Endah Puspitasari, S.Farm., M.Sc., Apt.

TANIN

Pendahulu
Tanin:an
senyawa fenolik larut air dengan

BM 500-3000, memberikan reaksi umum

senyawa fenol, dan memiliki sifat-sifat
khusus seperti presipitasi alkaloid, gelatin,
dan protein-protein lain (Bate-Smith)
Haslam mengganti polifenol dengan
tanin, BM > 20.000 juga telah diketahui,
dan tanin tidak hanya membentuk
kompleks dengan alkaloid dan protein,
tapi juga dengan polisakarida

Tannins: Microscopy

 Banyak terdistribusi dalam

kingdom plantae daun,
buah, kulit batang, atau
batang
Tanin ~ senyawa kompleks
biasanya campuran polifenol
tidak mengkristal (tannin
extracts)
Tanin merupakan polimerasi
polifenol sederhana
Kromatografi identifikasi
polifenol sederhana dalam
ekstrak tanin

Manfaa
t Pengkhelat
ion logam
Presipitasi
protein
Antioksidan
biologis

True Tannins Vs Pseudo-Tannins

True tannins: Molecular
weights of 1000-5000.
Pseudo-tannins: Gallic
acid, catechins and
chlorogenic acid are
similar phenolic
compounds: have a
low molecular weight.

Classification of Tannins

Classification of Tannins
In higher plants, two groups of tannins are
generally distinguished, which differ by
their structure, as well as their biogenic
origin hydrolysable tannins and
condensed tannins.
Hydrolysable Tannins:
Tannins Ellagitannins
Gallotannins

Tannins - Properties
Water-soluble
Also soluble in dilute alkali, alcohol,
glycerol and acetone
Slightly soluble in other organic solvents.
Solutions precipitate heavy metals,
alkaloids, glycosides and gelatin.

Tannins - Properties
If a dilute ferric chloride solution is added to an
aqueous extract of hamamelis leaves
(containing both types of tannins), a blue colour
is produced which then changes to orangegreen as more ferric chloride is added.

Free gallic acid gives an orange colour with

potassium iodate.

Tannin Properties: Hydrolysable or

Condensed?
With ferric salts,
salts gallo-tannins and ellagi-tannins give blue-black
precipitates.
Condensed tannins give brown-green precipitates.
Condensed tannins turn red with vanillin and HCL.
HCL
Gallo-tannins give a pink colour with potassium iodate.
Ellagitannins react (are coloured) with nitrous acid in the presence of
acetic acid.
acid Colour reaction: pink purple blue.
blue
TLC is used to analyze extracts (visualized under UV light and with
the reagents mentioned above)
HPLC can also be used.

Tanin
terhidrolisiskan

Merupakan ikatan ester

Hidrolisis asam fenolat + gula
Terdapat pada Dicotyledonae
Contoh:
* galotanin = ester asam galat + glukosa
* elagitanin = ester asam heksahidroksi
difenat + glukosa

galotanin

elagitanin

Identifikasi tanin
terhidrolisiskan
Deteksi pendahuluan:
Ekstrak eter/etil asetat
Hidrolisis asam
Asam galat/asam elagat

KLT dua arah:

KLT

fase diam: silika

fase gerak: pengembang 1: benzena-asam asetat-air (6:7:3)
pengembang 2: asam asetat 15 % dalam air
deteksi: uv: bercak gelap
dengan pereaksi Folin setelah diuapi amonia: biru

 Ekstraksi skala besar: aseton-air

Komponen ester ekstrak kasar dipantau dengan kromatografi
kertas dua arah
fase gerak 1: BAW (14:1:5)
fase gerak 2: asam asetat 6 %

HPLC

fase diam: kolom RP-18 Li Chrosorb 10 m

fase gerak: gradien konsentrasi air (mengandung 0,05 % H 3PO4) +
asetonitril
deteksi: penyemprot fenol umum
tanin terhidrolisiskan dapat dibedakan dari tanin terkondensasi berdasarkan:
* Rf
* bercak fluorescensi ungu, diperkuat dengan uap NH 3
* semprot larutan jenuh KIO3 warna merah jambu
tanin terkondensasi:
* dengan asam nitrit 10 % sedingin es yang ditambahi asam asetat
warna merah menjadi biru indigo

