HABLEMOS DE MICROBIOLOGIA

ACTUALIZACION DE TECNICAS,PROTOCOLOS Y
PROCESOS EN MICROBIOLOGIA

Marly Sarabia Montes

Bacteriologa
Especialista en Microbiologia
Clinica
 INTRODUCCION
El laboratorio de microbiologa es una de las
principales fuentes de informacin y de apoyo
diagnstico para la toma de decisiones
clnicas; la capacidad que ste tiene para
identificar microorganismos patognicos y
predecir una respuesta a la terapia con
antibiticos, le permite ser miembro activo de
los comits de prevencin de infecciones y
aportar datos claves para la investigacin
epidemiolgica intra y extra hospitalaria de las
enfermedades infecciosas. (L Raka, 2012).
 CALIDAD: NUNCA
OLVIDARLA
La calidad de los resultados generados por los
laboratorios, depende del ptimo cumplimiento de
los procedimientos que dan lugar a las fases
preanaltica, analtica y pos analtica. La integracin
adecuada de cada uno de los pasos para la
generacin de resultados, permite minimizar el
riesgo de error diagnstico, aumentar la seguridad
de los pacientes y disminuir la inadecuada utilizacin
de los recursos tanto materiales como econmicos;
en este sentido, el proceso de toma y transporte de
muestras es considerado uno de los ms importantes
eslabones de la cadena.
(P Murray, 2010).
 TAREA PARA TODOS!!
La concepcin que el personal del laboratorio clnico es el
encargado de todo el proceso, cada profesional del rea
de la salud debe tener un conocimiento mnimo para la
toma de muestras microbiolgicas y las condiciones
necesarias para el transporte hasta el laboratorio de
microbiologa.
El seguimiento de las pautas establecidas para la toma de
muestras, permitir evitar inconvenientes como la
contaminacin, material insuficiente o retrasos
inusitados para el inicio del proceso analtico entre
otros. Adems, una adecuada toma de muestras juega
un papel decisivo en el apoyo al comit de infecciones
para el diagnstico preciso de las infecciones asociadas
a la atencin en salud (J Christenson, 2012).
 FASES ANALITICAS
FASEServivio
PRE ANALITICA
al cliente (generacin de la orden de servicio)
Transporte y recepcin de la muestra
FASEServivio
PRE ANALITICA
al cliente (generacin de la orden de servicio)
Toma de muestra
 CONTEXTO DE HOY...HAY QUE
EVOLUCIONAR
Incremento
Calidad
Optimizacin
Presin laboral
dedel
la tiempo
productividad
laboral Disminucin de costos
 CONTEXTO DE HOY...HAY QUE
EVOLUCIONAR
Revisin dede
Implementacin
Herramientas
Seguridad procesos
paciente
tcnicas
de Protocolos
y computarizadas
tcnicas
TOMA DE MUESTRA, TRANSPORTE Y RECEPCION

FASE PRE ANALITICA

Recomendaciones para la toma
de muestra
Solicitud del estudio con oriencin
clara a la clinica del paciente.

Conocimiento claro de la toma de

muestra segn la solicitud.

Garantia de transporte de la
muestra.
 RECUERDE
Especificar el estudio requerido.
Por ejemplo: examen directo, cultivo y antibiograma de lquido
intraabdominal, estudios de aerobios y anaerobios.

Resumir el diagnstico clnico presuntivo del paciente.

La impresin diagnstica es especialmente til cuando se
solicita estudio de hongos y micobacterias.

Informar el uso de antibiticos u otros medicamentos.

Por ejemplo, inmunosupresores, que pueden influir y que el
personal del laboratorio puede utilizar para orientar el
anlisis.
Cumplir con las
medidas de
BIOSEGURIDAD
 PREPARACION DEL
MATERIAL
Una vez conocida la solicitud del tipo
de examen, se debe preparar el
equipo necesario para la obtencin,
la conservacin y el transporte
correcto de la muestra.

