede ser controlada por Induccin y

represin.

Se alteran los mecanismos de control para obtener mutantes

que produzcan enzimas.

En ausencia de inductor y an en presencia de represores.

MUTANTES CON MEJORES RENDIMIENTOS DE METABOLITOS SECUNDARIOS.

Metabolitos secundarios son sustancias no imprescindibles

para las funciones vitales como por ejemplo:

alcaloides
Toxinas
Antibiticos
Giberelinas, etc.

Debido a que la produccin

de estos metabolitos es
afectada por mecanismos de
control genticamente
determinados, las
mutaciones pueden tener
efectos importantes en el
mejoramiento de cepas.
Mediante el empleo de

agentes fsicos y qumicos.

Se pueden emplear dos

tcnicas de seleccin al azar,

de mutantes obtenidos
despus de un tratamiento.

RECOMBINACIN GENTICA
Mejoramiento de una cepa.
Combinacin de genes, responsables de codificar la

produccin de un determinado metabolito.

Los procesos no meiticos en clulas vegetativas que

llevan recombinacin se llaman: parasexuales

ORGANISMOS
:
EUCARIOTES
PROCARIOTE
S

INVESTIGUE 2 EJEMPLOS DE LA APLICACIN DE LA

RECOMBINACIN GENTICA EN MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL
Levaduras como herramienta para el desarrollo

biotecnolgico de vinos
En levaduras y otros organismos eucariotas hay dos
recombinasas requeridas para reparar esas roturas. La protena
RAD51es requerida para la recombinacin mittica y meitica y
la protena DMC1es especfica de la recombinacin meitica
Mejoramiento de la performance durante la fermentacin
Mejoramiento de la eficiencia de procesamiento
Mejoramiento del control biolgico de microorganismos

contaminante

Mejoramiento del sabor y otras caractersticas sensoriales

Mejoramiento de las propiedades saludables del vino

 Se obtienen grandes cantidades del producto, de una forma ms

fcil y sobre todo reproducible, en comparacin con el obtenido

por extraccin a partir de su fuente natural (en el caso de la
insulina, se obtena a partir de pncreas de animales).
Se obtienen productos libres de patgenos y otros riesgos

potenciale
Muchas frutas se han logrado mejorar inyectndole genes

modificados genticamente, as por ejemplo los tomates son

mejorados para que al reproducirse sean de gran tamao, al
arroz se le agregan vitaminas para volverlo ms nutritivo

 Los virus intercambian material gentico entre cepas

heterogneas despus de una infeccin mixta en el mismo

husped.

En bacterias su recombinacin

es: 1) conjugacin, en donde

la transferencia de material gentico se realiza a
travs de pilis, teniendo algunas caractersticas
de un proceso sexual.

2) transduccin, en el que la transferencia de

ADN de una clula a otra se realiza mediante
una partcula viral que acta como vector.
3) transformacin, donde la
recombinacin puede ocurrir
despus de la insercin
experimental de un ADN aislado,
a una bacteria receptora.

KARLA MARINA
RAMIREZ
VAZQUEZ

OBTENCION DE NUEVAS CEPAS POR

INGENIERIA GENETICA
La dcada de 1970 marca el comienzo de la

unin entre las tcnicas bioqumicas para

manipular el ADN in vitro con las tcnicas
genticas para transferir el ADN de unas
clulas a otras.
Ingeniera Gentica.

Clonado de ADN, genes de

cualquier tipo pueden ser tomados
de su ambiente natural,
analizados, alterados y
reinsertados en el mismo
organismo o en otro diferente.

El aspecto principal del

clonado es la propagacin
de un fragmento
determinado de ADN en
una lnea celular de
crecimiento.

propagarse debe ser unido a

una molcula trasportadora o
vector el cual si es capaz de
multiplicarse en el husped.

endonucleasas de
restriccin las cuales
reconocen y cortan el ADN
en sitios bien definidos

El clonado de genes ha sido

posible gracias a una serie de
descubrimientos
fundamentales.

Existen varios tipos de enzimas de restriccin

Las enzimas de restriccin de tipo II: La ruptura de

dobles hebras en sitios donde se reconocen

secuencias de bases de 4 a 6 bases de longitud.
En algunos casos la ruptura del ADN se produce en

sitios opuestos de las dos

fragmentos romos (Hae III).

hebras

rindiendo

Mientras que en otras ocasiones la ruptura se

produce en forma de escalones, dejando extremos

cohesivos (Eco RI).
CITE APLICACIONES INDUSTRIALES DE ESTE PROCESO

APLICACIONES INDUSTRIALES DE
ENZIMAS DE RESTRICCIN
LafuncindelasenzimasderestriccinesromperconelADN

extraoquepodainfectaralasbacterias,lasenzimasreconocen
secuenciasespecficasenlysegeneranlosmismosfragmentos
enunADNdeterminado.

La obtencin de un organismo transgnico

La manipulacin de la bacteria E. coli para producir

insulina humana para los diabticos

EDUARDO SOLIS
AGUILAR

VECTORES DE CLONADO

Contener al
menos un
sitios donde
se pueda
integrar el
ADN extrao
sin destruir
una funcin
esencial
(replicacin).

Para la
transferenci
a y
expresin
de ADN
extrao
en una
clula
husped
Vector de
expresin

No generar
productos
txicos
Pequeo,fc
il
preparacin
Y
replicacin
en la clula
husped

Debe ser
capaz de
entrar y
replicarse
dentro de
ella

 Los plsmidos son muy empleados como

vectores

Los que poseen genes

Son molculas de
ADN circular
extracromosomal
que se replica
independientement
e.

para resistencia a
antibiticos son de gran
utilidad debido a que su adquisicin por
bacterias componentes de fcil detectar.

Es el pbr322

El cual lleva genes

para resistencia a
ampicilina y
tetraciclina

Poseen sitios de
restriccin para la
insercin de
fragmentos de ADN ,
en este caso la
bacteria que reciba
estos fragmentos
recibir tambin la
resistencia
especifica.

pBR322
El plsmido pBR322 es el primer plsmido artificial

diseado en 1977 por dos cientficos mexicanos

Plsmido pBR322 los plsmidos o vector en pocas

palabras
gentica

es

un

agente

que

transfiere

informacin

 En una clula la informacin gentica est

presente en dos formas diferentes:

1. El ADN genmico
2. El Acido ribonucleico mensajero ARNm

Estas dos formas pueden ser clonadas

empleando dos estrategias distintas.

 Donde

la
el conjunto de colonias
resultantes de la transformacin representa
la biblioteca genmica o genoteca, de
la cual habr que extraer los clones de
inters.

El segundo caso a partir del ARNm se

obtiene un ADN complementario (ADNc),

como para un ARN eucariotico. Este AND se
puede insertar posteriormente en un
plsmido u otro vector.

 En la formacin de una genoteca para la expresin

de genes de un organismo eucariotico, se debe

tener en cuenta que en este caso el ADN
genmico contiene secuencias o regiones que no
aparecen en el ARNm denominadas intrones o
secuencias intervinientes y por regiones
presentes en el ARNm llamadas exones.

El numero y tamao de los intrones varia de un

gen a otro, pudiendo encontrarse genes carecen

de ellos.

 En el proceso de transcripcin se obtiene un ARNm

primario (localizado en el ncleo) que contiene

tanto las secuencias de los exones como de los
intrones, este sufre luego un proceso de
maduracin.

El proceso de trasformacin por plasmidos se

caracterizan en general por ser de baja eficiencia;

por lo tanto para incrementar la misma se deben
tener en cuenta una serie de factores:

a) eleccin de una cepa husped adecuada

b) etapa de crecimiento (depende de la cepa)
c)

procedimiento de transformacin empleado

Clonar grandes fragmentos

de ADN pueden emplearse
como vectores cosmido,
que son elementos
genticos equivalentes a
plasmidos de gran tamao
y encapsulados para ser
introducidos a una clula.

KARLA MARINA
RAMIREZ
VAZQUEZ

IDENTIFICACION DE CLONES DE
INTERES
Presenta un problema que demanda tiempo

y que depende de la sensibilidad

especificidad del sistema de deteccin.

Sondas radiactivas de gran especificidad

que contiene secuencias complementarias

al ADN de inters.

