Los hongos endofticos albergados en Panax

notoginseng: diversidad y potencial como agentes

de control biolgico contra patgenos de plantas
husped de la enfermedad de la podredumbre de
las races
Willington Mendoza Uribe
Panax notoginseng
-Panax notoginseng
es una planta
herbcea perenne,
cultivada
principalmente en
Wenshan, Yunnan,
China,

-Se ha utilizado
histricamente como
una hierba medicinal
y en la alimentacin
Enfermedad de
podredumbre de las
races
Ms destructivo pues da
lugar a la reduccin del
rendimiento, a la cosecha, o
al bajo contenido de
ingredientes activos
 Los patgenos fngicos notificados que causan la
pudricin de las races incluyen Alternaria panax,
Alternaria tenuissima, Cylindrocarpon destructans,
Cylindrocarpon didynum, Rhizoctonia solani,
Phytophthora cactorum, Phoma herbarum,
Fusarium solani, Fusarium oxysporum y Fusarium
flocciferum
Endfitos

produccin de metabolitos secundarios

bioactivos, promover la germinacin y el
crecimiento de los brotes
 En el presente estudio se investig la diversidad
fngica endoftica de Panax notoginseng sano y se
evalu su potencial actividad antimicrobiana
frente a cinco principales fitopatgenos causantes
de enfermedad de la podredumbre de las races
de Panax notoginseng.
Materiales y mtodos
Aislamiento de hongos endofticos
Se recolectaron muestras de plantas de P.
notoginseng de tres aos de edad procedentes de
una plantacin de Wenshan, Yunnan, Suroeste de
China. Las plantas recogidas se escindieron en
races, tallos, hojas y semillas
La esterilizacin superficial y el aislamiento de los
endfitos fngicos se llevaron a cabo siguiendo
los procedimientos descritos por Park et al
 Siembra en profundidad en placas
de Petri que contenan agar (PDA)
con 100 mg / l de ampicilina para
inhibir el crecimiento bacteriano.
Las placas de Petri se incubaron a
28 C hasta que comenz el
crecimiento de hongos.
Control: se coloc una alcuota de
0,1 ml del agua utilizada para la
ltima etapa de lavado en placas
PDA suplementadas con 100 mg / l
de ampicilina y se incub en las
mismas condiciones en paralelo.
 Cada colonia que emergi de los fragmentos se
transfiri a un medio PDA libre de antibiticos
(figura 1B), para subcultivo, y se introdujo en
cultivo puro.
 Extraccin de ADN fngico, amplificacin por
PCR y secuenciacin
 Anlisis filogentico de los hongos
endofticos

GENBANK:
KP714353e
KP714393
 Fitopatgenos utilizados para ensayos
antagnicos

Alternaria panax,
Fusarium oxysporum,
Fusarium solani,
Phoma herbarum
Mycocentrospora acerina
 Actividad antagonista in vitro
contra los fitopatgenos
huspedes
Cultivo inclinado bien crecido de cada
hongo se utiliz para cultivo lquido en
medio de caldo de dextrosa de papa
(frascos de 50 ml / 250 ml).
Los matraces se incubaron a 28 C en
un agitador a 180 rpm durante 7 d. El
caldo de cultivo se filtr a travs de
papel blotting y el sobrenadante se
separ.
El sobrenadante se extrajo tres veces
con acetato de etilo (EtOAc). El micelio
hmedo se extrajo dos veces con
acetona. Despus de separar la
acetona en un vaco rotatorio, el
residuo alcuota se extrajo tres veces
con EtOAc.
 Combinaron los extractos de EtOAc del
sobrenadante y el micelio, la fase orgnica
se sec sobre Na2SO4 (anhidro).
Los extractos se concentraron entonces
en un vaco rotatorio..
El efecto inhibitorio de los extractos de
EtOAc obtenidos de hongos endofticos se
prob utilizando la tcnica de doble capa
de agar.Los extractos brutos se disolvieron
en 1,0 ml de etanol como solucin madre.
Se pipete un volumen de 100 ml de la
suspensin de extracto de etanol en cada
orificio. Las placas de ensayo se incubaron
a 28 C, y los dimetros de las zonas de
inhibicin se midieron despus de 24 h. Se
utiliz el mismo volumen de etanol como
control negativo.
Resultados
Anlisis filogentico de los hongos
endofticos
Un total de 89 hongos endofticos fueron aislados
de las races, tallos, hojas y semillas de plantas
notoginseng sanas.86 pertenecan al filo
Ascomycota, y tres a Zygomycota
41 morfotipos fueron reconocibles sobre la base
de sus caractersticas morfolgicas.
Todos los aislados se clasificaron en 12 rdenes
(Capnodiales, Chaetothyriales, Diaporthales,
Eurotiales, Glomerellales, Helotiales, Hypocreales,
Microascales, Mucorales, Pleosporales,
Sordariales, Xylariales),
 23 gneros (Acremonium, Alternaria, Arthrinium,
Aspergillus, Botryotinia, Chaetomium,
Cladosporium, Colletotrichum, Dictyosporium,
Fusarium, Humicola, Ilyonectria, Mucor,
Myrothecium, Penicillium, Periconia,
Pestalotiopsis, Phialophora, Phoma, Phomopsis,
Plectosphaerella, Thielavia y Trichoderma)
 Anlisis de distribucin fngica
El nmero de aislados obtenidos de diferentes tejidos
de P. notoginseng vari de 12 a 42 para las hojas y
races, respectivamente
Races: 16 gneros y un taxn desconocido, y los
gneros Fusarium, Cladosporium y Penicillium fueron
los grupos dominantes
Semillas: 19 aislamientos: 9 gneros. Se obtuvieron
ocho hongos genricos (16 aislamientos) a partir de
tallos.
El gnero Alternaria fue dominante en semillas y
tallos.
Hojas: fue la menor, con slo 12 aislamientos :4
gneros.
 Ensayo de antagonismo de endfitos
fngicos como potenciales agentes de
biocontrol
Veinte de los 41 aislamientos (63,4%) presentaron
actividad contra al menos uno de los patgenos
ensayados. La mayor frecuencia (16 aislados,
39,0%) fue contra el patgeno A. panax, seguido
por F. solani (15 aislamientos, 36,6%), F.
oxysporum (14 aislamientos, 34,1%), Phoma
herbarum (12 aislamientos, 29,3% ) Y M. acerina
(7 aislamientos, 17,1%), respectivamente.
 Se hall que cinco aislados, PH30409, PH30412,
PH30414, PH30441 y PH30444 inhiban todos los
patgenos ensayados, implicando que tenan un
amplio espectro de actividad antagonista. Los
Aislados, PH30409, PH30414, PH30420, PH30424
y PH30441 exhibieron efectos inhibidores
relativamente fuertes contra los patgenos F.
oxysporum, F. solani y Phoma herbarum.
Discusin
los mecanismos implicados en el control biolgico
de los hongos endofticos contra los fitopatgenos
incluyen la antibiosis, la competencia por los
nutrientes y el espacio, la induccin de la
respuesta de defensa y el micoparasitismo. Los
aislados endofticos pueden usarse para analizar
su actividad antagonista por fermentacin en
diferentes medios en trabajos adicionales