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SDS-PAGE

MARCONI REGO BARROS JNIOR,


Msc
APRESENTAO

Laboratrio de Estudos Moleculares e Terapia Experimental

DOUTORANDO PELO PPGIT (PROGRAMA DE INOVAO


TERAPUTICA) NA REA DE EXPRESSO GNICA EM
GENTICA E IMUNOLOGIA DO CNCER
OBJETIVO
INTRODUO
PRINCPIO DA SDS-PAGE

TIL PARA SEPARAR PROTENAS BASEADA


SOMENTE NO SEU PESO MOLECULAR

O SDS (DODECIL SULFATO DE SDIO) FAZ PARTE


DA COMPOSIO DO GEL

A MATRIZ DO GEL A POLIACRILAMIDA, POIS


QUIMICAMENTE INERTE E PODE SER FEITA EM
VRIAS CONCENTRAES O QUE OFERECE
DIFERENTES TAMANHOS DE POROS DE ACORDO
COM O QUE SE DESEJA SEPARAR
NO ENTANTO, A CARGA LQUIDA DA PROTENA
ASSIM COMO SEU RAIO MOLECULAR (DEFINIDO
POR SUA ESTRUTURA TERCIRIA) E A MAGNITUDE
DO CAMPO APLICADO DEFINEM O MOVIMENTO DAS
MOLCULAS PROTICAS
PRINCPIO DA SDS-PAGE

SDS
tambm
deixa a
superfcie
da protena
linear
negativa

O SDS liga-se
uniformement
e a superfcie
linear da
protena
fazendo com
que a carga
resultante
seja
proporcional a
O SDS, UM DETERTENGE, JUNTAMENTE COM UM POUCO DE EBULIO
ao seu Epeso
UM
AGENTE REDUTOR (DTT OU BETA-MERCAPTOETANOL) molecular
QUEBRAM A
ESTRUTURA TERCIRIA DA PROTENA (TORNAM-SE LINEARES), FAZENDO COM
TAMPES

O SISTEMA DE TAMPES DESCONTNUO, OU


SEJA, SO UTILIZADOS DOIS TAMPES, UM PARA O
TANQUE (CORRIDA) E OUTRO PARA O GEL
PROPRIAMENTE LAEMMLI BUFFER SYSTEM
OOS
GELONS
FORMADO PELO MESMO
CL- CORREM MAIS
TAMPO
RAPIDAMENTE EM DIREO COM
(TRIS-HCL), MAS AO
DOIS pHS ENQUANTO
CTODO, E CONCENTRAES
A GLICINA
DIFERENTES. O PRIMEIRO,
MAIS LENTAMENTE. ISSO FORMA NO
UMA
INCIO ZONA
DA ESTREITRA
CORRIDA, DE
TEM
GRADIENTE DE CARGA
CONCENTRAO ONDE AS
E pH MENORES.
PROTENAS ASSUMEM POSIES
ODIFERENTES
TAMPO NOS ELETRODOS
SENDO SEPARADAS. O
TRIS-GLICINA PH=8.3. NESTE
QUANDO ALCANADA A REGIOPH
ADOGLICINA
GEL COM EST
PH=8.8CARREGADA
A GLICINA
CORRE MAIS
NEGATIVAMENTE, RAPIDAMENTE
O QUE A FAZ
DEIXANDOPARA
MIGRAR AS PROTENAS
A REGIO PARADE
TRS. ESTAS ENTO FICAM NA
TRIS-HCL PH=6.8 QUANDO A
REGIO DE INTERFACE ENTRE OS
FONTE LIGADA.
GIS COM PH=6.8 ENESTE REGIO
8.8, ALM DO
AQUE
GLICINA
A TORNA-SE
CONCENTRAO NEUTRA DE E
PORCENTAGEM DE ACRILAMIDA E PESO
MOLECULAR
AAAAAAAAA

AAAAAAA

Oncogene
com sua
funo
regulada
normalment
MUTAO ATIVADORAS DE GANHO DE FUNO DE UM
e
ALELO DE UM PROTOONCOGENE

AAAAAAAAAAA

AAAAAAAAAA
VANTAGENS:

UMA TCNICA SIMPLES, RPIDA E BASTANTE


ACESSVEL
NO NECESSITA UTILIZAO DE MARCAO
RADIOATIVA OU NO-RADIOATIVA

GERA UMA GRANDE QUANTIDADE DE POLIMORFISMOS


O HER2
funciona
como O gene HER2
biomarcador codifica um
prognstico receptor que
e para regula
conduta positivamente a
teraputica proliferao celular
em resposta a
estmulos
fisiolgicos.
Quando mutado
gera uma protena
que
permanentemente
ativa induzindo a
proliferao celular
EM CLULAS TUMORAIS DE MAMA MLTIPLAS CPIAS sem
DESTE GENE
controle.
OBSERVADO, PODENDO EXISTIR COMO DOUBLE MINUTES
(PEQUENOS CORPOS DE CROMATINA PAREADOS SEPARADOS DOS
CROMOSSOMOS) OU COMO INSERES DENTRO DOS
CROMOSSOMOS NORMAIS (REGIES CORADAS HOMOGENEAMENTE)
PCR: AMPLIFICAO DO DNA

CHARGAFF:
A quantidade de bases esto
relacionadas: A = T e C = G

Foto 51 (1952)
FRANKLIN, ROSALIND; WILKINS,
MAURICE
E pensar que Rosie teve todas
aquelas imagens em 3D por nove
meses e no viu uma hlice.
Cristo.
CNCER DE MAMA TAMBM OCORRE DEVIDO A
AUSNCIA DE ATIVIDADE DE GENES SUPRESSORES,
COMO O BRCA
2 ou mais
parentes de 1 ou
2 grau, cncer
antes dos 50 anos;
um ou mais
parentes com dois
tumors (mama e
ovrio); parentes
masculino com o Mutaes em
O BRCA
cncer de inibe
mama. genes de baixa
a transcrio
penetrncia
de genes
acumulam-se
regulados
para ocorrncia
pelo receptor
deste cncer!
de
estrognio.

Quando ocorre mutaes em genes de alta penetrncia como o


BRCA1 e 2 estas por si s isoladamente so capazes de gerarem o
cncer, sendo a probabilidade de ocorrncia em cerca de 55 e 85%
nos casos de mutao em BRCA1 e 37 e 85% para mutao no
As protenas BRCA participam da regulao transcricional, do
BRCA2.
reparo das leses ao DNA, sendo fundamental para estabilidade
genmica, alm do controle da proliferao e diferenciao
DVIDAS?
CONTATO

MARCONIJRR@GMAIL.COM