PERSPECTIVAS DE LA INGENIERIA
GENETICA
Favorecer la
sntesis del
producto del gen
clonado,
incrementando el
contenido de
copias del gen de
la clula.

clulas
Bacillus subtilis y
vegetales
levaduras
pueden ser
Saccharomyces
cerevisiae y
empleadas para
la insercin de Schizosaccharomy
ces pombe
genes extraos

BIOINGENIERIA: USOS Y
APLICACIONES
MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

Introduccin a la bioingeniera
El origen de ingeniera biolgica se sita

en torno a la Edad Media

Tcnicas empricas
Elementos constructivos: piedras y madera.

El nombre de ingeniera biolgica proviene

del termino ingenieurbiologie

Ingeniera biolgica, Bioingeniera o

Ingeniera del paisaje

De acuerdo con la definicin de H. M.

Scheichteln:
Disciplina constructiva que persigue

objetivos tcnicos, ecolgicos, estticos y

econmicos, utilizando sobre todo materiales
vivos como semillas, plantas, partes de
plantas y comunidades vegetales solos o en
combinacin con materiales inertes como
piedra, tierra, madera. Hierro o acero como
elementos constructivos

La bioingeniera se apoya en cuatro

tcnicas:
1. Tcnicas de recubrimiento
2. Tcnicas de estabilizacin
3. Tcnicas mixtas
4. Tcnicas complementarias

En que consiste cada una de estas tecnicas? Dnde se utilizan?

Tcnicas complementarias de las

dems, pero no cumplen una finalidad
de estabilizacin o proteccin frente a
la erosin.
- la plantacin de especies leosas
(acelerar el desarrollo de la
vegetacin)
- la creacin de barreras anti ruido
- los drenajes
- las rampas para peces

Complement
a-rias

Conjugan la utilizacin de
elementos vegetales con los
materiales (madera, acero,
piedra, etc.) que acta
como estabilizador hasta
que las plantas sean
capaces de realizar esta
funcin.
- Entramados de
madera

Destinadas a
evitar la erosin
superficial
-Siembras de
Recubrimien
to

Bioingenier
a

Mixtas

cualquier tipo
-Hidrosiembras
- Empleo de
mantas orgnicas
en las siembras.

Estabilizaci
n

Permiten estabilizar y se
basa en la disposicin de
plantas leosas
obtenidas por
reproduccin vegetativa
y colocada en filas
horizontales.
- Estaquillados
- Trenzados
- Plantaciones

Ingeniera biolgica
Aplica mtodos tecnolgicos e ingenieriles

a los problemas presentados por la

medicina y la biologa.
Nuevos enfoques para tratamiento de

enfermedades
Desarrollo de cultivos y alimentos
Usos no alimentarios de cultivos
Cuidado medio-ambiental
Gentica para modificar organismos

Investigue al menos un ejemplo donde aplique la ingenieria biolgica

sin dejar de lado el aspecto industrial

Aplicacin en el aspecto industrial

En la fabricacin/ elaboracin de:

Biorreactores
Dispositivo que proporciona un medio

ambiente controlado que permite el

crecimiento eficaz de las clulas y la
formacin de un producto.
Temperatura
pH
Concentracin de Oxigeno
Sustrato
Sales

Principales usos de los biorreactores

Mantener las clulas distribuidas
Mantener constante la temperatura
Minimizar gradientes de [Nutrientes]
Prevenir sedimentacin
Permitir difusin de gases
Mantener cultivo puro
Maximizar el rendimiento y produccin
Minimizar el gasto y costos de produccin
Reducir al mximo el tiempo

Modos de operacin:
Modo lote

Cite usos de cada uno

Modo de alimentacin (fed-batch)

A nivel industrial
Modo continuo

Sustrato
Microorganism
o

Recuperacin
del producto

El cultivo no
se toca, solo
para tomar
muestras

Alcohol
Antibiticos
Lcteos

Uso a nivel industrial

Modo lote (batch): Clulas cultivadas en un recipiente con una

concentracin inicial, sin que esta sea alterada por nutrientes

adicionales o el lavado, por lo que el volumen permanece constante
y solo las condiciones ambientales del medio son controladas por el
operador.
Modo

de
alimentacin
(semicontinuo/fed-batch):
Los
nutrientes son alimentados de forma continua o semicontinua,
mientras que no hay efluente en el sistema. La adicin intermitente
del sustrato mejora la productividad de la fermentacin
manteniendo baja la concentracin
del sustrato.

Modo

continuo: Consiste en alimentar nutrientes y retirar

productos continuamente, bajo ciertas condiciones el cultivo puede
alcanzar un estado estacionario, donde no existe variacin con el
tiempo del volumen del biorreactor; para as, producir sustancias
biolgicas acondiciones optimas y para estudios fisiolgicos.

Biorreactores
Ventajas

Econmico
Fcil montaje
Control de humedad
Monitoreo
Temperatura

Desventajas

Dificultad en la toma

de muestra
Problemas en la
eliminacin de calor

Transferencia de Oxgeno
La transferencia de gases es el fenmeno

mediante el cual se transfiere gas de una

fase a otra.

Transferenci
a de O2 a la
solucin

Desde la
solucin a
la clula

Absorcin
de O2 a la
clula

e algun proceso microbiologico industrial donde aplique este ejemplo

Ejemplos
Procesos fermentativos aerobios
Tratamiento de Aguas Residuales

Factores que influyen en la transferencia:

Grado de agitacin
Viscosidad del cultivo
Velocidad del flujo del aire
Formacin de espuma y uso de

antiespumantes
Es importante por que el valor de la

capacidad de transferencia de O2
determinara la productividad del sistema.

Agitacin de Biorreactores
Asegura la suspensin homognea de los

microorganismos en el medio que

contienen los nutrientes.
Favorece la interaccin de las distintas
fases que constituyen el contenido del
biorreactor o fermentador

Fase Liquida.
Reactivos que condicionan la fermentacin
Elementos que modifican el pH

Fase gaseosa
Gas de oxigenacin para procesos aerobio

Fase slida
Clulas microbianas

Generalmente se usan impulsores que

producen un flujo radial.

La seleccin del impulsor y de su velocidad
esta basado sobre otros datos obtenidos
con sistemas similares.

Un fermentador

continuo de tanque
agitado (FCTA)
necesita que se le
aadan dispositivos
para la eliminacin y
descarga en continuo.

Clasificacin de Biorreactores
Tanto biorreactores como fermentadores se

clasifican primeramente en modo de

operacin:
1. Discontinuo

Cite al menos un ejemplo de cada uno y su

A nivel industrial

2. Semicontinuo
3. Continuo

Define el sistema de cultivo que es el

mismo y delimita la clasificacin procesalproductiva del bioproceso.

-Elab. De tepache
- Elab. De yogurt

Discontinu
o

Biorreactor
es
Penicilinaa

Continuo

-Elab. De cerveza y
etanol
- Prod. De
antibioticos

Semicontinuo

Clasificacin biolgica
De acuerdo al metabolismo procesal del

sistema de cultivo:
1. Anaerbico
2. Facultativo
3. Aerbico

Cite al menos 2 microorganismos de

importancia
Industrial con estas caractersticas de
crecimiento

El metabolismo define los parmetros y

caractersticas operativas-biolgicas de
diseo y de operacin del biorreactor

Anaerobi
o

Facultati
vo

Aerobio

Lactobacillu
s (yogurt)

Saccharomyces
cerevisiae
(pan, ceerveza,
vino)

Penicillum
notatum
(la penicilina)

Streptococc
us

Clostridium
acetobutylicum
(Acetona y
butanol)

Streptomyces
(antibiticos)

Clasificacin Biolgica-Operativa
Se conjuntan ambas clasificaciones para

establecer un propsito de utilizacin, el

modo de cultivo y el bioproceso.
Destino de cultivo del biorreactor
Tipo de cultivo a utilizar.

Biorreactores y tipos de cultivo:

Clulas y microorganismos

anaerbicos
Bacterias
Metabolismo degradativo
Autnomos y nutricionalmente

independientes
Vas alternas donde una molcula orgnica es
utilizada como aceptor de electrones.

