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Carolina Vargas
David Rodriguez
Briggitte lew
Ernesto Rosales
Protenas recombinantes
en animales transgnicos
Eritropoyetina
humana(hEPO)
Glicoprotena responsable de la
regulacin de la produccin de los
glbulos rojos en los mamferos.
Expresin recombinante en leche de
cerdo
Expresin en leche de cabra no
transgnico
Desafos tcnicos
El tiempo requerido para producir
animales transgnicos
Modificaciones pos traduccionales
apropiadas
Habilidad para predecir y controlar la
expresin especifica.
Complejo proceso de Down stream
Componente proteico de la
leche
Dos familias:
las casenas
suero de leche
La leche de cerdo transgenico contiene
niveles mas altos de proteinas nocaseinas
Mtodo de pretratamiento
Precipitacin qumica en dos etapas
Recuperacin altamente selectivo de
hEPO
Utilizando sulfato de amonio y
niveles bajo de metales divalentes
Metodos
Deconstruccin de los micelios de
casenas usando EDTA
Precipitacin por PH.
Precipitacin por sulfato de amonio
Precipitacin con Cationes divalentes
SDS-PAGE y Western-blot
Turbiedad y concentracin de protena
Discusin
La produccin de protenas humanas recombinantes
en animales empieza a entrar en limitaciones
consistentes, bajas concentraciones, procesos de
purificacin complicados y difciles de implementar.
La leche de marrana es una mezcla muy compleja
que contiene casenas, albuminas, immunoglubinas,
otras protenas, azucares grasa y sales.
Muchos investigadores actualmente han reportado
mtodos de separacin en medios libres de
protenas por lo cual las purificaciones suelen ser
va cromatografa(afinidad, intercambio ionice
interacciones hidrofbicas)
CROMATOGRAFA
VENTAJA
DESVENTAJA
Precipitacin del pH
Precipitacin
sulfato de amonio
Precipitacin con
metales divalentes
RENDIMIENTO DE RECUPERACION,
82.1%
ACTIVIDAD ESPECFICA 315.2
IU/MG
Referencias
Lee, E.G., Lee, S.H., Park, K.M. et al.
Biotechnol Bioproc E (2008) 13: 189.
doi:10.1007/s12257-007-0158-x