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Linfcitos B:

Diferenciao e Marcadores Fenotpicos

Profa. Fabiani G
Frantz
frantz@fcfrp.usp.br
Clulas do Sistema Imune

Thymus

MALT/ /Spleen
Bifuncionalidade do Sistema Imune

Patgenos
Tumores
Substncias antignicas no infecciosas
(IgG-IgA/IgE)
Estruturas constitutivas
Medicamentos
Alimentos
Transplantes

Tolerance Immunity
Reconhecimento prprio/no
prprio
Ponto crtico na Imunologia
reconhecimento de antgenos

Anticorpo/Imunoglobu
lina (Ac/Ig) faz parte
do grupo de
molculas que
reconhecem o Ag

-Especificidade
- Diversidade
- Amadurecimento por
afinidade
Molculas que RECONHECEM o Ag

BCR MHC TCR

Ag

Ag
Ag

Linfcitos B APC Linfcitos T


Clulas do Sistema Imunolgico
Reconhecimento
Receptores de Reconhecimento Padro (PRRs)
Resposta imune inata
HSP 60
Fibronectin

Bacteria, Flagellin, NLRs


Toxins,
Uric Acid, ATP, NAD-

Hayden et al., 2006


Receptores de Antgenos de
Linfcitos
Resposta imune adaptativa
BCR TCR

Edelman & Porter (1968)Allison, Reinherz, Kappler & Marrack (1983)


(1983

Dr. Colin R. A. Hewitt


Hewit
eptopos lineares X eptopos conformacionais

BCR

Ag prprio/no
prprio

APC
TCR
(Antigen-
presenting
cells)
A Ig expressa na membrana celular dos
Linfcitos B (BCR) ou secretada pelos
Plasmcitos
A descoberta das clulas B
1954 - Bruce Glick, Ohio State University
Estudos sobre a funo da Bursa de Fabrcius
das aves na produo de anticorpos para
antgenos de Salmonella
Aves normais (c/
Bursa) produzem
anticorpos anti-Ag
de Salmonella

Aves
bursectomizadas
no produzem
anticorpos anti-Ag
de Salmonella
Posteriormente foi descoberto que a Bursa o rgo
linfide responsvel pela diferenciao de clulas
produtoras de anticorpos, que foram denominadas de
Clulas B (Bursa-dependente)
Receptores de Antgenos em
Linfcitos apresenta similaridade
estrutural e gnica
A ontogenia de Linfcitos
TeB

T Cells death

Effector T Cells

Diferenciao Diferenciao Terminal

B Cells death

Krammer, 2000
Clulas B (exceto em aves) so gerados na
Medula ssea

O nicho das
Clulas B

Nagasawa, 2006
Recombinao dos genes da Imunoglobulina
leva o linfcito B express-lo na membrana
(BCR) linfcito B imaturo
Eventos importantes durante a ontogenia dos
Medula ssea/Timo Linfcitos rgos Linfides
Linfcitos Perifricos
Diferenciao/Imaturos Linfcitos Maduros

Local da Infeco
Receptores de Antgenos de
linfcitos e classes de
Imunoglobulinas
BcR

VH

VL

CL

C
Receptores de Ag em linfcitos apresenta grande
diversidade. Como isso possvel?

BCR

TCR

5 x 1013 1018
Gerao de diversidade das
Imunoglobulinas

Genetic Basis of Immunoglobulin


Variability
SussumuTonegawa,
1- Imunoglobulinas 1976
mais de 1013 (Nobel Prize
protenas 1987)
distintas;
2- No genoma teramos no mximo 105 genes;

Concluso:
Impossvel gerar essa diversidade pela gentica convencional (1
gene = 1 protena);

Pergunta: Posso gerar uma grande variabilidade (centenas de


milhes) com algumas centenas de genes?