Clulas y microorganismos

facultativos
Ambivalentes Sobreviven entre ambientes

aerbicos y anaerbicos
Metabolismo mixto
Relaciones parasitarias o simbiosis: hongos y
levaduras.
(cite al menos 1 ejemplo de c/u)

Ejemplos
Ambivalente:
Aerobico: Estreptomicetos (antibiticos) (S. griseus

=estreptomicina, S. rimosus =tetlaciclina)

Anaerobico: Lactobacillus (produccin de yogur, quesos)
Metabolismo mixto: Saccharomyces cerevisiae

(produce etanol en condiciones de crecimiento anaerobio)

Relaciones parasitarias o simbiosis:
- Hongos: Penicillium chrysogenum (penicilina)
-Levaduras: Saccharomyces

Clulas y microorganismo aerbicos

Utilizan va de la glucolisis como forma de

respiracin celular
Metabolismo constructivo
Nutrientes de diferentes fuentes
Bacterias, plantas y animales.

Sistemas de cultivo
Cultivos Microbianos Anaerbicos-

Fermentador Bacterial (CO2)

Medio de cultivo adecuado
Agitacin vigorosa y cierta cantidad de O2

disuelto
Cultivos Microbianos Facultativos-

Fermentador Bacterial
Presencia de O2 en bajas concentraciones

Agitacin
moderada
or qu es
importante que
un biorreactor que trabaja con microorganism
aerobios tenga agitacin vigorosa?

Por qu es importante que un biorreactor

que trabaja con microorganismos
Anaerobios tenga agitacin vigorosa?
Porque

Este tipo de microorganismos tienden a agruparse y

de alcanzar gran tamao y peso, lo cual precipitaran.
Por eso, la operacin de este tipo de biorreactores
debe ser en rgimen turbulento. Los biorreactores
generalmente son diseados con un mecanismo de
levantamiento por aire air lift que combina una
agitacin vigorosa (turbulenta) con una adecuada
aireacin (oxgeno disuelto) del medio de cultivo.
(23
)

Cultivos Celulares Aerbicos y

Facultativos-Fermentador mictico
(CO2)
Eucariotas
Presencia de 02 disuelto

Cultivos Celulares Aerbicos Estrictos-

Fermentador con Aireacin (O2)

Presencia de O2 disuelto
Adecuada agitacin

Clulas Vegetales en suspensin

Biorreactor de Levantamiento por Aire

(O2) en rgimen turbulento.
Lnea de aireacin
Agitacin vigorosa.

Investigue los procesos donde se utiliza este tipo de biorreactor

Procesos en los que se utiliza

En los que las clulas vegetales pueden ser
cultivadas en suspensiones celulares: pequeos
agregados celulares que se suspenden en el
medio de cultivo mediante agitacin.
Dado que las clulas vegetales respiran, el
diseo del biorreactor debe incorporar una lnea
de aireacin para suministrar oxgeno disuelto al
medio de cultivo, adems de agitacin vigorosa,
pues los agregados celulares vegetales tienden
a agruparse y de alcanzar gran tamao y peso,
precipitaran.

Protoplastos Vegetales-Biorreactor de

Levantamiento por Aire (O2) en

Rgimen Laminar
Cama de aire que opere en rgimen
laminar
Evitar esfuerzos cortantes e hidrodinmicos.
Presencia de proteasas y lipasas.

En que procesos se utilizan este tipo de biorreactores a nivel industri

Procesos en los que se utiliza

En los que el medio de cultivo contenga las

proteasas y lipasas necesarias para evitar

la regeneracin de la pared celular, aunado
a una cama de aire que opere en rgimen
laminar, para evitar que los esfuerzos
cortantes e hidrodinmicos generados en
el medio de cultivo daen (lisis celular) las
clulas en suspensin.

Clulas Animales- Biorreactor de

Lecho Fluidizado (O2)

Proximidad mutua y soporte solido
Aumentar densidad celular
Lecho fluidizado de microesferas hechas de

material cramico poroso

Oxigeno disuelto
Agitacin laminar

Dnde se utilizan a nivel de microb. Industrial este tipo de biorreactor

Procesos en los que se utiliza

Los reactores de lecho fluidizado se utilizan

en el tratamiento de residuos con arena o

un material similar que soporta las mezclas
de poblaciones microbianas. Tambin
pueden utilizarse con organismos
floculantes en los procesos de la
fabricacin de cerveza o de vinagre.

Clulas Inmovilizadas- biorreactor de

Fibra Hueca (O2)

Batera de fibras hueca y porosa

En que procesos
Indsutriales es
Imperante que
Los biorreactores
Cuenten con esta tecnologa

Medio de cultivo fluye en contrasentido.

Tambor rotativo

Procesos en los que se utiliza

Los reactores de fibra hueca son los

dispositivos ms utilizados para inmovilizar

y concentrar cultivos celulares animales.
La inmovilizacin celular es otra forma de
lograr proximidad celular y aumentar la
densidad celular y la concentracin de
metabolitos dentro de las clulas.

Clulas empaquetadas- biorreactor de

Lecho empacado (O2)

Matriz de soporte slido que retiene las

clulas.
Geometra
Afinidad

Cultivos Enzimticos- Reactores de

Lecho Cataltico.
Anclados a un lecho semislido o semifluido
Requiere cofactor que agilice el proceso

Investigue la aplicacin de este tipo de biorreactores en microb.

metablico.
Industrial y mencione
Microorganismos que se utilicen en dichos procesos.

 Caractersticas:
o Es la configuracin de mayor importancia

industrial
o Usa principalmente para la produccin a gran
escala de reactivos primarios o intermedios.
o Presenta la ventaja de que no serequiere la
separacin de catalizador.
o Objetivo: aumentar la densidad y
concentracin celular.

(29
)

Modo de operacin y sistemas de

cultivo
Influye en el diseo propio del reactor as

como en el modelo cintico de crecimiento

de cultivo y en el proceso de produccin:
Discontinuo (Batch): por lote o tandas, sin

alimentacin. Se coloca la carga total y se

deja que se lleve a cabo el proceso por el
tiempo necesario (de retencin)

Semicontinuo (feed Batch). Por lotes

alimentados, con alimentacin de entrada. Se

alimenta para que el cultivo tenga un
producto con mximo crecimiento y mayor
productividad
Continuo. Se alimenta una lnea de entrada

y se drena una lnea de salida; de manera que

los flujos de ambas lneas sean iguales y la
produccin sea contina.

TIPOS DE BIORREACTORES

REACTORES
REACTOR SIN CALENTAMIENTO Y MEZCLA
El mas antiguo de todos los procesos de digestin. Reactor de
alimentacin semicontinuo. La agitacin la llevan a cabo las
burbujas de biogs producido en el proceso.

REACTOR DE MEZCLA CONTINUA

Son reactores relativamente simples, calentados de mezcla
completa. Carecen de medios especficos de retencin de la
biomasa activa.

REACTOR PRIMARIO+SECUNDARIO
Sin equipo de agitacin ni de calentamiento. Concentran el
influente digerido y eliminan el liquido sobrenadante.

Investigue usos de cada tipo de reactor

Usos de reactores
REACTOR SIN CALENTAMIENTO Y MEZCLA
Se suelen utilizar en la digestin de vertidos que contienen
estircoles. Son, pues, digestores tpicamente rurales.

REACTOR DE MEZCLA CONTINUA

Se aplican en el tratamiento de fangos de aguas residuales
urbanas, y de influentes con estircoles y aquellos provenientes
de actividades agrcolas o agroindustriales.

REACTOR PRIMARIO + SECUNDARIO

Tratamiento biolgico de la materia orgnica disuelta presente en
el agua residual, transformndola en slidos suspendidos que se
eliminan fcilmente.

BIORREACTORES
DESECHABLES PARA EXPRESION DE
PROTEINAS
un compartimiento de clulas mediante una
membrana la cual permite la difusin continua de
nutrientes. (donde se utilizan?)

FEMENTACION ALCOHOLICA EN
CONTINUO
Presentan alto rendimiento de etanol.

BIORREACTOR DESECHABLE PARA EXPRESIN

DE PROTENAS
Cultivos celulares: Permite cultivar clulas en las
densidades ms altas (de 10^7 a 10^8 clulas/ml) y
expresar protenas como anticuerpos monoclonales
en concentraciones muy altas (50 veces ms)

Produccin de anticuerpos monoclonales en

hibridomas.
Expresin de protenas recombinantes en
clulas transfectadas.
Produccin viral
Mantenimiento continuo de cultivos para
estudios a largo plazo.
Cultivo celular con densidad alta

FERMENTADOR
BATCH
Una cant. De materia se inocula y se introduce en el
fermentador, este ultimo se inocula con el moo
seleccionado.