Equipo de asepsia y antisepsia de

acuerdo a la obtencin de la
muestra.
 IDENTIFICACION DE LA
MUESTRA
Toda muestra debe ser etiquetada con los siguientes datos
bsicos:

1. Nombre completo
2. Edad del paciente.
3. Nmero de historia clnica
4. Habitacin /localizacin.
5. Tipo de muestra y sitio anatmico. Por ejemplo, secrecin de
herida quirrgica abdominal; biopsia tejido lcera pie diabtico;
orina obtenida a travs de sonda vesical permanente; sangre
obtenida a travs de catter venoso central, etc.
6. Fecha y hora de recoleccin.
7. Iniciales o nombre de la persona que obtiene la muestra.
 Condiciones generales
de almacenamiento y
transporte
El tiempo de transporte de todos los
especmenes obtenidos para estudio debe
ser corto (mximo de 2 horas) y de acuerdo
con la viabilidad del organismo sospechado
y el recipiente donde se recolecto.

Segn el volumen: menor de 1CC, deben ser

trasportada los primeros 15 a 30
minutos;para evitar
evaporizacin,desecacin.
Las bacterias que requieren procesamiento
inmediato por su susceptibilidad al medio
ambiente son: Shigella spp, Neisseria
gonorrhoeae, Neisseria meningitidis,
Haemophilus influenzae, Streptococcus
pneumoniae y anaerobios

Las muestras para estudio de anaerobios no

deben ser refrigeradas y deben ser colectadas
en recipientes que mantengan condiciones
libres de oxgeno.
 Muestras de lquido cefalorraquideo,
flujo vaginal, odo interno y ojos no
deben ser refrigeradas.

Los frascos para recoleccin de lquidos

deben tener tapa rosca; no se
recomienda el uso de tapones de
gasa o algodn que pueden absorber
el lquido colectado y generar el
riesgo de derramamiento y
exposicin biolgica.
 Deben ser transportadas en
recipientes o contenedores que
eviten el contacto y disminuyan el
riesgo de exposicin al personal que
transporta la muestra.
 Criterios de aceptabilidad o
rechazo de muestras
RECHAZO:
Cantidades insuficientes.
Temperaturas inadecuadas.
Recipientes rotos o con fugas.
Deficiente calidad de la muestra (por
ejemplo, esputo contaminado con saliva).
Orina obtenida de bolsa colectora.
Muestra sin identificar.
 HEMOCULTIVOS
Los juegos de hemocultivos deben ser
obtenidos simultneamente o con poco
tiempo de diferencia entre cada uno.
La toma de la muestra en intervalos de
tiempo est indicada solo cuando es
necesario documentar bacteremias
continuas en pacientes con sospecha
de endocarditis infecciosa o en
infecciones endovasculares.
Tomar las muestras para hemocultivos
antes de iniciar terapia
antimicrobiana para evitar resultados
falsos negativos.

En caso de no ser posible, se

recomienda el uso de botellas para
hemocultivo con resinas, las cuales
atrapan el antibitico facilitando el
crecimiento de los microorganismos.
En el caso de hemocultivos obtenidos de
venas perifricas, se recomienda utilizar
la vena mediana cubital o las venas
ceflicas de los miembros superiores.

La toma de muestras de sangre arterial o

de venas de miembros inferiores,
aumenta el riesgo de eventos adversos,
de contaminacin y disminuye la
posibilidad de recuperacin
microbiolgica. (CLSI M47A, 2012).
Se debe seguir una tcnica asptica estricta a lo
largo de todo el procedimiento de la toma de
hemocultivos.

Las botellas de hemocultivos en su parte externa

no son estriles, razn por la cual se
recomienda desinfectar la tapa de caucho de la
botella utilizando alcohol isoproplico al 70%
(CLSI, 2012).

