Histoqumica de

pigmentos
Jorge Carrasco Sanhueza
Tecnlogo Mdico
Morfofisiopatologa y Citodiagnstico
Hospital Dr. Luis Calvo Mackenna

Definicin de pigmentos
Sustancias naturales , que poseen color
Presentes en tejidos vivos y absorben espectro
lumnico.
Difieren en origen,
significado biolgico.

constitucin

qumica

Absorben un espectro electromagntico entre 400

y 800 nm.
Pueden ser orgnicos o inorgnicos, son
insolubles en la mayora de solventes.

Clasificacin general de
pigmentos
1.- Origen endgeno

1.1.- Pigmentos endgenos

a.- Hematogenos
b.- No hematogenos
1.2.- Minerales endgenos
2.- Origen exgeno
a. Pigmentos y minerales exgenos
b. Pigmentos artefactuales

1.- Pigmentos de origen

endgeno
Se producen en el tejido , cumplen alguna
funcin fisiolgica, o son producto de un
proceso metablico.
Pigmentos endgenos
Hematogenos
No hematogenos
Minerales endgenos

1. Pigmentos de origen
endgeno:
origen de su
acumulacin
1. Alteraciones
metablicas
con
celulares
normales
inadecuado)
2.-

(ritmo

productos
metablico

Alteraciones genticas que afectan el

metabolismo normal

3.

Acumulacin de sustancia anormal.

Acumulos intracelulares o dao celular

1. Pigmentos de origen
endgeno:
origen de acumulacin

2.- Pigmentos de origen

exgeno
Pigmentos que ingresan al organismo por
accidente (por inhalacin o a travs de la piel), la
mayora de los pigmentos exgenos son
minerales con poca pigmentacin. No cumple
funciones fisiolgicas.
Los de origen artefactual son producto de la
interaccin de los tejidos con sustancias qumicas
durante el procesamiento.
Pigmentos y minerales exgenos
Pigmentos artefactuales

Clasificacin general de
pigmentos
Pigmentos endgenos

Pigmentos artefactuales
Formalina
Malaria
Schistosoma
Mercurio
Oxido crmico
Almidn
Sales de mercurio
Precipitados de plata

Pigmentos y minerales
exgenos
Pigmento de tatuajes
Tatuaje de amalgama
Humo de tabaco
Carbn
Silicio
Asbesto
Plomo
Berilio y aluminio
Plata

Hematogenos
Hemosiderina
Hemoglobina
Pigmentos biliares
No hematogenos
Melanina
Lipopigmentos
Minerales endgenos
Calcio
Cobre

1.1- PIGMENTOS
ENDOGENOS:
a. De origen hematogeno
Estos pigmentos son derivados de la sangre

Hemosiderina
Hemoglobina
Pigmentos biliares
Hemofucsina (ceroide)

1.1.a.- Pigmentos de origen

hematogenos:
Hemosiderina
Pigmento de color amarillo-caf, intracelular y se
acumula en macrfagos(hemosiderofagos).

Compuesto insoluble formado por hidrxido

frrico mas una protena llamada apoferritina
De vital importancia para el transporte de
oxigeno en la hemoglobina
30% del hierro se almacena en el sistema
retculoendotelial, especialmente en la medula
sea.
El hierro se incorpora en la formacin de la
hemoglobina durante la formacin de hemates.

1.1.a.- Pigmentos de origen

hematogenos:
Hemosiderina
Por
exceso
de
hierro
(transfusin
sangunea o problemas metablicos) se
produce sobrecarga de hemosiderina.

Por descomposicin de la hemoglobina en

la globina y el grupo hemo, y
posteriormente de ste en hemosiderina y
biliverdina.
Se deposita en el SRE ( bazo, m.o , hgado
y riones) Hemosiderosis.

