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Introduccion
Los recuentos celulares son una serie de procedimientos
-Cubreobjetos
-Microscopio
CAMARA DE NEUBAUER
Qu es una cmara de recuento y dnde se utiliza?
La cmara de conteo es un aparato de vidrio ptico especial de precisin. Se utiliza para contar clulas u
otras partculas en suspensiones bajo el microscopio. En la porcin central esta dividida en 3 bandas
perpendiculares al eje longitudinal de la cmara. De elllas, las dos laterales se hallan sobreelevadas 0.1
La banda central puede estar, a su vez, subdivida en 2 semibandas idnticas y separadas por un surco
(Perla blanca)
(Perla roja)
SOLUCION DILUYENTE
PARA LA SANGRE
Para recuento de Para recuento de
Leucocitos Hematies
Procedimiento
Mezclar los reactivos y guardar en frasco mbar en lugar fresco
RECUENTO DE GLOBULOS
BLANCOS
Ejemplo: Leucocitos
Cmara: Neubauer
1. Clulas contadas: 120 leucocitos.
2. Superficie contada: 4 cuadrados grandes
corresponden a 4 mm2
3. Profundidad cmara: 0,1 mm
4. Dilucin: 1 : 20 120 .
4 mm2 x 0,1 mm x 1/20
= 6,000 leucocitos/l sangre
RECUENTO DE GLOBULOS
BLANCOS
Correccin de valores para restar eritrocitos nucleados
Los normoblastos no se destruyen (lisis) en el lquido de dilucin, por lo tanto pueden observarse al realizar el
recuento leucocitario y confundirse con los leucocitos, de tal manera que se debe emplear la siguiente
frmula:
Clculo:
La concentracin del nmero de normoblastos (por litro) es:
Nmero de normoblatos contados x concentracin o nmero de leucocitos
100 + N de normoblastos contados
Ejemplo:
Si se cuentan 50 normoblastos y la concentracin del nmero de leucocitos es 16 000 /mm3, la concentracin
del nmero de normoblastos ser:
50 x 16 000 = 5300 / mm3
100 + 50
Recuento corregido de glbulos blancos o leucocitos = 16 000 - 5300 = 10 700 / mm3
RECUENTO DE HEMATIES
Diluyente de glbulos rojos:
Diluyente de Hayem
RECUENTO DE HEMATIES
Partculas por l volumen = partculas contadas .
superf. cont. (mm2) x profundidad cmara (mm) x dilucin
Ejemplo: Eritrocitos
Cmara: Neubauer
1. clulas contadas: 528 eritrocitos
2. superficie contada: 5 cuadrados medianos
corresponden a 0,2 mm2
3. profundidad cmara: 0,1 mm
4. dilucin: 1 : 200 528 .
0,2 x 0,1 x 1/200
= 5,28 x 106 eri/l sangre
= 5,28 millones de eri/l sangre
RECUENTO DE PLAQUETAS
Principio
El recuento de plaquetas se realiza directamente en un microscopio de contraste
de fases, previa lisis de los hemates, o tambin se puede observar en
un microscopio convencional.
Valores de referencia
150 000 - 450 000 plaquetas/mm3
RECUENTO DE PLAQUETAS
Recuento en cmara
Materiales
Hemocitmetro o cmara de Neubauer.
Solucin de procana
Pipetas automticas de 100 a 1000 mL y 0 a 100 mL.
Tubos de plstico de 12 x 75.
Microscopio convencional.
RECUENTO DE PLAQUETAS
SOLUCIN DE PROCANA
Reactivos
Procana (polvo) 3g
Cloruro de sodio 200 mg
Agua destilada c.s.p. 1000 mL
Procedimiento
Mezclar los reactivos en agua destilada y completar hasta llegar a un litro.
Guardar en refrigeracin a 4C.
RECUENTO DE PLAQUETAS
Mtodo
Mezclar bien la muestra de sangre obtenida con EDTA.
Hacer una dilucin de 20 uL de sangre total con 380 uL de solucin de
procana en un tubo de plstico de 12 x 75 (dilucin 1/20).
Dejar en reposo por 15 minutos en una gradilla.
De esta dilucin, llenar en cmara de Neubauer.
Dejar en reposo por 15 minutos en cmara hmeda.
Enfocar con objetivo de 45x y contar las plaquetas en el retculo central de
1 mm2 cuadrado.
Calcular el nmero total de plaquetas segn la frmula que se lee a continuacin:
RECUENTO DE PLAQUETAS
Resultados
Se aplica la siguiente frmula:
N de plaquetas x mm3 = Plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos
rea mm2 x altura mm x dilucin
N de plaquetas x mm3 = Plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos
1/5 mm2 x 1/10mm x 1/20
N de plaquetas x mm3 = Plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos
1/1000 mm3
N de plaquetas x mm3 = Plaquetas contadas x 1000 / mmm3
Valores de referencia
150 000 - 450 000 plaquetas/mm3
RECUENTO DE
RETICULOCITOS
Fundamento
Los reticulocitos son glbulos rojos inmaduros formados por ARN y protoporfirina en
el citoplasma.
Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se puede
teir con el azul de cresil brillante. Este colorante en combinacin con una
misma cantidad de sangre anticoagulada se mezcla y con la ayuda de la
temperatura (bao mara) se produce la coloracin de estos eritrocitos jvenes
visualizndose en los frotices sanguneos por microscopa
RECUENTO DE
RETICULOCITOS
Materiales
Lminas portaobjetos.
Tubos de ensayos de 12 x 75 mm.
Embudo.
Filtro de papel.
Pipetas Pasteur con chupones.
Contador manual (no imprescindible).
Solucin saturada de azul de cresil brillante (filtrada).
RECUENTO DE
RETICULOCITOS
Procedimiento
En el tubo de ensayo colocar dos gotas de sangre total con anticoagulante.
Inmediatamente adicionar con la ayuda de una pipeta Pasteur la misma
cantidad de colorante.
Mezclar la solucin.
Se coloca luego en bao mara por espacio de 10 a 15 minutos.
Se realizan frotices sanguneos.
Se lee con objetivo de 100x.
RECUENTO DE
RETICULOCITOS
Resultados
Examine por lo menos 100 eritrocitos con el objetivo de inmersin. Cuente
cuidadosamente:
Cantidad total de glbulos rojos.
Nmero total de reticulocitos que haya entre ellos.
El recuento se ha venido haciendo clsicamente de forma manual mediante la
observacin en el microscopio ptico. El resultado se da en porcentaje sobre
cada 100 hemates. Es ms til calcular el nmero de reticulocitos por litro,
mediante la frmula:
Reticulocitos/L = % reticulocitos x nmero hemates/L
100
METODO
AUTOMTICOS
METODOS AUTOMATICOS
METODOS AUTOMATICOS
Objetivos de automatizar
PRACTICABILIDAD
SEGURIDAD
PRODUCTIVIDAD
DISMINUCION DE COSTOS