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TEMA 5.

EXPRESIN EN PLANTAS

Manipulacin de cultivos

Totipotencialidad de las clulas vegetales


Tipos de explantos
Cultivo in vitro a partir de callos
Cultivo in vitro a partir de protoplastos
Ventajas e inconvenientes

TEMA 5. EXPRESIN EN PLANTAS


Totipotencialidad
Es la capacidad de una clula vegetal de dar lugar al desarrollo
de una planta completa Las clulas totipotentes son clulas
somticas que han retenido su capacidad de dividirse y
diferenciarse en una planta madura si se coloca en el medio
adecuado.

TEMA 5. EXPRESIN EN PLANTAS

Tipos de cultivos:
Cultivos diferenciados
Races, cotiledn, tallos, hojas,
hipoctilo

TEMA 5. EXPRESIN EN PLANTAS

Tipos de cultivos:
Cultivos diferenciados
Races, cotiledn, tallos, hojas,
hipoctilo
Protoplastos

Cultivo de tejidos Factores comunes


Composicin general de medios de cultivo:
Fuente de Carbono (azcares)
Macronutrientes (N, K, etc)
Micronutrientes (Fe, Cl, etc)
Vitaminas
Agente gelificante (para medios slidos)
Reguladores de crecimiento (hormonas vegetales)
Otros compuestos (ej: agentes quelantes)
Organognesis
Callos citoquininas/auxinas.
Yemas auxina<citoquininas
Raices auxina>citoquininas

TEMA 5. EXPRESIN EN PLANTAS

Transformacin de plantas

Inconvenientes de la mejora gentica clsica


Aspectos generales
Bombardeo con pistola gnica
Fusin de protoplastos
Microinyeccin de ADN en ncleos
Transformacin con Agrobacterium tumefaciens

TEMA 5. EXPRESIN EN PLANTAS

Inconvenientes de la mejora gentica clsica

GENES MARCADORES
Actividad enzimtica
Cloranfenicol acetiltransferasa

Resitencia
Cloranfenicol

Neomicina fosfotransferasa

Kanamicina

Higromicina fosfotransferasa

Higromicina

EPSP sintasa
Streptomicina fosfotransferasa
Protena
-D-glucuronidasa

Glifosato
Estreptomicina
Deteccin
cido 5-bromo-4cloro-3-indolil betaD-glucuronico

GFP Protena fluorescente verde

Sin reactivo

Luciferasa

Sin reactivo

PROMOTORES

EXPRESIN

Constitutiva

Especficos de
tejidos

Inducibles

DENOMINACIN

ORIGEN

Nos (nopalina sintetasa)

Agrobacterium

35 S

Virus del mosaico de la coliflor

Ubi

Ubiquitina de maiz

Act 1

Ubiquitina de arroz

TA 29

Tapete de la antera de tabaco

Faseolina

Cotiledones

TobRB 7

Raz de tabaco

Patatina

Tubrculo de patata

Gluteina

Endosperma de trigo

Subunidad pequea de Rubisco. Inducible por luz


Alcohol deshidrogenasa-1 inducible 8
por anaerobiosis
Protena shock trmico inducible por calor

Bombardeo con pistola gnica


VENTAJAS
No requiere construcciones especiales
Monocotiledneas y Dicotiledneas
Mltiples integraciones
DESVENTAJAS
Baja frecuencia de transformacin
Transformacin no estable
Dao celular
Poca repetitividad

Transformacin de protoplastos

VENTAJAS
Monocotiledoneas y
Dicotiledoneas
DESVENTAJAS
Regeneracin lenta

Microinyeccin de ADN en ncleos


VENTAJAS
Transformacin precisa
No requiere construcciones
DESVENTAJAS
No se puede hacer a gran escala
Costoso
Personal 9cualificado

TEMA 5. EXPRESIN EN PLANTAS

Transformacin de plantas

Aspectos generales
Bombardeo con pistola gnica
Electroporacin de protoplastos
Microinyeccin de ADN en ncleos
Transformacin con Agrobacterium tumefaciens
Agrobacterium tumefaciens. Biologa
Sistemas de transformacin
Protocolo estndar