Recombinao Gnica?
A molcula da Imunoglobulina
codificada
por diversos segmentos de genes
H

V VH VH V
DH DH
J J J J
H H

CL CL
CH CH
Segmentos gnicos que codificam a
molcula da Imunoglobulina/BCR

Nmero de segmentos gnicos


funcionais

250 -
25 2 1000
0 12

4 3 4

Associao 1000 6 10.000


combinatria 40.000
Associao H-L
H+ 1-4 x 107
H+ 5-10 x 104

Repertrio final possvel 1013


A recombinao dos genes da molcula de
Imunoglobulina
(1) Cadeia pesada (2) Cadeia leve

1 2
Seqncia sinalizadora de recombinao (RSS) em
genes da regio vriavel da Imunoglobulina
*Segmento altamente conservado com 7 nucleotdeos (heptmero) ou 9
nucleotdeos adjacente sequencia codificadora, seguida de um espaador,
com 12 ou 23 nucleotdeos. Servem para alinhar os segmentos. A
recombinao s ocorre se um dos segmentos ladeado por um espaador 12
e o outro por um espaador 23 Regra do 12/23
Recombination signal sequences (RSS)

V = uma RSS a 3 na cadeia pesada, RSS de 23


nucleotdeos. Nas cadeias leves, 12pb na Kappa e
23 na lambda
J = uma RSS a 5, na cadeia pesada, RSS de 23
nucleotdeos. Nas cadeias leves, 23pb na Kappa e
12 na lambda
D = uma RSS de 12 nucleotdeos de cada lado
Mecanismos de Recombinao V(D)J
Indico leitura: Nature Reviews Immunology
11, 251-263 (April 2011) |
Gerao de diversidade
Diversidade combinatria
Gerao de diversidade
Diversidade juncional
Animao

Mecanismo de Recombinao
O pre-BCR induz excluso allica e sinaliza
o linfcito para prosseguir diferenciando

Pro-B
Ig Heavy chain
VH H 23 N // N 12 H DH H 12 N // N 23 H JH CH

VH H 23 N // N 12 H DH JH CH

VH DH JH CH

Pre-BCR
VH DH JH CH VH DH JH CH
Pr-B
V pre-B 5

Checkpoint to verify if rearrangement is in frame


Induce allelic exclusion
Signaling pre-T/B cells to survive, proliferate, and differenti

Schlisse, 2003; Melchers, 2005; Hogquist et al.,


Recombinao dos genes de imunoglobulinas e
TCR ocorre apenas em um dos alelos (Excluso
Allica)

Se o processo de recombinao de um dos alelos no


for funcional, o linfcito pode recombinar os genes
A protena IgH( ) funcional induz a
recombinao dos genes IgL ( / )
VH H 23 N // N 12 H DH H 12 N // N 23 H JH CH

VH H 23 N // N 12 H DH JH CH

VH DH JH CH

VH DH JH CH Ig Heavy chain

VL H 12 N // N 23 H JL CL

VL JL CL

VL JL CL Ig Light chain Schlisse, 2003


Linfcitos imaturos expressam receptor para
Ag completo
Recombinao dos genes
Cadeia Leve das Imunoglobulinas
random
Animao

Gerao do repertrio de clulas B


(at clulas B imaturas)
Recombinao dos genes da Imunoglobulina
leva o linfcito B express-lo na membrana
(BCR) linfcito B imaturo
2- Seleo do Repertrio
Animao

Seleo
Seleo dos Linfcitos B ou Induo de
Tolerncia Central

Deleo Clonal
ou Induo de
Seleo Anergia
Seleo dos Linfcitos B ou Induo de
Tolerncia Central
Re-edio da cadeia
leve
Seleo dos Linfcitos B ou Induo de
Tolerncia Central Induo de
Anergia
Reconhecimento fraco

Re-edio da cadeia
leve

Deleo clonal ou Seleo


negativa

Reconhecimento forte
Linfcitos B no sangue e orgos linfides perifricos
Ontogenia das Clulas B
O BCR e co-receptores

CD21
(C3d receptor)
CD45

CD19

Ig Ig
CD81
(TAPA-1)

The B cell co-receptor


https://www.youtube.com/watch?v=JJmqt40Z
3mM

https://www.youtube.com/watch?v=h9mqsllg1
Cs

https://www.youtube.com/watch?v=_D2x-dhh6
Pg