1.1.a.- Pigmentos de origen

hematogenos:
Hemosiderina
Soluble en cidos
insoluble en lcalis, alcohol y agua
La formalina no remueve iones frricos
Ferritina

Grupo Hemo

1.1.a.- Pigmentos de origen

hematogenos:
Hemosiderina
MTODO DE PERLS PARA IONES FRRICOS

Detecta depsitos de Ferritina o hemosiderina que

contienen Fe+3
Se tratan tejidos con solucin de ferrocianuro y
HCL
El HCL desenmascara el hierro de su forma de
hidrxido Fe(OH)3
El ferrocianuro se une a los iones de fierro +3 y
forma un compuesto coloreado insoluble de
color azul
4Fe+3 + 3[Fe(CN)6]-4 Fe4[Fe(CN)6]3
Sustrato + Reactivo Producto final coloreado azul

1.1.a.- Pigmentos de origen

hematogenos:
Hemosiderina

Dependiendo de la cantidad de hierro se puede

necesitar mas tiempo de tincin
La solucin de HCL y ferrocianuro se debe
preparar al momento de usar
Se debe usar control positivo, ej:
postmortem producto de falla cardiaca .

Pulmn

Se puede contrastar con fast red o safranina

Otros mtodos son menos utilizados como:
Mtodo de Lillie para iones frricos y ferrosos
Mtodo de Hukill
y Putts para iones frricos y
ferrosos

Pearls contrastado con

fast red

Pearls contrastado con

fast red

1.1.a.- Pigmentos de origen

hematogenos:
Hemoglobina
Es una protena bsica conjugada
responsable del transporte de O2 y
CO2 en la sangre .
Posee un color rojo debido a su grupo
hemo unido a la globina.
Hemoglobina

Grupo Hemo

1.1.a.- Pigmentos de origen

hematogenos:
Hemoglobina
TECNICA DE LA BENCIDINA
Aplicada sobre tejidos fijados
formalina e incluidos en parafina

en

Se ha dejado de utilizar debido al

efecto carcingeno de la bencidina
Se basa en una reaccin denominada
pseudoperoxidsica

1.1.a.- Pigmentos de origen

hematogenos:
Hemoglobina
TECNICA DE LA BENCIDINA
La hemoglobina libera oxigeno a partir de
agua oxigenada este oxida la bencidina que
es incolora hacia un compuesto de color verde
Actualmente
se
puede
utilizar
diaminobencidina que posee menor riesgo
carcingeno ???

Reaccin de pseudoperoxidasa
en eritrocitos por tcnica IHQ

1.1.a.- Pigmentos de origen

hematogenos:
Pigmentos
biliares
Pertenecen a este
grupo la
bilirrubina, biliverdina y
hematoidina, todos con
propiedades
fsicas
y
qumicas distintas

El grupo hem se fragmenta

formando iones frricos y el
anillo pirrolico
Este anillo sin su ion de
hierro
se
denomina
biliverdina de color verde a
azul

1.1.a.- Pigmentos de origen

hematogenos:
Pigmentos
biliares se
La
biliverdina
transporta a los riones
en donde se reduce a
bilirrubina
de
color
amarillo anaranjado

En hemorragias antiguas
como en bazo o cerebro
se forma un depsito
extracelular denominado
hematoidina de color
amarillo brillante

1.1.a.- Pigmentos de origen

hematogenos:
Pigmentos
Los mtodos de biliares
estudios estn destinados

para

la

los pigmentos biliares y hematoidina

Microscpicamente
son
parecidos
Lipofucsina .

Diferencia: Los pigmentos biliares no son

autofluorescentes y no generan birrefringencia, la
lipofucsina si.
Los pigmentos biliares en casos de ictericia
acentuada puede acumularse en tbulos renales
En general los acmulos son de color cafamarillento

Pigmento biliar en
tbulos renales

1.1.a.- Pigmentos de origen

hematogenos:
Pigmentos
biliares
TECNICA DE GMELIN
PARA PIGMENTOS
BILIARES Y HEMATOIDINA

No es una tcnica permanente.