Se ha demostrado previamente que la

desinfeccin de la tapa de la botella disminuye
el riesgo de contaminacin de los hemocultivos.
(Hall an Lyman, 2006)
El volumen de sangre obtenido durante la toma de
hemocultivos es el factor determinante en la
recuperacin del microorganismo causante de la
infeccin

Los hemocultivos pueden ser falsamente negativos

si el volumen inoculado en la botella es
insuficiente. (Connell, 2007).

En neonatos, algunos estudios sugieren que la

inoculacin de 1 mL de sangre en la botella puede
ser el volumen suficiente para obtener una
adecuada sensibilidad cuando se utiliza una
botella nica.
Volumen de sangre de Hemocultivos, segn
edad y peso en poblaciones peditricas
 Revisar la orden mdica para la toma de
hemocultivo
ROTULO DE HEMOCULTIVOS
Nombre del paciente Nmero de
identificacin
Nmero del hemocultivo
Sitio de obtencion: periferico o cateter
Fecha y Hora
Nombre de quien toma la muestra
Nunca colocar estos datos sobre el
cdigo de barra
En caso de existir Cateter venoso en el
paciente o sospecha de bacteremia
originada por est se debe realizar
RETROCULTIVO, concomitante con
hemocultivo periferico.

Puntas de cateter, su impacto es ms

epidemiologico, que diagnstico.
 UROCULTIVO
La orina es normalmente un fluido corporal
estril

El diagnstico de infeccin del tracto urinario

puede ser fcil o difcil segn la presentacin
clnica que tenga el paciente (Wilson M, 2003)

La regla de oro estndar para el diagnstico de

infeccin del tracto urinario es el urocultivo
(Perlhagen Markus, 2007).
Recoleccion de la muestra
Miccin espontanea

Sonda vesical

Puncin suprapbica
 Utilidad Diagnstica
Se debe solicitar urocultivo cuando se tenga una alta
sospecha de infeccin de vas urinarias

Cuando se requiere detectar bacteriuria asintomtica en

donde es demostrada su utilidad (embarazo y pacientes
sometidos a procedimientos quirrgicos de la va urinaria
o manipulacin de la misma que no incluyen sondaje de
orina).

La colonizacin de la orina es frecuente en ancianos,

pacientes con sonda vesical a permanencia, con secuelas
de trauma raquimedular, diabticos, entre otros.
 Educar al paciente

El personal del laboratorio debe

entregarle al paciente las
instrucciones para la toma de la
muestra de orina de forma clara y
sencilla de entender que incluya
forma adecuada de recoleccin de la
muestra, condiciones de higiene y
limpieza genital.
 Revisar la orden mdica para la toma de
urocultivo.
1. Nombre del paciente.
2. Nmero de identificacin.
3. Pruebas que el mdico solicita :uroanlisis,
gram de orina sin centrifugar, urocultivo, etc.)
4. Condiciones especiales para la toma de la
muestra (primera orina de la maana, orina
aleatoria).
5. Otra informacin que el mdico y el
laboratorio acuerden previamente como parte
del protocolo de toma de muestras de la
institucin.
 SECRECIONES RESPIRATORIAS
SUPERIOR E INFERIOR
Las muestras del tracto respiratorio deben ser
recolectadas tan pronto sea posible, antes del inicio
de la terapia con antibiticos.

La posibilidad de recuperar los virus y las bacterias

disminuye significativamente despus de 72 horas
de iniciados los sntomas de la enfermedad y
despus de iniciar la terapia con antibiticos.

Se debe seleccionar el tipo de espcimen dependiendo

del contexto del paciente y la sospecha clnica del
mdico.
 TOMA DE MUESTRA
Se debe tener en cuenta que si se requieren
pruebas de biologa molecular, no se deben
utilizar hisopos con alginato de calcio porque
pueden alterar la fase analtica de la prueba.