10

TEMA 5. EXPRESIN EN PLANTAS

Agrobacterium tumefaciens
Agrobacterium rizhogenes
Agrobacterium, Rhizobium,
Sinorhizobium, Candidatus
Rhizobiaceae
Rhizobiales
Proteobacteria alfa
Proteobacteria
Bacteria
11

TEMA 5. EXPRESIN EN PLANTAS

Agrobacterium rizhogenes

Raz en cabellera provocada


por Agrobacterium
rizhogenes

12

TEMA 5. EXPRESIN EN PLANTAS

Agrobacterium
Agrobacteriumtumefaciens
rizhogenes

Tumor de tallo agalla de


corona provocado por
Agrobacterium tumefaciens

13

HITOS EN LA HISTORIA DE Agrobacterium tumefaciens


1953 Primer artculo sobre la enfermedad de agalla de corona
1974 Tejidos de los tumores provocados, pueden proliferar indefinidamente en
medios sin aporte hormonal. Se propone por primera vez transformar clulas
con Agrobacterium
1971 A. tumefaciens pierde la virulencia a 37 C. La puede recuperar por
transferencia
1974 La virulencia depende de un plsmido inductor de tumores (Ti)
1977 La regin El T-DNA del plsmido Ti est presente en las clulas tumorales
de las agallas
1983 Primera transformacin con un gen recombinante usando Agrobacterium
tumefaciens
1984 Identificacin de los oncogenes que sobreproducen auxina y citoquinina
1985 Identificacin de virA/virG dos componentes del sistema de identificacin
1986- hasta hoy Elucidacin del sistema de transferencia T-DNA y Secuenciacin
del genoma de Agrobacterium tumefaciens C58
14

Las clulas transformadas


se dividen rpidamente
El T-DNA es
integrado en los
cromosomas
vegetales y la
clulas vegetal es
transformada

El T-DNA deja
la bacteria y
entra en clulas
vegetales
heridas

Las bacterias se
multiplican y dispersan
intercelularmente

La hiperplasia e
hipertrofia llevan
a la formacin de
la agalla

Agalla en tallo
y races, planta
severamente
infectada

Bacteria entrando al
tallo o la raz a travs
de las heridas

Planta
infectada

Clula
vegetal

Agalla vieja con varios


centros nuevos de
actividad

Planta
saludable

La bacteria se adhiere a
las clulas vegetales
heridas
Plsmido Ti

Bacterias de la superficie de la
agalla se mueven al suelo

Cromosoma

15

Procesos celulares

Mecanismos Moleculares

A: Reconocimiento clula-clula

Agrobacterium se une a la
clula hospedadora

B: Procesamiento del T-DNA

C: Empaquetamiento del DNA

D: Transporte intercelular

E: Importacin al ncleo

F: Integracin del ADN


expresin de los genes

Reconocimiento y corte de la
hebra de ADN bacteriana
Formacin del complejo T
maduro, compuesto por la
hebra T-DNA VirD2 y VirE2
Formacin del pilus para el
transporte del complejo T
dentro de la clula hospedadora

Importacin de la hebra T al
ncleo de la clula
Integracin de la hebra T la
formacin del tumor
16

Un Cromosoma lineal, un cromosoma circular


Dos plsmidos: pTiC58 y pAtC58

Cromosoma circular

Cromosoma lineal

pTiC58

pATC58

17

Regin
T-DNA
Reconocimiento
VirC
Corte
VirD1, VirD2

s
ore
t
c
du
pro
s
ne
Ge umor
t
de

r
Vi a)
on ci
gi len
Re iru
(v

Ca
de tab
op oli
in sm
as o

Plsmido Ti

18

Regin
T-DNA
Auxinas
Elongacin
Previne envejecimiento
s
ore
t
c
du
pro
s
ne
Ge umor
t
de