CON CELULAS INMOVILIZADAS

Los moos se adhieren a las paredes de los poros.
Crecen los moos dentro de la matriz. La velocidad
de alimentacin debe ser adecuada para el
sustrato .

DE TORRE
El microorganismo debe sedimentar rpido.
La alimentacin se realiza por la parte inferior y el
producto se extrae del tope del mismo.
Usos de cada uno a nivel

UsosBATCH
industriales

DE TORRE

DE CELULAS
INMOVILIZADAS

INSTALACION PARA LA FERMENTACION

Depende del tipo de fermentacin.

Debe evitarse la contaminacin.
Esterilizar con vapor de agua a presin,

filtracin, Radiacin UV.

Fermentador esttico
Todos o la mayora

de los componentes
del medio se
introducen al inicio
de la operacin.
Los distintos puntos
de entrada al
tanque son
baados por vapor
para asegurar que
el proceso se
efecta

Esterilizacin del medio de cultivo

para una fermentacin
El fermentador y su equipo, as como el medio

de cultivo deben estar estriles y no debern

existir roturas mecnicas en el fermentador que
puedan permitir la entrada de microorganismos.
El biorreactor se puede esterilizar destruyendo

los microorganismos con:

Calor
Radiacin (Fundamento del mtodo)
Productos qumicos (Cules son los mas utilizados?)
Filtros (tipos de filtros?)

Radiacin
La luz UV impide que
los moos se
reproduzcan
daando su cido
nucleico absorbiendo
la longitud de onda,
liberando energa y
provocando rearreglo
de enlaces qumicos

Productos qumicos
Formaldehdo
H2O2
xido de etileno

Filtros
Absolutos
Fibrosos

Durante la fermentacin se deben

asegurar dos puntos:
Esterilidad en el medio de cultivo
Esterilidad en el aire que entra y sale
A nivel industrial la esterilizacin de

medios, se logra por vapor.

El aire se esteriliza por la temperatura
elevada alcanzada por el compresor,
seguido a travs de un medio filtrante
fibroso.

Principales tipos de esterilizacin

Esterilizacin continua
Se lleva a cabo en 30-10 seg. a 140 C.
La desventaja de este mtodo es que con

algunas soluciones de nutrientes se forman

sales insolubles.

Esterilizacin discontinua
Necesitan de esterilizacin (121C) lo que

depende de la conduccin del vapor y del

tamao del fermentador.
Una vez que se ha alcanzado la temperatura
correcta se requieren otros 20-60 minutos
para el proceso real de muerte, seguido de
enfriamiento durante una hora.
Desventaja:
Las fases de calentamiento, esterilizacin y

enfriamiento no solamente matan a los

microorganismos, sino que tambin alteran
severamente la solucin de nutrientes.

Biorreactores de tanque agitado en

elaboracin de frmacos
Cilindros en cuya agitacin se lleva a cabo por uno o
ms impulsores, los cuales pueden ser axiales o
radiales. El gas es suministrado por un difusor, sin
embargo, la dispersin del gas es funcin del impulsor.
Los requerimientos y necesidades actuales para la
produccin de biomolculas teraputicas a gran escala
y a menor costo, estn forzando la innovacin de
biorreactores

En la mayora de la industria biotecnolgica

actual,
la
produccin
de
protenas
recombinantes expresadas en hospederos
como bacterias, levaduras, clulas animales o
vegetales en cantidades comerciales, emplean
por lo general equipos reutilizables de acero
inoxidable o vidrio de alto costo, que requieren
limpieza,
esterilizacin,
validacin
y
calificacin en cada lote de produccin.

Biorreactor de aerobio de lecho fluido

Obtencin de etanol

Fermentador batch
Obtencin de levadura para hornear
Obtencin de pigmento astxasantina

Batch continuo
Produccin de goma xantana

Obtencin de goma xantana

El proceso tpico de produccin de xantano es

discontinuo. Comienza con la conservacin y el

cultivo de la cepa de Xanthomonas campestris.
Conservacin: Liofilizacin y congelamiento a
fin de mantener sus propiedades
Cultivos: Placas de petri, erlenmeyers y
fermentadores pequeos hasta obtener el
inculo. El inculo ingresa al biorreactor junto
al medio de produccin previamente
esterilizado.

La fermentacin se lleva a cabo en condiciones

aerobias, controlndose la temperatura, pH,

oxgeno disuelto, formacin de espuma y agitacin.
Al final de la fermentacin se separan las clulas
por centrifugacin o filtracin.
El xantano formado se separa tpicamente por
precipitacin con agentes como isopropanol, etanol
o acetona, agregado de sales y ajuste de pH.
El producto precipitado se lava, se seca, muele y
envasa.A veces se somete a tratamientos
enzimticos intermedios para modificar sus
propiedades

Mtodos que requieran transferencia

de oxigeno.
Obtencin de penicilina
La aireacin presenta un problema especial en

esta
fermentacin,
debido
a
que
al
incrementarse la biomasa, y por consiguiente la
demanda de 0 , aumenta tambin la viscosidad
del medio, lo cual crea una resistencia
importante para la transferencia de oxgeno.
Para superar estos problemas se puede
incrementar la potencia de agitacin, el caudal
de aire, la presin dentro del reactor, cambiar
las condiciones de cultivo
2

Obtencin de enzimas pectinasas

(Aspergillus niger):
Se pretende disminuir la cantidad de

pectinasas en diversos productos comerciales

mediante la transferencias de oxigeno.
En general:
Produccin de acido ctrico
Obtencin de enzimas
Cultivo de clulas
Elaboracin de cerveza y vino

Se emplearan
reactores de:
Columna de burbujeo
Reactor air-lift
Entre otros

Que procesos en la industria

farmacutica, alcohlica y lctica
aplican a lo visto en esta exposicin?
Farmacia: produccin de biofarmacos,

goma xantana
Batch discontinuo
Biorreactor desechables para una expresin

de protenas eficaz.
Alcohlica : produccin de cerveza y vino
Biorreactores para fermentacin alcohlica en

continuo.
Lctica: produccin de yogurt.

Aplicacin a nivel industrial de la

ingeniera biolgica.
Biofarmacologa

y biomedicina - Desarrollo de modelos

celulares para el estudio "in vitro" de
procesos biolgicos, sin recurrir al empleo
de animales de experimentacin.
- Estudio del metabolismo y efecto txico
de frmacos mediante sistemas celulares
- Evaluacin de la expresin de genes
determinados implicados en el
metabolismo, bajo la accin especfica de
un frmaco.

UNIVERSIDAD JUREZ DEL ESTADO DE DURANGO

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS
QUIMICO FARMACEUTICO BIOLOGO
Microbiologa industrial

Biotecnologa y sus
aplicaciones
Catedrtica:
MBC. Janeth Tostado Quezada
Por: Katia Mar y Carlos Carrizales
Gmez Palacio, Durango Septiembre 2016

BIOTECNOLOGA
Conjunto
de
procesos
industriales
que
se
sirve
de
microorganismos o de clulas procedentes de animales o
vegetales para obtener determinados productos comerciales o
para realizar importantes transformaciones qumicas.

LA BIOTECNOLOGA SE
OCUPA, ENTRE OTROS, DE
PROCESOS COMO:

Clonacin

Inseminacin
in vitro

Terapia
gnica
Obtencin de
bebidas
alcohlicas

HISTORIA
El trmino biotecnologa se comenz a usar a finales de los aos 70
con la aparicin de la ingeniera gentica.

En la actualidad, con la expansin de la biotecnologa y los

mtodos de manipulacin gentica, los microorganismos han
sido modificados para fabricar productos tiles que los
microorganismos no producen de manera natural.

MICROORGANISMOS UTILIZADOS

MO
UTILIZAD
OS EN
BIOTECN
OLOGA

Bacteri
as
Mohos
Levadu
ras

Bacterias
Las bacterias
lcticas
(Streptococcus,
Lactobacillus) y

Eschericia
coli
Pseudomonas,
Actinomicetos y
Bacillus

acticas
(acetobacter)

Utilizadas
respectivamente en
la obtencin de
derivados lcteos y
vinagre

Son utilizados en
la produccin de
antibioticos

bacilos

El principal
organismo
utilizado en la
Utilizados en
biorremediacin produccin de
protenas y
(eliminacin de
manchas de
pptidos
recombinantes
petrleo.
en ingeniera
gentica.