Por otra parte, en sospecha de infeccin por

Bordetella pertussis u otro tipo de germen
fastidioso, se recomienda contactar
previamente al laboratorio para recibir
instrucciones especficas para la toma de la
muestra.
 Hisopado de fosas
nasales:
Utilizado principalmente para la
deteccin de hongos y/o
Staphyloccocus aureus meticilino
resistente por medio de cultivo o
estudios de reaccin en cadena de la
polimerasa. Habitualmente son
utilizados en estudios para tamizaje
epidemiolgico
Hisopado de nasofaringeo:
El hisopado nasofarngeo se utiliza para cultivos
bacterianos. En el caso de agentes virales,
este mtodo tiene una alta especificidad, pero
la sensibilidad depende del tipo de tcnica
diagnstica utilizada.
Mtodo de eleccin para realizar el diagnstico
del virus de la influenza y otros virus
respiratorios (Instituto Nacional de Salud,
2012). De igual manera, es el mtodo ideal
para la bsqueda de Bordetella pertussis en
poblacin peditrica.
 Esputo
El xito de la obtencin de la muestra de esputo
radica en la adecuada educacin que el personal
de salud le suministre al paciente para obtener
muestras representativas y disminuir al mximo
la contaminacin con secreciones orales.

Su interpretacin siempre debe ser realizada en

conjunto con otras ayudas diagnsticas como la
historia clnica, las imgenes radiolgicas y otros
estudios microbiolgicos realizados. (L Raka,
2012).
Frasco estril de boca ancha y tapa
rosca
ROTULO
Nombre del paciente.
Nmero de identificacin.
Fecha y hora
Tipo de muestra
Nmero de la muestra
Tipo de cultivo que el
mdico requiere.
 RECOMENDACIONES

Para el estudio de micobacterias se deben

obtener tres (3) muestras seriadas.

Las muestras se pueden obtener en

cualquier momento del curso clnico de la
enfermedad, pero se recomienda que
sean tomada antes del inicio de la terapia
antibacteriana.
 La presencia de abundantes clulas epiteliales es un
fuerte indicador de contaminacin con flora
bacteriana oral.

Un espcimen contaminado no puede ser aceptado

para cultivos bacterianos de rutina, pero si pueden
ser tenidos en cuenta para cultivos de micobacterias.

Una muestra adecuada para realizar el cultivo debe

ser representativa de la va area inferior
CRITERIO
Meno de 10 clulas epiteliales
Ms de 25 polimorfonucleares por campo de bajo poder
 ESPUTO INDUCIDO

La toma de muestras de esputo

inducido con nebulizaciones con
solucin salina al 0,9% se encuentra
indicada en pacientes con dificultad
para obtener la muestra por
expectoracin.
 SECRECION TRAQUEAL
El aspirado traqueal es utilizado
como una estrategia para determinar
el agente etiolgico en pacientes con
neumona.

La contaminacin de las muestras

con microorganismos de la cavidad
oral puede ser muy frecuente.
 Siempre se debe recordar que las
muestras de aspirados traqueales, deben
ser cultivados a pesar de la presencia de
clulas epiteliales en el extendido (P
Murray, 2010).

El extendido del aspirado traqueal, en

ausencia de clulas inflamatorias y la
negatividad del cultivo para grmenes
comunes, tiene un alto valor predictivo
negativo (E Baron, 2013; 57).
SIEMPRE REALIZAR GRAM
 Revisar la orden mdica para la toma de
muestras de aspirado traqueal
sta debe incluir la siguiente informacin:
1. Nombre del paciente.
2. Nmero de identificacin.
3. Tipo de cultivo que el mdico requiere
(grmenes comunes, micobacterias, hongos).
4. Nombre del mdico que ordena el
procedimiento. Otra informacin que el
mdico y el laboratorio acuerden previamente
como parte del protocolo de toma de
muestras de la institucin
Toma de muestras de lavado broncoalveolar,
cepillado bronquial y lavado bronquial.