Se utiliza acido ntrico sobre cortes
desparafinados, en donde se genera un
cambio de coloracin progresivo de estas
sustancias que va desde:
Amarillo verde azul morado rojo

1.1.a.- Pigmentos de origen

hematogenos:
Pigmentos
biliares
TECNICA DE HALL
PARA BILIRRUBINA
Tejido fijado en formalina-parafina, es
permanente.
Utiliza el reactivo de Fouchet recin
preparado (Acido ticloroacetico y cloruro
frrico)
La bilirrubina adquiere un color verde.
Se contrasta son solucin de Van Gieson

Tcnica de Hall para

bilirrubina

1.1.b.- Pigmentos de origen no

hematogenos:
Melanina

Es un pigmento que varia de color caf claro a

negro

Se encuentra normalmente en melanocitos de

la piel, en ojos, folculos pilosos, sustancia gris
del cerebro.
Bajo condiciones patolgicas se encuentra en:

Clulas tumorales de nevos benignos

Melanomas
Lesiones melnicas
Melanosis
Hiperpigmentaciones

1.1.b.- Pigmentos de origen no

hematogenos:
Melanina
Se produce a partir de tirosina
Por accin de la tirosinasa (DOPA
oxidasa),
acta lentamente produciendo DOPA
(dihidroxifenilalananina),
La DOPA reacciona con la misma
enzima polimerizando y formando
melanina.

1.1.b.- Pigmentos de origen no

hematogenos:
Melanina
La melanina y sus precursores (DOPA)
son capaces de reducir plata y
ferrocianuro.
Son
insolubles
en
solventes
orgnicos, debido a que se unen a
protenas en los melanosomas
Se puede blanquear
oxidantes fuertes

por

agentes

1.1.b.- Pigmentos de origen no

hematogenos:
Melanina
Mtodos de estudio

Fontana-Masson
Schmorls con ferrocianuro-frrico
Mtodo enzimtico de reaccin DOPA
Fluorescencia
Inmunohistoquimica

Melanina en piel con H-E

1.1.b.- Pigmentos de origen no

hematogenos:
Melanina
REDUCCIN DE PLATA DE FONTANA-MASSON
Sustancia argentafin
Es inespecfica (hierro, lipofucsina y grnulos
argentafines)
Se utiliza una solucin de plata
durante 30 a 40 minutos a 56 C.

amoniacal

Se puede contrastar con rojo nuclear o safranina

La melanina adquiere un color negro intenso

Fontana masson, contraste

con rojo nuclear

Fontana Masson, contraste

con safranina

1.1.b.- Pigmentos de origen no

hematogenos:
Melanina

REDUCCIN DE SCHMORLS
La melanina reduce el ferricianuro a
ferrocianuro produciendo un color azul
Mtodo inespecfico, puede teir lipofucsina,
pigmento biliar y grnulos neuroendocrinos
Utiliza una solucin de ferricianuro de potasio
y cloruro frrico, preparada antes de usar.
Se puede contrastar con rojo nuclear o
safranina.
La melanina adquiere un color azul oscuro

Reduccin de Schmorls

Reduccin de Schmorls sin

contraste

1.1.b.- Pigmentos de origen no

hematogenos:
Melanina
MTODO DE DOPA OXIDASA
Utiliza la capacidad de la enzima
DOPA oxidasa presente en los
melanosomas para oxidar DOPA y
formar un compuesto insoluble de
color caf.
Altamente
melanina

especifico

para

la

1.1.b.- Pigmentos de origen no

hematogenos:
Melanina

MTODO DE DOPA OXIDASA

Debe usarse en cortes por congelacin.
Utiliza dihidroxifenilalanina en tampn
fosfato a pH 7.4
Se incuba durante 45 minutos a 37 C
Utiliza contraste de verde metilo
Las zonas con actividad DOPA-oxidasa
adquieren color negro-parduzco

Mtodo de DOPA-oxidasa

1.1.b.- Pigmentos de origen no

hematogenos:
Melanina
Mtodo de IHQ
Es mucho mas especifica
Utiliza anticuerpos HMB-45, Melan-A y
S100 para los cuales la melanina es +

Blanqueamiento de la melanina
Utiliza H2O2 10% durante 1 a 2 das
Tambin KMNO4
al 0,25% y acido
oxlico al 5%

IHQ con HMB-45 en piel

1.1.b.- Pigmentos de origen no

hematogenos:
Lipopigmentos
Lipofucsina
De color amarillo-caf a rojizo-caf
Producto de procesos oxidativos de
lpidos y lipoprotenas.
Oxidacin
lenta y progresiva de
lpidos.
El pigmento proporciona una tincin
variable, con diferentes colores,
diferentes tamaos y textura.