HONGOS
Las levaduras se utilizan en procesos de fermentacin para la
obtencin de bebidas alcohlicas (como el gnero Sacharomyces
para la cerveza), pan etc.
Los mohos (como Penicillium se emplean en la fabricacin de
diversos antibiticos)

INGENIERA GENTICA
Es una rama de la gentica que se
concentra en el estudio del ADN, pero
con el fin de su manipulacin. En otras
palabras, es la manipulacin gentica de
organismos con un
propsito predeterminado.

TCNICAS DE INGENIERA
GENTICA
Se utiliza en:
Estudios sobre la regulacin de la expresin gnica

La regulacin de la produccin comercial de sntesis

de protenas como la Insulina o la hormona del
crecimiento
El desarrollo de organismos transgnicos
transgnicos y en la amplificacin del ADN

en la amplificacin

TECNOLOGA DEL ADN

RECOMBINANTE
Uno
de
las
herramientas
fundamentales utilizadas son los
llamados enzimas de restriccin
(endonucleasas) son aquellos que
cortan el ADN por unas secuencias
especficas,
generalmente,
constituidas por 4 u 8 pares de
bases.
Estos puntos de corte se llaman
secuencias de reconocimiento.

Enzimas de restriccin:
Las enzimas de restriccin permiten unir extremos
pegajosos, procedentes de cualquier molcula de
ADN (incluso de especies distintas), que hayan sido
cortados por la mismo enzima. De esta forma, se
pueden sintetizar molculas de ADN recombinante,
como pueden ser plsmidos, que contengan genes
humanos

Plsmidos:
Fragmento circular de ADN bicatenario extra que existe en algunas
bacterias con capacidad replicativa autnoma. En plantas se utiliza
un plsmido de la bacteria Agrobacterium tumefaciens. La bacteria
ms utilizada como husped es Escherichia coli

TECNOLOGA DEL ADN

RECOMBINANTE
El ADN recombinante es un
fragmento de ADN
construido artificialmente
con segmentos no
homlogos procedentes de
organismos diferentes.

Consta de un vector, que es un fragmento que contiene un punto de

iniciacin de la replicacin (generalmente es un plsmido o un
virus), y el fragmento o gen que es objeto de estudio.

PREPARACIN DE LA SECUENCIA DEL

ADN PARA SU CLONACIN
Partimos de clulas
con ncleo, que deben
ser lisadas (rotas).

El ADN obtenido se
concentra y se
fragmenta por accin
de las enzimas de
restriccin.

Las protenas
estructurales,
enzimas, ARN y
restos moleculares
deben separarse
del ADN.

Se asla el ADN que

se desea clonar.

PREPARACION DE UN VECTOR DE
CLONACIN
Es la parte esencial del proceso, ya que el ADN debe
separarse y concentrarse

Cortar el vector con

enzimas de restriccin,
las mismas enzimas que
se utilizaron para cortar
el ADN que se quiere
insertar

Unir el vector y el
ADN que se va a
clonar..

Una vez que el ADN ha sido introducido en el vector se denomina ADN inserto,
o implemente, inserto.

FORMACIN DEL ADN

RECOMBINANTE

En esta etapa se produce la

unin covalente del vector y el
ADN
inserto mediante una
ligasa.

INTRODUCCIN DEL ADN RECOMBINANTE EN LA

CLULA ANFITRIONA

Para la clonacin (replicacin del

ADN recombinante) se necesita la
maquinaria celular. Por ello, hay que
introducir el ADN recombinante en
una clula anfitriona

TIPOS DE CLULAS ANFITRIONAS

Clulas bacterianas: son las ms utilizadas, ya que tienen una alta
velocidad de replicacin, un bajo costo de mantenimiento de las colonias y
son fcilmente manipulables.
Clulas eucariotas: aunque las clulas eucariotas son, en general, difciles
de mantener se usan levaduras y clulas tumorales.
Clulas vegetales o animales en caso de que se desee obtener
plantas o animales transgnicos, o bien emplear terapia gnica.

o Levaduras: se utilizan en procesos relacionados

con la investigacin de la expresin y la regulacin
gnica y la sntesis de protenas eucariotas.

Clulas tumorales: apropiadas en procesos de

clonacin,
ya
que
la
velocidad
de
replicacin es muy alta y se mantienen los caracteres sin
producirse
cambios,
pues
son muy estables.
http://www.youtube.com/watch?v=im-aQuLZfvo&feature=related

CLONACIN
Clonar quiere decir hacer copias idnticas. Clonar un gen es
obtener un conjunto de numerosas copias de ese gen. Por tanto un
clon de genes es un conjunto de genes idnticos procedentes de un
gen correcto

Las clulas hospedadoras deben de cumplir los siguientes

requisitos: experimentar un crecimiento rpido, no ser patgenas o
peligrosas y ser capaces de captar o tomar del medio molculas de
ADN e incorporarlas en el conjunto de su genoma..

La amplificacin se hace por la tcnica de la Reaccin en Cadena de

la Polimerasa o PCR (Polimerase Chaine Reaction).

Aplicaciones:

clonacin de
ADN

deteccin
de
secuencias
sin purificar.

el
diagnstico
de
enfermedad
es

bsqueda de
mutaciones

resolucin
de
problemas
forenses

VECTORES DE CLONACIN
DEL ADN
En el proceso de manipulacin tambin son importantes los
vectores: partes de ADN que se pueden autorreplicar con
independencia del ADN de la clula husped donde crecen.
Estos vectores permiten obtener mltiples copias de un trozo
especfico de ADN, lo que proporciona una gran cantidad de
material fiable con el que trabajar.
El proceso de transformacin de una porcin de ADN en un
vector se denomina clonacin.

VECTORES MS UTILIZADOS
Plsmidos: Fragmento circular de ADN bicatenario extra que existe en
algunas bacterias con capacidad replicativa autnoma. En plantas se
utiliza un plsmido de la bacteria Agrobacterium
tumefaciens. La bacteria ms utilizada como husped es Escherichia coli.
Virus bacterifagos: como el fago lambda que inyecta su genoma en la
bacteria, y mediante el ciclo ltico, induce la formacin de cientos de
copias iguales de su ADN, con lo que se consigue la clonacin del genoma
del virus. En clulas animales el vector ms usado SV40 (virus del simio)
Virus animales: retrovirus, adenovirus. Su genoma tiene que estar
modificado artificialmente eliminando sus genes de virulencia. Los
retrovirus (la familia del virus del sida) se insertan en el cromosoma
celular.

REACCIN CADENA
POLIMERASA
Otro mtodo para la produccin de rplicas
de ADN descubierto recientemente es el de
la utilizacin de la enzima polimerasa.
ste mtodo, que consiste en una
verdadera reaccin en cadena, es ms
rpido, fcil de realizar y ms econmico
que la tcnica de vectores

El ADN de cadena doble que se quiere amplificar se calienta casi

hasta ebullicin, de modo que se separan las dos cadenas, las cuales
van a servir de moldes ms adelante.
Se aaden dos cebadores (normalmente fabricados por sntesis
qumica). Cada cebador es un corto oligonucletido, correspondiente a
una de las secuencias que flanquean el trozo a amplificar. Al bajar la
temperatura, cada cebador se empareja por puentes de hidrgeno
con la secuencia complementaria de una de las cadenas del molde, y
obligar a la ADN-polimerasa a comenzar la copia de esa cadena
molde complementaria (por supuesto, en sentido 5'3')

Al aadir la ADN-polimerasa y los 4 tipos de

desoxirribonuclenucletidos, se produce la sntesis de las
respectivas cadenas complementarias de cada molde, a
partir de los respectivos cebadores. Al final de esta fase,
tenemos el doble de cadenas de ADN de doble cadena
respecto a las de partida.
Luego la mezcla se vuelve a calentar hasta casi ebullicin,
con lo que se vuelven a separar las cadenas, que en su
forma de cadenas sencillas sirven para iniciar otro ciclo
idntico al anterior, al final del cual tendremos el cudruple
de ADN.
Si repetimos el protocolo n ciclos, el resultado ser 2 n
copias a partir de las originales

ORGANISMOS
TRANSGNICOS
Los organismos genticamente modificados
se crean introduciendo uno o ms genes,
pertenecientes a otros seres, o quitando uno
o ms genes, pertenecientes al organismo.
Estos
organismos
vulgarmente con el
transgnicos

son
conocidos
sobrenombre de

Los
organismos
transgnicos
estn
genticamente modificados, pero con genes
pertenecientes a otros organismos muy
distintos a ellos (distinta especie).