El lavado broncoalveolar, el cepillado bronquial

y el lavado bronquial se encuentran indicados
en diferentes patologas de acuerdo a la
sospecha clnica o en casos donde el esputo
no ha sido conclusivo y se continua con
sospecha de infeccin bacteriana, fngica o
viral (incluido Pneumocystis jirovecii.) del
tracto respiratorio inferior o del parnquima
pulmonar. (L Raka, 2012).
Mdico especialista
 Recomendaciones para el embalaje y el
transporte de las muestras al laboratorio

Recordar que siempre los hisopos y las sondas

deben ser recolectados en tubos estriles con
medios de transporte sin antibiticos.
Las muestras de secreciones, lavados y
expectoraciones deben ser recogidas en
frascos estriles de boca ancha.
El rtulo de cada espcimen debe incluir el
nombre del paciente, el nmero de
identificacin, el tipo de muestra y la fecha de
recoleccin.
 LIQUIDOS ESTERILES
Los lquidos corporales estriles
corresponden a los lquidos que se
generan en las diferentes cavidades
corporales las cuales se encuentran
completamente aisladas del medio
externo y las cuales pueden ser
alcanzadas por microorganismos por
medio de la inoculacin directa
(trauma, iatrogenia), infeccin a
travs del torrente sanguneo o
 La toma de las muestras obtenidas a
travs de las cavidades corporales,
es un procedimiento invasivo
susceptible de complicaciones. El
procedimiento debe ser realizado
exclusivamente por personal mdico
entrenado.
SECRECIONES HERIDAS LIMPIAS Y SUCIAS
Torrente sanguineo Respiratorias Urocultivo-
Secreciones

FASE ANALITICA
HEMOCULTIVOS POSITIVOS
UROCULTIVOS
 MUESTRAS RESPIRATORIAS
PROTOCOLO CULTIVO PARA BACTERIAS AEROBIAS


LAVADO BRONCOALVEOLAR
TRABAJAR SIEMPRE EN CMARA DE BIOSEGURIDAD CUANDO SE PROCESAN MUESTRAS RESPIRATORIAS



SE CENTRIFUGAN EN TUBOS FALCON ESTRIL UN VOLUMEN DE 5MLA 3.500 RPM POR 15 MINUTOS.
SEMBRAR EL SEDIMENTO.



SE REALIZAN DOS DILUCIONES:
1:100 SEMBRAR 0,01 ML(10 UL) CON PIPETA AUTOMATICA Y PUNTAS ESTRILES (EN RECUENTO) ENAGAR
SANGRE,AGAR CHOCOLATE Y AGAR MacConkey, Y COLOCAR EN UNA LMINA PORTAOBJETOS UNA GOTA DE LA
MUESTRA PARA HACER COLORACIN CON GRAM.
1:1000 REALIZAR PRIMERO UNA DILUCIN COGIENDO 0,1 ML (100 UL) DEL LBA EN 0,9 ML DE AGUA DESTILADA ESTERIL
O SOLUCIN SALINA ESTERIL, DE AQU SEMBRAR 0,01 ML (10 UL) CON PIPETA AUTOMATICA Y PUNTAS ESTRILES (EN
RECUENTO) EN AGAR CHOCOLATE Y AGAR SANGRE Y AGAR MAC CONKEY.



INCUBAR A 35C EN AMBIENTE CON CO 5%



LECTURA A LAS 24 HORAS, 48 HORAS Y 72 HORAS



 RECUENTO DE COLONIAS:
CULTIVO 1:100 NMERO DE COLONIAS POR 100(FACTOR DE DILUCIN)
CULTIVO 1:1000 NMERO DE COLONIAS POR 1000 (FACTOR DE
DILUCIN)



