PRUEBA ELISA PARA

ALERGENOS
GLUTEN

Fundamento ELISA de Sandwich

10 min

Lavado

Conjugado
10 min
Lavado

Reactivo
Detenedor

Substrato

Lectura (OD650 nm)

10 min

Anticuerpos de Captura
Allergenos
Anticuerpos Detectores
Substrato

Preparacin estndar de la muestra

Muestra (5 gramos)+ 125 ml PBS (60 C)
Extraccin estndar

+ 1 cuchara del Aditivo de extraccin

Almendra
Huevo
Avellana

Agitar en el Bao de Maria por 15 min a 60 C

Lupine
Leche

Filtrar/Sedimentar/Centrifugar

Mostaza
Mani
Soya
Extraccin Modificada
Mariscos (30 min @ 30C)
Gluten
Ajonjol (Contacte Neogen)
Nueces (Contacte Neogen)

Proceder a la corrida en el Kit

Extraccin Modificada gluten

Muestra (2 gramos)
1 cuchara del Aditivo de extraccin
Agregar 20 mL de etanol al 40% ( 18 muestras lquidas)
Agitar y extraer en agitador durante 15 minutos a temperatura ambiente
Dejar sedimentar durante 10 minutos
Diluir el extracto 1::40 ( 100 uL + 3,9
y mL de buffer de extraccion), agitar
Proceder a la corrida con el Kit

Procedimiento cuantitativo

1.

Aadir los controles y las

muestras a los micropozos
rojos apropiados (150 uL)

2.

Transferir 100 uL a
los micropozos de
anticuerpo e incubar
por 10 minutos.

3.

Lavar los
micropozos con la
solucin de lavado
buferada.

Procedimiento cuantitativo

4.

Aadir 100 uL
del conjugado e
incubar por 10
minutos.

3.

Lavar los
micropozos con
la solucion de
lavado
buferada.

6.

Aadir 100 uL del

substrato e
incubar por 10
minutos.

Procedimiento cuantitativo

7.

Aadir 100 uL de
solucin detenedora .
8.

Leer los resultados en el Lector

de Micropozos.