Citoquinina
Divisin celular
Crecimiento tumor

r
Vi a)
on ci
gi len
Re iru
(v

Ca
de tab
op oli
in sm
as o

Plsmido Ti

19

Regin
T-DNA

Opinas

s
ore
t
c
du
pro
s
ne
Ge umor
t
de

r
Vi a)
on ci
gi len
Re iru
(v

Ca
de tab
op oli
in sm
as o

Plsmido Ti

20

Regin
T-DNA

s
ore
t
c
du
pro
s
ne
Ge umor
t
de

r
Vi a)
on ci
gi len
Re iru
(v

Ca
de tab
op oli
in sm
as o

Plsmido Ti

21

Regin
T-DNA

s
ore
t
c
du
pro
s
ne
Ge umor
t
de

r
Vi a)
on ci
gi len
Re iru
(v

Ca
de tab
op oli
in sm
as o

Plsmido Ti

22

REGULN
vir
Proteina
Vir

virH

virA

Funcin en Agrobacterium

VirA

Sensor fenlico (2-com.) Kinasa e


inductor de otros genes vir

VirG

Factor de transcripcin, activacin


genes vir

VirB1-11

Sntesis y formacin del pilus-T

Vir D1

Topoisomerasa, ayuda a VirD2 a


reconocer y procesar los bordes del TDNA

VirD2

Endonucleasa especfica de borde TDNA. Protena piloto (lidera hebra T


hacia la planta)

VirE1

Requerida para exportar VirE2 de Agro


(chaperona de VirE2)

VirE2

Formacin del complejo T y proteccin


del ataque de endonucleasas. Se
intercala con lpidos para formar
canales en la membrana de la planta a
travs de los cuales pasa el complejo T

virB

virG virC virD

Se une a la region T-DNA monohebra y


promueve la sintesis eficiente

virE virF

Funcin en la planta

Cromosomales
chvA

Gen de
virulencia A

chvB

Requerido para la
sntesis y
secrecin de glucano

pscA

Requerido para
secrecin de
succinoglicano

Localizacin nuclear de la hebra T;


proteccin del extremo 5;
integracin en el genoma vegetal

Proteccin de la hebra T;
localizacin nuclear de la hebra T,
etc.
Rango de huspedes, interaccin
con protena vegetales
reguladoras del ciclo celular

VirF

VirC

23

Transferencia de plsmido Ti de unas bacterias a otras


Genes traI y traR
Opinas de clulas infectadas

AUMENTO DEL NMERO DE BACTERIAS INFECTIVAS

Biologa de la
bacteria
Agrobacterium
tumefaciens

24

VirA

CLULA VEGETAL

Re
g
Vir ion d
ule
nc e
ia

VirG

25

VirA
VirG

CLULA VEGETAL

G H

H G

Fosforilacin

Regin
de
Virulen
cia

Aceptor de fsforo

Receptor

Receptores
ChvA
ChvB
PscA
Att

26

Azcares

Compuestos fenlicos

pH cido

ChevE

VirA
VirG

CLULA VEGETAL

G H

H G

Fosforilacin

Regin
d
Virulen e
cia

Aceptor de fsforo

Receptor

VirG
(inactiva)

VirG
(activa)
Receptores
ChvA
ChvB
PscA
Att

27

VirA
Constitutiva
Activa VirG

VirA
VirG

CLULA VEGETAL

Una vez fosforilada


Induce regin vir

VirG
(activa)