INTERPRETACIN DE RESULTADOS:
10.000 UFC/ML DE BACTERIAS ES SIGNIFICATIVO



PRUEBAS DE IDENTIFICACIN Y ANTIBIOGRAMA A LOS RECUENTOS
SIGNIFICATIVOS
 MUESTRAS RESPIRATORIAS
PROTOCOLO CULTIVO PARA BACTERIAS AEROBIAS


ASPIRADOS ENDOTRAQUEALES
TRABAJAR SIEMPRE EN CMARA DE BIOSEGURIDAD CUANDO SE PROCESAN MUESTRAS RESPIRATORIAS



SE HOMOGENIZA LA MUESTRA, AGITANDO FUERTEMENTE O EN EL VORTEX POR 2 MINUTOS, LUEGO SE COLOCA EN UNA LMINA PORTAOBJETOS UNA GOTA DE LA MUESTRA PARA
HACER COLORACIN CON GRAM



EVALUACIN DE LA CALIDAD DE LA MUESTRA (10X):
SI LA MUESTRA PRESENTA LAS SIGUIENTES CARACTERSTICAS, ES ADECUADA PARA CULTIVAR:
NMERO DE CLULAS EPITELIALES:
MENOS DE 10/PC
NMERO DE LEUCOCITOS:
MS DE 25/PC



SI LA MUESTRA ESTA MUY ESPESA, SE AGREGA IGUAL VOLUMEN A LA MUESTRA DE N-ACETIL-CISTENA AL 1% (SE PESA 0.1 GR PARA 10 ML DE AGUA
DESTILADA ESTRIL) QUE SE PREPARA EN EL MOMENTO EN QUE SE TRABAJA CON LA MUESTRA



SE HOMOGENIZA LA MUESTRA, AGITANDO FUERTEMENTE O EN EL VORTEX POR 2 MINUTOS



SE REALIZAN DOS DILUCIONES:
1:100 SEMBRAR 0,01 ML(10 UL) CON PIPETA AUTOMATICA Y PUNTAS ESTRILES (EN RECUENTO) EN AGAR SANGRE,AGAR CHOCOLATE Y AGAR MacConkey, Y COLOCAR EN
UNA LMINA PORTAOBJETOS UNA GOTA DE LA MUESTRA PARA HACER COLORACIN CON GRAM.
1:1000 REALIZAR PRIMERO UNA DILUCIN COGIENDO 0,1 ML (100 UL) DEL LBA EN 0,9 ML DE AGUA DESTILADA ESTERIL O SOLUCIN SALINA ESTERIL, DE AQU SEMBRAR 0,01
ML (10 UL) CON PIPETA AUTOMATICA Y PUNTAS ESTRILES (EN RECUENTO) EN AGAR CHOCOLATE, AGAR SANGRE Y AGAR MAC CONKEY





 MUESTRAS RESPIRATORIAS
INCUBAR A 35C EN AMBIENTE CON CO 5%



LECTURA A LAS 24 HORAS, 48 HORAS Y 72 HORAS



RECUENTO DE COLONIAS:
CULTIVO 1:100 NMERO DE COLONIAS POR 100(FACTOR DE DILUCIN) SI SE LE
ADICIONA N-ACETIL-CISTENA AL 1% SE MULTIPLICA POR 200
CULTIVO 1:1000 NMERO DE COLONIAS POR 1000 (FACTOR DE DILUCIN) SI SE LE ADICIONA
N-ACETIL-CISTENA AL 1% SE MULTIPLICA POR 2000



INTERPRETACIN DE RESULTADOS:
100.000 UFC/ML DE BACTERIAS ES SIGNIFICATIVO



PRUEBAS DE IDENTIFICACIN Y ANTIBIOGRAMA A LOS RECUENTOS SIGNIFICATIVOS

LIQUIDOS ESTERILES
FASE POS ANALITICA
INTERPRETACION DE
RESULTADOS
COLORACIONES- CEPAS ATCC- CONTROL DE CALIDAD
EXTERNO

CONTROL DE CALIDAD EN
MICROBIOLOGIA