1.1.b.- Pigmentos de origen no

hematogenos:
Lipopigmentos

Lipofucsina
Se puede encontrar en procesos fisiolgicos o
patolgicos,
generalmente
de
clulas
envejecidas
Hepatocitos, mezclados con otros pigmentos
Clulas musculares cardiacas de personas ancianas
Corteza adrenal en pacientes tras prolongado
stress
Testculos, especialmente en clulas de leydig
Ovario, tras la involucin a cuerpo lteo
Cerebro tras hemorragia o infarto
Desordenes lipdicos

Clulas con acumulo de

pigmento lipofucsina

Lipofucsina en hgado

1.1.b.- Pigmentos de origen no

hematogenos:
Lipopigmentos
Se puede demostrar por diversos
mtodos:
Reaccin de PAS
Reduccin de Schmorls
Mtodo de Zhiel-Neelsen
Sudan Black B
Aldehdo Fucsina de Gomori
Fontana Masson
Etc.

Lipofucsina con mtodo de

Kluver-Barrera

1.1.b.- Pigmentos de origen no

hematogenos:
Lipopigmentos

Pigmento ceroide
Es una lipofucsina de fase inicial .
Caractersticas qumicas distintivas de
la lipofucsina

Adopta un color parduzco

Es PAS negativa
Sudan Black negativa
Azul de Nilo negativo

Posee autofluorescencia y tambin se

tie con el mtodo de Zhiel-Neelsen

2.a.- Pigmentos de origen

exgeno:
Pigmentos y minerales exgenos
Pigmento antractico

Acmulo de carbono exgeno que se produce tras

inhalacin a travs de los pulmones y que puede
provenir de Smog, polvo y humo de tabaco

Pigmento de tatuajes
Tintes con xidos de hierro u orgnico son
digeridos por macrfagos que almacenan el
material de por vida.

Tatuaje de amalgama
es una lesin benigna causada por la implantacin
de material de relleno dental en los tejidos

Pigmento antracotico en
pulmn

Tatuaje cutneo

Tatuaje por amalgama

2.a.- Pigmentos de origen

exgeno:
Pigmentos
artefactuales
Pigmento formolado
Accin de acido frmico
sobre el grupo hemo de la
hemoglobina sobretodo en
tejidos hemorrgicos
Se
elimina
con
cido
pcrico saturado en etanol
durante 1 hora

2.a.- Pigmentos de origen

exgeno:
Pigmento
malarico
Pigmentos
artefactuales

se observa en macrfagos de diversos rganos junto

a hemosiderina. Es negro y granular.
Producido por los plasmodios de la malaria a partir
de la hemoglobina, contiene fierro difcil de
evidenciar.
Se observa especialmente en el hgado, bazo,
ganglio linftico, que adquieren un color gris o gris
negruzco.

2.a.- Pigmentos de origen

exgeno:
Pigmentos
Pigmento
de artefactuales
sales
de
mercurio
precipitados de color negrocaf
interfieren
con
la
morfologa normal del tejido

Pigmento de oxido crmico

Tras la fijacin , lavar los tejidos
durante 12 a 48 horas en agua
corriendo
para
evitar
la
formacin
de
precipitados
pigmentados

PARA CLASE DE
HISTOQUIMICA DE IONES
INORGANICOS
Minerales endgenos
Cobre
Calcio

Pigmentos y minerales exgenos

Carbn
Silicio
Asbestos
Plomo
Berilio y aluminio
Plata

ETC