VirH

Regin
de
Virulen
cia

VirG

Detoxificacin de los
compuestos fenlicos

Receptores
ChvA
ChvA
PscA
Att
P

virH

virA

virB

virG

virC virD virE virF

28

VirC1
Reconocimiento de los
extremos derecho e
izquierdo de la region T

VirA
VirG

Regin
d
Virulen e
cia

CLULA VEGETAL

Regin
T

virH

virA

virB

virG

virC virD virE virF

29

VirC1
Reconocimiento de los
extremos derecho e
izquierdo de la region T
VirD1

VirA
VirG

VirD2

CLULA VEGETAL

Regin
d
Virulen e
cia

VirD1 Probable Helicasa


VirD2 Endonucleasa

Regin
T

LB

virH

Biologa de la
bacteria
Agrobacterium
tumefaciens

RB

virA

virB

virG

virC virD virE virF

30

VirC1
Reconocimiento de los
extremos derecho e
izquierdo de la region T
VirD1

VirA
VirG

VirD2

CLULA VEGETAL

Regin
d
Virulen e
cia

VirD1 Probable Helicasa


VirD2 Endonucleasa

Regin
T

LB

virH

Biologa de la
bacteria
Agrobacterium
tumefaciens

RB

virA

virB

virG

virC virD virE virF

31

VirC1
Reconocimiento de los
extremos derecho e
izquierdo de la region T
VirD1

VirA
VirG

VirD2

CLULA VEGETAL

Regin
d
Virulen e
cia

VirD1 Probable Helicasa


VirD2 Endonucleasa
Dirige transporte
VirE2

Regin
T

VirE2 proteina de unin


a cadenas simples de
ADN

LB

virH

Biologa de la
bacteria
Agrobacterium
tumefaciens

RB

virA

virB

virG

virC virD virE virF

32

VirC1
Reconocimiento de los
extremos derecho e
izquierdo de la region T
VirD1

VirA
VirG

VirD2

CLULA VEGETAL

Regin
d
Virulen e
cia

VirD1 Probable Helicasa


VirD2 Endonucleasa
Dirige transporte
VirE2

Regin
T

VirE2 proteina de unin


a cadenas simples de
ADN

LB

virH

Biologa de la
bacteria
Agrobacterium
tumefaciens

RB

virA

virB

virG

virC virD virE virF

33

VirC1
CLULA VEGETAL

Reconocimiento de los
extremos derecho e
izquierdo de la region T
VirD1

PERIPLASMA

VirD2

PORO DE
TRANSPORTE

VirD4

VirD1 Probable Helicasa


VirD2 Endonucleasa
VirE2

Citoplasma
VirB4 VirB4

VirE2 proteina de unin


a cadenas simples de
ADN
VirB1-11
VirB1 inicia el
ensamblaje
VirB2 estructura del
pilus
VirB poro de transporte

VirB8

VirB11
VirB6 VirB10

VirB2 VirB2

VirB9 VirB7

VirB11

VirB2 VirB5

Pilus
VirB2 VirB5

VirB11
VirB11

VirB6 VirB10

VirB4VirB4

VirD4

VirB1
VirB1

VirB9 VirB7

VirB8

VirB3

VirB2 VirB2
VirB1

Ncleo

VirD4

34

VirD2

CLULA VEGETAL

VirD2 Protena conductora


PORO DE
TRANSPORTE

VirE2

NLS

Ciclofilinas
Chaperonas mantiene la
conformacin de VirD2

AtKApa

VirB6

VirB1
VirB1
VirB8

VirB9 VirB7

VirB2 VirB2

VirB2 VirB5

VirB2 VirB5
VirB6 VirB10

VirB4VirB4

Fosfatasa tipo 2C
Potencia el complejo
VirD2-NLS

VirB4 VirB4

Seales de localizacin
nuclear

VirD4

VirE2 proteina de unin


a cadenas simples de
ADN

VirB7
VirB9

VirB8

VirB3

VirB2 VirB2
VirB1

Facilita el transporte
(cariofelinas)
VIP1, VIP2
Complejo multiproteico
de transporte

35

VirD2

CLULA VEGETAL

VirD2 Protena conductora


PORO DE
TRANSPORTE

VirE2

VirD4

VirE2 proteina de unin


a cadenas simples de
ADN
NLS

VirB4 VirB4

Seales de localizacin
nuclear
Ciclofilinas
Chaperonas mantiene la
conformacin de VirD2