Los organismos genticamente modificados han

sido desarrollados para facilitar la mejora animal y
vegetal, ya que acortan los tiempos de espera en la
depuracin de la especie por seleccin de individuos

Aplicaciones
En investigacin: para el estudio de la expresin de genes y la creacin de genotecas.

Medicina
Para la obtencin de frmacos o protenas cuya sntesis
es difcil conseguir "in vitro". Tambin, para la obtencin
de tejidos u rganos, o la reparacin de anomalas
genticas en humanos

Mediante la clonacin del ADN recombinante de genes de

ciertas protenas humanas en hospedadores adecuados
podemos obtener para su fabricacin comercial muchas
protenas de inters como las hormonas (insulina,
hormona del crecimiento) y protenas de la sangre
(eritropoyetina, factores de coagulacin).

Un ejemplo tpico es la
produccin de insulina que
se obtiene a partir de la
levadura
Sacharomyces
cerevisae,
o Escherichia
coli en las cuales se clona el
gen de la insulina humana.
La insulina es una protena
que permite que las clulas
asimilen los glcidos que
circulan por la sangre tras
ingerir alimento

Obtencin de vacunas
El mayor xito se ha conseguido con vacunas
vricas, como la vacuna de la hepatitis B, que se
obtienen por ingeniera gentica. En general la
mayora de los factores antignicos son protenas y
por ello se procede a clonar el gen de la protena
correspondiente.
Estas vacunas consisten en una o varias protenas,
ya que nunca se emplea el microorganismo
completo; de este modo se elimina el riesgo de
contraer enfermedades por la vacunacin..

En agricultura y ganadera
Para la mejora (no de forma tradicional) de plantas y
animales

Mediante la transferencia de genes tiles se han

conseguido plantas modificadas genticamente,
como maz resistente a algunas plagas, soja que
produce cidos grasos de inters industrial o
plantas de tomate que retrasan la maduracin del
fruto.
Los vectores ms utilizados para la introduccin de
los genes son las bombas gnicas y una bacteria
del suelo llamada Agrobacterium tumefaciens.

INDUSTRIA ALIMENTARIA
Para la mejora de procesos biotecnolgicos de elaboracin
de alimentos (pan, vino, cerveza, yogur, etc.) y para la
creacin de alimentos nuevos.

PRINCIPALES
APLICACIONES DE LA
BIOTECNOLOGA

Biotecnologas
aplicadas al
sector agrcola y
ganadero

Biotecnologa de
los alimentos

Biotecnologa
s aplicadas
ala mejora
del medio
ambiente
Biotecnologas
aplicadas a la
mejora de la
salud.

BIOTECNOLOGAS APLICADAS AL
SECTOR AGRCOLA Y GANADERO
1. Sector agrcola
Las nuevas tcnicas de ingeniera gentica
han abierto amplias expectativas tanto en la
potenciacin de caractersticas deseables
como en la creacin de variedades y especies
nuevas, superando al tradicional sistema de
seleccin. Estos avances se han producido
fundamentalmente en dos sentidos:

1. Aumento del rendimiento de los cultivos: a partir de cultivos de clulas

vegetales se pueden crear clones de plantas genticamente idnticas en las
que se han introducido genes con alguna resistencia deseada. Tambin se
pueden clonar plantas ya resistentes o con mayor capacidad productiva.
o Resistencia a heladas
o Resistencia a la sequa
o Aumento de la produccin

2. Resistencia a herbicidas
3. Resistencia a plagas por hongos, virus, bacterias o
artrpodos. En este ltimo caso se han creado, a partir de genes
transferidos por la bacteria Bacillus thuringiensis, variedades de
tomate, patata, algodn y trigo que fabrican molculas txicas para
diversas especies de gusanos, mosquitos, escarabajos etc.

2. Sector ganadero
Con las tcnicas de ingeniera gentica se busca evitar ciertas patologas y
aumentar la produccin de carne o leche sin necesidad de utilizar
antibiticos u hormonas.
En cuanto al aumento de la produccin los mayores xitos se han obtenido
en acuicultura, donde se ha conseguido que especies como el salmn, lubina
o carpa tengan un crecimiento rpido ya que incorporan la hormona del
crecimiento de otras especies.

BIOTECNOLOGAS APLICADAS
A LA MEJORA DEL MEDIO
AMBIENTE.
Se pueden utilizar diversos microorganismos para
afrontar problemas de tratamiento y control de la
contaminacin qumica de distintos ecosistemas. La
ingeniera
gentica
permite
combinar
las
caractersticas de estos microorganismos para
aumentar
su
eficacia
o
generar
microbios
recombinantes con nuevas caractersticas.
Aunque muchos microorganismos diferentes juegan
un papel esencial en los equilibrios ambientales, la
mayora de las aplicaciones biotecnolgicas actuales
se realizan con ciertos tipos de bacterias.

Eliminacin
de metales
pesados.
Tratamiento
de la
contaminaci
n producida
por
herbicidas,
pesticidas e
insecticidas.
Depuracin
de aguas
residuales.

Eliminacin
de mareas
negras.

Obtencin de
energa no
contaminant
e.

Tratamiento
de residuos
urbanos e
industriales

Tratamiento
de diferentes
tipos de
contaminaci
n asociados
a la industria
del petrleo

APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGA
A LA MEJORA DEL MEDIO AMBIENTE

CONTROL DE MAREAS
NEGRAS
Se llama marea negra al vertido masivo de petrleo debido a un
accidente durante el transporte del petrleo en grandes barcos.
Es posible utilizar bacterias que digieren los hidrocarburos que
forman el petrleo y los transforman en sustancias qumicas nada o
menos contaminantes. Aunque generalmente cada tipo de bacteria
utiliza una clase de hidrocarburo, se intenta combinar las
caractersticas de varias bacterias para conseguir una bacteria
recombinante capaz de transformar muchos hidrocarburos
diferentes.

BIOTECNOLOGAS APLICADAS A
LA MEJORA DE LA SALUD.
Prevencin de enfermedades hereditarias.
Terapia gnica mediante la insercin de genes correctos en clulas del
organismo con defectos genticos, o genes que inducen la muerte celular
en clulas tumorales.
Produccin de vacunas, introduciendo genes codificantes de pptidos
vricos en bacterias para fabricarlos masivamente.
Obtencin de anticuerpos monoclonales e interferones por formacin de
clones de clulas procedentes de la fusin de linfocitos B especficos para
un antgeno y clulas tumorales que proporcionan la capacidad de
replicacin indefinida.
Produccin de
crecimiento).

hormonas

(por

ejemplo

insulina

hormona

Produccin de antibiticos y otros productos farmacuticos.

del

ANTIBITICOS
La palabra antibitico designa a aquellas sustancias que, producidas
determinados microorganismos, pueden acabar con la vida de otros.

por

oEn 1929, Alexander Fleming descubri estas sustancias.

oEstaba trabajando con Staphylococcus aureus y su cultivo se contamin con un
hongo del gnero Penicillium, de forma que las colonias rodeadas por ste moran.
oFleming supuso que el hongo produca alguna sustancia antibacteriana, por lo que
hizo un filtrado, descubriendo as, la penicilina.
oDesde 1945 se han aislado cientos de antibiticos producidos por hongos del gnero
Penicillium y bacterias de los gneros Bacillus y Streptomyces.
El gran problema de la actualidad es que han comenzado a desarrollarse a un ritmo alarmante
cepas de patgenos resistentes a antibiticos e, incluso, cepas multirresistentes a
varios antibiticos simultneamente, por lo que hay que encontrar otros nuevos, o
modificar los existentes para que recobren su eficacia, lo que constituye el gran reto
de la biotecnologa.