Tanin terkondensasi
Disebut juga golongan proantosianidin
Tanin terkondensasi

Asam
panas

Monomer antosianidin

Kondensasi > dua molekul flavan-3-ol

Tanin terkondensasi

Hydrolytic
agents

phlobaphenes

Terdapat pada Spermatophyta,

Gymnospermae, dan Angiospermae
Contoh:
* protosianidin = oligomer katekin + flavan3,4-diol

Tanin terkondensasi

Biosintesis protosianidin

Identifikasi tanin
terkondensasi

Deteksi langsung dalam jaringan tumbuhan hijau:

Jaringan tumbuhan hijau
HCl mendidih, 30
Warna merah
Ekstraksi amil/butil alkohol
KLT

Telaah lebih terinci:

Jaringan segar
Ekstraksi metanol 50-80 %
Ekstrak metanol
KLT dua arah

 HPLC
fase diam: kolom Li Chrosorb RP-8
fase gerak: campuran air-metanol
ekstrak kasar harus dapat mengendapkan albumin
serum sapi jika ditambahkan ke dalam larutan 5 % dalam
air

Proantosianidin dapat dipisahkan dengan skala

preparatif dengan kromatografi Sephadex
Pemurnian pendahuluan: Sephadex G-50, fase gerak
aseton-air (1:1) yang mengandung asam askorbat 0,1 %
Pemurnian II: kolom Sephadex LH20 dalam metanol-air
(1:1), proantosianidin diperoleh kembali dengan mengelusi
air-aseton (7:3)
fraksinasi BM dengan G-50 atau G-100

Tannin Extraction
Tannins are extracted using water and
acetone.
acetone
Optimal yields are obtained from fresh
tissues or freeze-dried tissues.
Optimal yields are not obtained from dried
tissues (tannins are irreversibly combined
with other polymers)

 After eliminating the acetone (distillation),

the pigments and lipids are removed from
the aqueous solution by a solvent
extraction.
Ethyl acetate extraction of the aqueous
solution separates the dimeric
proanthrocyanidins and most gallotannins.
gallotannins
Polymeric proanthrocyanidins and high
molecular weight gallotannins remain in
the aqueous phase.

 To obtain pure
compounds, the
appropriate
chromatographic
techniques are used
(most often one of the
gel filtrations)
Followed by reversephase
chromatography (in
water and alcohol, or
water, alcohol and
acetone mixures)

Tumbuhan segar dikeringkan

dengan freeze dry

Timbang dan serbuk dalam

keadaan dingin dengan mortir

Tambahkan aseton 70 %

Sonifikasi 30 40C

Sentrifuge dingin

Simpan supernatan
pada suhu 40C

Ekstraksi
tanin

Identifikasi tanin
total
Jaringan kering

Diserbuk halus
Ekstraksi 3X dengan metanol-air (1:1)
(0,1 ml pelarut/mg)
Rotavapor
Ekstrak kental

Uji berdasar jenis tanin

1. Setara asam tanat (SAT)

1 ml ekstrak + 1 ml darah segar sentrifuge absorbansi
= 578 nm
baku: asam tanat

2. Kadar proantosianidin
ekstrak + n-butanol + HCl pekat 5 % panaskan absorbansi
= 545 nm (sianidin) dan = 560 nm (delfinidin)

3. Kadar elagitanin
0,5 ml ekstrak + 2,0 ml HNO2 0,1 M inkubasi 15 dalam
lingkungan N2 warna biru absorbansi = 600 nm

4. Kadar galotanin
0,5 ml ekstrak + 1,5 ml KIO3 12 % dalam metanol 33 % pada
150C absorbansi = 550 nm

1.

2.

3.

Pustaka

Robbers, J.E., Speedie, M.K.,

Tyler, V.E., 1996.
Pharmacognosy and
Pharmacobiotechnology,
William & Wilkins, Pensylvania
Harborne, J.B., 1996. Metode
Fitokimia Penuntun Cara
Modern Menganalisis
Tumbuhan, Penerbit ITB,
Bandung
Hagermae, A.E., 2002. Tannin
Chemistry,
http://www.users.muohio.edu/
hagermae/tannin.pdf

Thank you for

your attention
Good day