VirB6

VirB1
VirB1
VirB8

VirB9 VirB7

Fosfatasa tipo 2C

VirB2 VirB5

VirB2 VirB5
VirB6 VirB10

VirB4VirB4

Chaperonas mantiene la
conformacin de VirD2
AtKApa

VirB2 VirB2

VirB7
VirB9

VirB8

VirB3

VirB2 VirB2
VirB1

Chaperonas mantiene la
conformacin de VirD2
VP1, VP2, VIP2
Complejo multiproteico
de transporte

36

VirD2

CLULA VEGETAL

VirD2 Protena conductora


PORO DE
TRANSPORTE

VirE2

VirD4

VirE2 proteina de unin


a cadenas simples de
ADN
NLS

VirB4 VirB4

Seales de localizacin
nuclear
Ciclofilinas
Chaperonas mantiene la
conformacin de VirD2

VirB6

VirB1
VirB1
VirB8

VirB9 VirB7

Fosfatasa tipo 2C

VirB2 VirB5

VirB2 VirB5
VirB6 VirB10

VirB4VirB4

Chaperonas mantiene la
conformacin de VirD2
AtKApa

VirB2 VirB2

VirB7
VirB9

VirB8

VirB3

VirB2 VirB2
VirB1

Chaperonas mantiene la
conformacin de VirD2
VP1, VP2, VIP2
Complejo multiproteico
de transporte

37

VirD2
VirD2 Protena conductora
VirE2
VirE2 proteina de unin
a cadenas simples de
ADN

Biologa de la
bacteria
Agrobacterium
tumefaciens

38

VirD2
VirD2 Protena conductora
VirE2
VirE2 proteina de unin
a cadenas simples de
ADN

Biologa de la
bacteria
Agrobacterium
tumefaciens

39

VirD2
VirD2 Protena conductora
VirE2
VirE2 proteina de unin
a cadenas simples de
ADN

Biologa de la
bacteria
Agrobacterium
tumefaciens

40

VirD2
VirD2 Protena conductora
VirE2
VirE2 proteina de unin
a cadenas simples de
ADN

D
no iges
ap ti
ar n d
ea e
da he
br
a

Biologa de la
bacteria
Agrobacterium
tumefaciens

D
no iges
ap ti
ar n d
ea e
da he
b

ra

41

VirD2
VirD2 Protena conductora
VirE2
VirE2 proteina de unin
a cadenas simples de
ADN

Biologa de la
bacteria
Agrobacterium
tumefaciens

42

CARACTERISTICAS DE LA TRANSFORMACIN
OCURRE AL AZAR
IMPRESCINDIBLES LOS BORDES
DERECHO E IZQUIERDO
INTEGRACIN ESTABLE
TRANSFORMACIN HEREDITARIA
APLICACIN TECNOLGICA DEL
CONOCIMIENTO DEL MECANISMO
NATURAL DE INDUCCIN DE TUMORES
COINTEGRATIVOS
Biologa de la
bacteria
Agrobacterium
tumefaciens

BINARIOS

43

SISTEMA COINTEGRATIVO

Promotor

Promotor

Gen de inters
Terminador

Marcador selectivo de plantas


Terminador

Borde derecho

Regin T- desarmada

Borde Izquierdo

Plsmido co-integrado

Sistemas de
Transformacion

Marcador selectivo en bacterias

Regin de virulencia

Origen de replicacin

44

SISTEMA BINARIO

Sistemas de
Transformacion
45

Pasos 1 y 2 del mating:


pRK2013 (helper);
kan resistencia

Plsmido lanzadera
o
Plasmido de transferencia
Kan resistencia

E. coli

tra

Sistemas de
Transformacion

bom

pTi
3

46

Paso 3 del mating:


pRK2013 (helper);
kan resistencia

Plsmido lanzadera
o
Plasmido de transferencia
Kan resistencia

E. coli

tra

Sistemas de
Transformacion

bom

pTi
3

47

Sistema cointegrado
pTi

pRK2013
Helper no tiene
origen de
replicacin en
Agrobacterium

Sistema binario
lanzadera

pRK2013

pTi

Sistemas de
Transformacion
48

SISTEMA CO-INTEGRATIVO SISTEMA BINARIO


3 Vectores

2 Vectores

Plsmido Ti desarmado
Plsmido Ti desarmado sin bordes T-DNA
Vector transportador Vector lanzadera
Evento de Recombinacin
Vector co-integrado