HORMONAS
Las personas que sufren diabetes mellitus deben inyectarse insulina varias veces al da.
Hasta 1983 la insulina que utilizaban las personas diabticas era insulina de cerdo
purificada (diferente de la humana). Desde esa fecha se utiliza insulina obtenida por
ingeniera gentica: se ha introducido el gen de la insulina humana en la bacteria
Escherichia coli, que la produce en cantidades masivas y con las mismas caractersticas.
La insulina es la primera protena fabricada por ingeniera gentica y comercializada.
Tambin por ingeniera gentica se obtiene la hormona del crecimiento.
Otras hormonas como la testosterona y progesterona, hormonas sexuales masculina y
femenina, utilizada sta ltima en la fabricacin de frmacos anticonceptivos se
obtienen de la fermentacin de ciertas levaduras.

BIOTECNOLOGA DE LOS
ALIMENTOS.
Pa
n

Snt
esis
de
ami
noc
idos
que
se
utiliz
an
com
o
aditi
vos
alim

Prod
ucci
n
de
prot
ena
s
para
pien
sos
de
ani
mal
es
dom
stic
os.

Der
iva
dos
lct
eos
Sntesi
s de
vitami
nas
que se
aade
n a los
alimen
tos o
en
compu
estos
farmac
utico
s.

Vin
o,
vin
agr
e,
cer
ve
za

FABRICACIN DE CERVEZA
Es un proceso que se conoce desde antiguo, ya que, al parecer, los
babilonios fueron los primeros en elaborar la cerveza.
Se basa en la fermentacin alcohlica que realizan las levaduras del
gnero Saccharomyces. La cerveza se obtiene por fermentacin de la
cebada realizada por las levaduras S. cerevisae o S. carlsbergensis. Los
granos de cebada se ponen a remojo, de forma que germinan y
generan amilasas suficientes que hidrolizan el almidn. Despus se
secan, lo que constituye la malta, la cual se puede almacenar hasta su
uso. Con la malta se obtiene el mosto de cerveza, al cual se adiciona el
lpulo, encargado de dar a la cerveza el sabor amargo y de conservarla
del crecimiento bacteriano. Es entonces cuando se aade el inculo,
que fermenta durante cinco a diez das a temperatura y pH adecuados.

MICROORGANISMOS USADOS
EN ALIMENTOS

BIOTECNOLOGA APLICADA A
LA AGRICULTURA

MICROORGANISMOS Y
PRODUCTOS

M.B.C. JANETH TOSTADO QUEZADA

EMPLEO DE MICROORGANISMOS COMO

UNIDADES DE PRODUCCIN, DE CONTROL
O DE DIAGNOSTICO.

VENTAJAS DE LOS MICROORGANISMOS COMO

UNIDADES DE PRODUCCIN

Rpido crecimiento debido a la favorable relacin rea/ volumen .

Diversidad metablica.
Estabilidad gentica.
Crecimiento en gran escala y separacin fcil de productos y sustratos.
Adaptabilidad a distintos ambientes y condiciones de crecimiento .
Facilidad de manipulacin gentica.
Habilidad para sintetizar enantimeros especficos.

Existen en la naturaleza unos centenares de especies

de microorganismos(bacterias, levaduras, mohos,
algas unicelulares) que producen sustancias que
presentan algn inters para la especie humana. Los
productos que tienen un inters comercial se pueden
agrupar en :

Productores de
metabolitos
primarios y
secundarios

Unidades de
Biotransformaci
on

Productos de
biomasa y sus
contribuyentes

Micoorganismos

Uso

Productos

HONGOS
Ashbya gossypii
Riboflavina
Aspergillus terreus
Cephalosporium spp
Eremothecium asbyii
Penicilium notatum
Taxomyces andreanae
Gibberella fujikuroi
Aspergillus nger
Saccaromyces
cerevisiae

Riboflavina
Lovastatina
Cefalosporina
Riboflavina
B2
Penicilina
Taxol
Fitorregulador
es
cido ctrico
Etanol

Vitamina. Farmacutico
Inhibidor enzimtico. Farmacutico
Antibitico. Farmacutico
Vitamina. Farmacutico
Antibitico. Farmacutico
Anticancergeno. Farmacutico
Agricultura
Industria alimenticia y
farmacutica
Industrial

Metabolitos primarios, son molculas de bajo peso

molecular que intervienen, bien como productos
finales o intermediarios, en las distintas rutas
anablicas y catablicas.
aminocidos, vitaminas, nucleotidos,
alcoholes, cidos orgnicos

METABOLITOS
PRIMARIOS

1) Son necesarios para el crecimiento del

microorganismo que los produce.
2) Se producen como productos nicos
3) Son producidos por todos los microorganismos (son
universales).
4) La produccin no puede perderse fcilmente por
mutacin espontnea

Metabolitos secundarios se producen

cuando la velocidad de crecimiento es baja,
no tienen pues una funcin esencial
en el crecimiento
antibiticos, toxinas, alcaloides,
pigmentos
1) Generalmente se producen como
mezclas de productos muy relacionados
qumicamente entre s.
2) La produccin puede perderse fcilmente
por mutacin espontnea
3) Cada uno de estos productos es
producido por un grupo muy reducido de
organismos

ETANOL
Producido por :
1- Levaduras
* Saccharomyces (a partir de hexosas)
* Kluyveromyces fragilis (a partir de lactosa)
* Cndida o Pichia (a partir de pentosas)
2- Bacterias* Clostridium (a partir de celulosa) (termfilos, anaerobios)
* Zymomonas
3- RecombinantesE.coli recombinante: Introduccin de los genes Alcohol deshidrogenasa
y piruvato decarboxilasa de Zymomonas.

En la industria alimentaria el
90%
1) Como aditivos de piensos y de
alimentos
2) Potenciadores del sabor
3) Antioxidantes.
4) Edulcorantes
En la industria qumica el 10%
1) Manufactura de polmeros
2) Manufactura de pieles sintticas
3) Fabricacin de cosmticos
4) En la fabricacin de herbicidas

PRODUCCIN DE
AMINOCIDOS
Extraccin de aa de hidrolizados de protenas, (Lcistena, L-leucina, L-tirosina).
Por snteses qumica. D, L-alanina, D, L-metionina, D, Ltriptfano , D, L-glicina.

VITAMINAS
Vitamina B12Microorganismos productores: Bacterias de los generos
Propionibacterium shermani y Pseudomonas denitrificans.
Produccin: 150 mg/ L.
BiotinaMicroorganismo productor: cepas modificadas (mutantes)
de Serratia marcescens.
Produccin: 150-600 mg/ L.
Vitamina B2 (Riboflavina)Microorganismos productores: -hongos (Eremothecium
ashby y Ashbya gossypii), Candida sp, Bacillus subtilis
recombinante
Produccin: 20 -30 g/ L

ANTIBIOTICOS
Desde

1940 se han introducido una gran variedad de molculas

con actividad antibitico para su uso en medicina y agricultura.
En

el mercado hay 160 antibiticos en uso por un valor de

23,000 millones de U$S.
Se

han descripto 6,000 antibiticos de los cuales 4,000 se han

aislado de Actinomycetes, y se describen alrededor de 500
antibiticos nuevos por ao. Una sola cepa de Streptomyces
hygroscopicus produce aproximadamente 200 antibiticos.

INHIBIDORES ENZIMATICOS
Ej.

Estatinas y acido zaragozico

Inhibidores

competitivos de
la HMGCo-A reductasa y
escualeno ciclasa, por lo cual se emplean como anticolesterolemicos.

Microorganismo productor: Aspergillus terreus (hongos)

Ej.

Acido clavulanico (inhibe penicilasas)

Ej.

Acarbosa: Inhibidor de la glucosidasa intestinal.

Disminuye la hiperglucemia y tambin la sntesis de
triglicrido en los tejidos adiposos, el hgado y las paredes
intestinales de individuos obesos, diabticos o con trastornos
de la lipemia.
Microorganismo

productor: Actinoplanes (actinomycetes)

BIOPESTICIDAS
Se aislaron en un principio como agentes antibiticos y luego, en las sucesivas
investigaciones, surgieron nuevos usos o usos mas especficos.
Fungicidas:

kasugamycin, polyoxins, anfotericina

Insecticidas:
Herbicidas:

toxina de Bacillus thuringiensis

bialaphos

antihelminticos: avermectinas

Reguladores

del crecimiento de plantas: giberellinas

Inmunosupresores:
Agentes

ciclosporinas

antitumorales: mitomycin, bleomycin

Antivirales: inhibidores de la transcriptasa reversa y de la

proteasa de HIV (ritonavir, nevirapine, etc

EMPLEO DE LOS MICROORGANISMOS

COMO VECTORES DE GENES
HETEROLOGOS
Los principales huespedes que se emplean para la produccion de
proteinas recombinantes son E. coli, B. subtilis, S. cerevisiae,
Pichia pastoris, Hansenula polimorpha y Aspergillus niger.