Transformacin

Sistemas de
Transformacion
49

50

Co-cultivar discos de hojas con Agrobacterium

1-2 das
Lavar los discos de hojas
Tratar con antibiotico para eliminar Agrobacterium y
seleccionar clulas vegetales transformadas

2-4 semanas
Transpasar los discos de hojas a medio fresco de
seleccin/regeneracin

6-10 semanas
Enraizar las pltulas en seleccin

4-6 semanas
Transplantar las plantas transgnicas

Protocolo
estndar
Tiempo total 12-20 semanas

51

Protocolo
estndar

Porcentaje de transformacin 5-15%


Duracin 15-30 semanas

52

EXPLANTOS
Sencillo
Corta en el tiempo

PROTOPLASTOS
Laborioso
Largo en el tiempo

Mayor % de transformacin Menor % de Transformacin


Quimerismo

No Quimerismo

Protocolo
estndar

Patata transformada. Tincin con yodo


de un corte longitudinal.
A) Patata libre de amilosa,
B) Patata conteniendo amilosa
C) Transformante quimrico. El color
rojo indica ausencia de amilosa y
el azul presencia

53

Manipulacin de cultivos
Transformacin de plantas

Aplicaciones

Actividades propuestas para los seminarios

Aplicaciones
54

55

Resistencia a plagas (virus, hongos,


insectos, etc.)
Tolerancia al estrs
Resistencia a herbicidas
Produccin de formas androesteriles
Cualidades del producto y control de la
maduracin
Color en plantas ornamentales
Mejora de las propiedades nutritivas
(contenido en protenas, aceites,
aminocidos esenciales, etc.).
Asimilacin de nitrgeno
Aplicaciones

Eficiencia fotosinttica

56

Cultivo

Compaa

Gen/Carcter

Ventas

Algodn

Calgene
Monsanto
Monsanto

Resistencia a Bromoxynil
Toxina de Bacillus thurigiensis
Tolerante a Glifosato

1995
1996
1996

Calabaza

Asgrow

Protena cubierta de virus

1995

Colza

Agr Evo
Monsanto
PGS

Tolerante a glufosinato
Tolerante a glifosato
Androesterilidad
Tolerante a glifosinato

1995
1996
-

Lino

Univ. Saskatchewan

Tolerante a glifosato

Maz

Agr Evo
Ciba Geigy
Monsanto
Northrup-King

Tolerante a glufosinato
Toxina de Bacillus thurigiensis
Toxina de Bacillus thurigiensis
Toxina de Bacillus thurigiensis

1997
1997
-

Meln

Asgrow

Protena cubierta de virus

1996

Patata

Monsanto
AVEBT

Toxina de Bacillus thurigiensis


Almidn modificado

1996
1996

Soja

Monsanto

Tolerante a glifosato

1996

Tabaco

Rone-Pouleuc

Resistencia a Bromoxynil
Protena cubierta de virus

1995

Tomate

Calgene
Zeneca / Peto Seeds
Monsanto

Poligalacturonasa (maduracin)
Poligalacturonasa (maduracin)
57
Protena cubierta de virus

1994
1995
1995

EJEMPLOS

Resistencia a Virus
Resistencia a Insectos
Incremento del valor nutricional
Nuevas variedades de plantas ornamentales

Aplicaciones
58

RESISTENCIA A VIRUS
Bloqueo de la infeccin
Impedimento del establecimiento del virus
Superacin de sntomas virales
IMPEDIMENTO DEL ESTABLECIMIENTO DEL VIRUS
RNA antisentido de alguna protena indispensable

RNA
antisentido

mRNA viral

Aplicaciones
59

TMV, AMV,
PMV, XPV, YPV

Aplicaciones
60

RESISTENCIA A INSECTOS
Expresin diferencial en hojas
Inhibidores especficos de insectos

Espora

Cristal

EVITAR RESISTENCIA :
Expresin controlada para periodos de
riesgos como siembra o floracin
Expresin dirigida en zonas areas.

Aplicaciones
61

INCREMENTO DEL VALOR NUTRICIONAL DE ALIMENTOS

Insertar aminocidos adicionales en las protenas


ya existentes, o bien sustituirlos por otros ms
deseables
Introducir protenas completamente nuevas muy
enriquecidas en aminocidos especficos
Proveer de copias adicionales de genes en
sistemas ya productores.

Aplicaciones
62

Arroz Dorado contiene altos nivels de pro-vitamina A


Arroz tradicional blanco (a).
Arroz Dorado desarrollado en 2000 (b). Contiene 1.6 g/g de caroteno
Arroz Dorado desarrollado en 2005 (c). Contiene 37 g/g de caroteno.

Glu: promotor de la gluteina especfico de


endospermo
tpSSU:CtrI: guisante carboxilasa de
ribulosa bis-fosfato para la localizacin
fusionada a Fitoeno desaturasa I

Nos: terminador de la nopalina sintasa


Psy: Fitoeno sintasa de Narciso pseudonarcissus
Ubi1: promotor consitutivo
Pmi:fosfomanosa isomerasa de E. coli de la
seleccin positiva
63

NUEVAS VARIEDADES ORNAMENTALES


dihidroflavonol reductasa (DFR)
antocianina dihidrokaemferol (DHK)
DHK: dihydrokaempferol
FLS flavonol synthase
F3H flavonoid 3 hydroxylase F35H
(flavonoid 35 hydroxylase)
DFR (dihydroflavonol reductase) de
pensamiento

Aplicaciones
64

BIBLIOGRAFA
GENERAL
Analysis of Genes and Genomes. Reece Richard J. Editorial Wiley. I.S.B.N. 0-470-84380-2 (2004)
Molecular Biotechnology. Principles & applications of Recombinant DNA. Bernard R. Glick, Jack J.
Pasternak. A.S.M. Press. I.S.B.N. 1-55581-071-3 (1994)
Microbial Biotechnology. Fundamentals of Applied Microbiology. Glazer, Alexander N., Nikaido, Hiroshi.
Editoria W.H. Freeman and Company. I.S.B.N. 0-7167-2608-4 (1995)
Biotecnologa Bsica. J. Bulock, B. Kristiansen. Editorial Acribia S. A. I.S.B.N. 84-200-0704-8 (1987).
Biologa Molecular y Biotecnologa. J.M. Walker, E.B. Gingold. Editorial Acribia S.A. I.S.B.N. 84-2000619-X. 2 Edicin (1997).
Biotecnologa: Curso de prcticas de laboratorio. J.M. Becker. Editorial Acribia S.A. I.S.B.N. 84-2000873-7 (1996)
Ingeniera Gentica Vol I y II. Julian Perera, Antonio Tormo y Jos Luis Garca. Editorial SINTESIS.
(2007).

ESPECFICA

Bibliografa

Plant Molecular Biology. Kluwer Academic Publishers. (1993) ISBN: 07923-0236-2. Vol 1 y 2.
Plant Cell Culture. A practical approach. (1985). Edited by R.A. Dixon.
ISBN: 0-947946-22-5
Nature Biotechnology 21: 439 - 442 (2003)
TRENDS in Cell Biology 21(3):121-129 (2002)
The Plant Journal 23(1):11-28 (2000)
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DEBATE
VALORACIN BIOTICA Y AMBIENTAL

Gen que da resistencia a los antibiticos beta-lactmicos


(ampicilina)
Alergias insospechadas por falta de informacin
Punto de vista ecolgico
Variedades resistentes a herbicidas
Fecundacin cruzada
Est justificada la alarma social?
Actividades

Ventajas
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