Quimosina recombinante (Clonado del gen de la quimosina bovina en

una levadura). Se emplea para la coagulacion de la caseina, en la
obtencion de quesos.
Insulina humana (en E.coli) humulin
Hormona de crecimiento humana (en E.coli y levaduras)
Vacuna Hepatitis (en levaduras )
Farmacos (interferon 2 alfa)

USO DE MICROORGANISMOS EN
BIOTRANSFORMACIONES
Reacciones Qumicas realizadas por microorganismos:
Oxidaciones:
Reducciones,
Reacciones hidroliticas,
Condensaciones

 OXIDACIONES

Oxidacin de sulfuros, azufre

elemental
y
fierro
ferroso.

La tcnica de oxidacin bacteriana

empleada para el tratamiento de
minerales sulfurados aurferos se
fundamenta en laaccinefectiva
de
la
bacteria
Thiobacillus
Ferrooxidans para oxidar especies
reducidas de azufre a sulfato, y
para oxidar el in ferroso a in
frrico.

 REDUCCIONES
La reduccin del sulfato es un proceso energtico relativamente
pobre
usado
por
muchas
bacterias
Gram
negativas
(Proteobacterias gamma) y por organismos Gram positivos
relacionados con Desulfotomaculum o con la archaea
Archaeoglobus.

BIOCATALIZADORES
Los catalizadores son compuestos qumicos de distinta
naturaleza, que facilitan y aceleran las reacciones qumicas,
porque disminuyen la cantidad de energa de activacin que se
necesita para que estas ocurran.

Enzim
as
Los catalizadores que
actan en los seres vivos
se denominan
biocatalizadores

Vitaminas Hormonas

Desarrollos
recientes
de
biocatalizadores
y
microrganismos, a traves de las metodologias clasicas de
aislamiento, con potencial en la industria de los alimentos

INGENIERA METABLICA: RUTA ARTIFICIAL PARA LA

OBTENCIN DE HIDROCORTISONA EN LEVADURAS
Las
enzimas
en
rojo
provienen de organismos
humanos,
bovinos
y
vegetales y sus genes
fueron diseados antes de
su introduccin en las
clulas de la levadura.
Los que estn en azul son
las enzimas de la levadura
original cuyos genes fueron
modificados para cambiar
sus niveles de expresin.
La va verde es la va
principal para la produccin
de hidrocortisona, el rojo
corresponde a reacciones
secundarias controladas y
de color amarillo la ruta de
biosntesis secundaria que
coexiste con el verde, el
ms importante.

PRINCIPALES ETAPAS DE UN
PROCESO DE PRODUCCION
Bsqueda y seleccin de microorganismos
(Screening)

Organismos
mesfilos:

Presentan temperaturas
ptimas a los 25-40C y
mximas entre 35 y 47C.
Lactococcus lactis y L.
cremoris para elaborar queso
chedar, kumis y cottage.

Organismos
extremfilos:
aquellos que son capaces
de vivir, desarrollarse y
prosperar bajo condiciones
extremas.
Extremozimas usadas en
la produccin de
edulcorantes y "ablandado"
de pantalones vaqueros

Si bien los microorganismos son buenos

productores de una gran variedad de
compuestos, los producen en baja cantidad, por
lo que se requiere :

Aumentar los rendimientos mediante:

Obtencin de mutantes

Empleo de tecnologa de DNA recombinante

Diseo y seleccin de medios de cultivo

Diseo y seleccin de las condiciones y sistemas de cultivo

Tcnicas de mutagnesis:
proceso por el que se genera una
mutacin, sta se define como un cambio hereditario en el material
genetico clonodo o no.

Recombinacin gentica: es un proceso que lleva a la obtencin de

un nuevo genotipo a travs del intercambio de material gentico entre
secuencias homlogas de DNA de dos orgenes diferentes.

OBTENCIN
DE
Fusin de protoplastos: tcnica debiotecnologaen la cual se
produce
la fusin de lasmembranasde dos o msclulasdando lugar
MUTANTES:
a unhbrido somtico.

Empleo de tecnologa de DNA recombinante:

para aumento del dosaje gentico de enzimas claves

utilizacin de nuevos sustratos

Diseo y seleccin de medios de cultivo

que maximicen la produccin,

disminuyan los costos o faciliten la recuperacin de

productos.

Diseo y seleccin de las condiciones y sistemas de

cultivo mas convenientes

PRINCIPALES PRODUCTOS
PRODUCTO

ORGANISMO

PRODUCCION
(Ton/ao)

Solventes
Etanol
Acetona/butanol

Saccharomyces cerevisiae
Clostridium acetobutylicum

20 millones
2000

Biomasa
Starters para alimentos
Proteina unicelular

Levaduras y bacterias lacticas

Candida utilis

500,000
50,000

Acidos organicos
Acido citrico
Acido gluconico
Acido lactico

Aspergillus niger
Aspergillus niger
Lactobacillus delbrueckii

250,000
50,000
50,000

Aminoacidos
Acido glutamico
Lisina
Fenilalanina
arginina

Corynebacterium glutamicum
Brevibacterium flavum
Corynebacterium glutamicum
Brevibacterium flavum

300,000
30,000
2000
1000

PRODUCTO

ORGANISMO

PRODUCCION
(Ton/ao)

Enzimas
Proteasas
Alfa-Amilasas
Glucoa-amilasa
Glucosa isomerasa
Pectinasa
Renina
otras

Bacillus spp
Bacillus amyloliquefasciens
Aspergillus niger
Bacillus coagulans
Aspergillus niger
Mucor o levaduras recombinantes

600
500
500
500
100
50
50

Propionibacterium shermanii
Eremothecium ashbyii

10

Corynebacterium diphteriae
Clostridium tetani
Bordetella pertussis
Virus atenuado crecido en rion
de mono o celulas diploides
humanas
Idem anterior
Antigenos de superficie
expresados en levadura

< 0.1

Claviceps paspali

Vitaminas
B12
Riboflavina
Vacunas
Difteria
Tetanos
Pertussis
Polio

Rubola
Hepatitis B

Alcaloides del ergot

PRODUCTO

ORGANISMO

PRODUCCION
(Ton/ao)

Pigmentos
Shikoninas
Beta-carotenos

Lithospermum (plantas)
Levaduras

< 0.1

E. coli recombinante
E. coli recombinante o celulas de
mamfero recombinante
celulas de mamfero
recombinante
celulas de mamfero
recombinante
E. coli recombinante

< 0.1

Penicillum chrysogenum
Cephalosporium acremonium
Streptomyces aureofaciens
Streptomyces erythreus
Bacillus brevis
Streptomyces griseus
Penicillum griseofulvum

80,000
15,000
15,000
10,000
2,000
1,000

Bacillus thuringiensis

< 0.1

Celulas de hibridoma

< 0..01

Proteinas de uso
teraputico
Insulina
Hormona de crecimiento
Eritropoyetina
FactorVIII-C
Activador del plasminogeno
Interferon alfa2
Antibioticos
Penicilinas
Cefalosporinas
Tetraciclinas
Macrolidos (eritromicina)
Polipeptidicos (gramicidina)
Aminoglicosidos
(estreptomicina)
Aromticos (griseofulvina)
Insecticidas
Esporas bacterianas
Anticuerpos
monoclonales

ALIMENTACIN

Bebidas

Lcteos starters para las industrias

Pptidos saborizantes

Enzimas y productos fermentados

Alimentacin animal (SCP)

Suplementos alimenticios (Aa, vitaminas, ac. Nucleicos,

polimeros y azucares)

ENERGA

Obtencin de
metano

Biomasa y etanol
a partir de
residuos agrcolas.

Produccin de
solventes
(acetona, butanol,
actico)

OBTENCION DE METANO

EJEMPLOS:

OBTENCION DE BIOMASA