REPLICACIN DEL ADN

Temas
-Replicacin
 Generalidades
Cuando una clula se divide, se originan dos nuevas clulas con
igual composicin gentica gracias a que cada una de ellas recibe
una copia del material gentico original. Por lo tanto, antes de
dividirse, la clula debe copiar o replicar su ADN y de esta manera
cada clula hija recibe un duplicado del material gentico.
En el perodo S ocurre la replicacin del ADN. Para que este
proceso se realice, es necesario:
1. Una hebra de ADN patrn o molde.
2. Enzimas que aceleren y regulen el proceso.
3. ATP que aporta la energa.
4. Molculas de los cuatro tipos de nucletidos que constituirn el
nuevo ADN.
Durante la interfase, el ADN junto con las protenas histonas
forman la cromatina. Mientras el ADN est condensado no se
replica, por lo tanto, el ADN se debe separar transitoriamente de
las histonas para permitir la replicacin. Este proceso es
bidireccional, semiconservativo y semidiscontinuo.
El proceso de replicacin, duplicacin o sntesis del DNA permite
que las clulas, a travs de la mitosis, hereden ms o menos el
mismo y material gentico que su clula madre. Este hecho es
altamente importante, pues permite no solo la herencia desde una
clula a la siguiente, sino que tambin hacia las siguientes
generaciones.
El mecanismo que sigue a la replicacin del DNA puede variar en
algunos aspectos entre diferentes linajes de seres vivos. No
obstante, las principales caractersticas de este proceso son
comunes. En la hiptesis semiconservativa, formulada por
Watson y Crick, la doble cadena de DNA se abre y cada cadena
simple sirve como molde para originar una nueva hebra, por lo tanto
dos hebras por molcula de DNA. La formacin de las nuevas
hebras se realiza a travs de la sntesis de DNA por
complementariedad de bases respecto de la hebra molde. As, en la
replicacin se originan dos dobles hebras , en cada una de ellas es
posible encontrar una hebra antigua y una hebra nueva. Este
modelo de la replicacin del DNA fue posteriormente confirmado por
experimentos realizados por Meselson y Stahl, en 1957. Hoy en
da este modelo es universalmente aceptado.
TRABAJO EXPERIMENTAL DE MESSELSSON y STAHL

Probando el modelo de replicacin:

M. Meselson y F.W. Stahl, realizaron la siguiente
investigacin: Hicieron crecer bacterias Escherischia coli en
un medio mnimo de cultivo que contena: glucosa, sales
minerales sin Nitrgeno y Cloruro de Amonio, NH4Cl , en el
cual casi todos los tomos de Nitrgeno eran de N15, que
es un istopo pesado del N14 que es ms liviano. Se
permiti que las bacterias crecieran hasta la dcima cuarta
generacin con N15. a partir de lo que se haba utilizado.
Por lo tanto prcticamente todo el ADN de estas bacterias
contena N15.
La clave del xito de esta investigacin est en la Tcnica
Experimental.
Cuando una solucin de cloruro de cesio se centrifuga en una
ultracentrfuga a 14.000 veces la Fuerza de Gravedad, se puede
hacer que las molculas de este compuesto, comiencen a
sedimentarse(se van al fondo), pero nunca completamente,
establecindose una gradiente de densidad (alta en la parte
inferior y baja en la superior)
Cualquier molcula extraa centrifugada en esta solucin
permanecer a un nivel en el cual su densidad ser igual a la
solucin que la rodea.
Por ejemplo al centrifugar bacterias con su ADN formado con
N14, quedara en la superficie y ADN con N15 quedara en la
parte inferior.
Despus de tener bacterias que haban crecido en un medio con
N15, las trasladaron a otro medio con N14 y las dejaron
reproducirse una vez ms(una duplicacin de su DNA, as las
nuevas molculas de DNA as obtenidas, seran hbridas si la
duplicacin es semiconservativa y al centrifugar tendran que
quedar en la solucin de cesio, en una banda intermedia.
Los resultados experimentales apoyaron la hiptesis de
Watson y Crick.
 SNTESIS DEL ADN
La replicacin del DNA es posible gracias a la actividad de una enzima
denominada DNA polimerasa. Esta enzima aade nuevos nucletidos a
la hebra naciente, requiriendo para ello de un grupo hidroxilo (OH) 3 libre
en un nucletido localizado en la nueva hebra. El extremo 3 libre es
aportado por una corta secuencia de ribonucletidos, complementaria a
una regin del DNA, que se conoce como ARN cebador, partidor o
primer.
La cadena nueva de DNA crece en sentido 5 a 3 , mientras que la
enzima lee la hebra molde de 3 a 5 . Cada nuevo nucletido incorporado
aporta un nuevo extremo 3 libre y se aade siguiendo las reglas de
complementariedad de bases, es decir, frente a cada adenina, timina,
guanina o citosina, en la hebra molde, se aade una timina, adenina,
citosina o guanina, respectivamente, en la nueva hebra.
Trabajos realizados con cromosomas bacterianos permitieron revelar la
existencia de un orgen de replicacin, que corresponden a un punto en
dichos cromosomas donde se inicia este proceso. En ete punto, la doble
hebra de DNA se abre, separndose ambas cadenas y originando el ojal
o burbuja de replicacin. En cada extremo de este ojal se forman las
horquillas de replicacin.
Las cadenas de DNA son antiparalelas, es decir, la direccin 5
a 3 de una hebra respecto a la otra es inversa. As, mientras
se abre la horquilla de replicacin, la enzima DNA polimerasa
puede trabajar continuamente, leyendo la hebra molde que se
abre en la direccin 3 a 5, pero no la hebra paralela que lo
hace desde 5 a 3 . Esto constituy un dilema hasta que el
cientfico Reiji Okazaki descubri que en la hebra que se
abra en direccin 5 a 3 la replicacin se desarrollaba de
manera retrasada, a saltos, a medida que la horquilla se abra.
Para esto, molculas de ARN cebador se adicionan
continuamente a la hebra que se abre en sentido 5 a 3 ,
denominada hebra retrasada. De esta manera, en la hebra
retrasada, el proceso de replicacin se realiza
discontinuamene, travs de la sntesis de pequeos
fragmentos de DNA llamados fragmento de Okazki. Una vez
completada la replicacn de la hebra retrasada, una enzima
llamada DNA ligasa une los diferentes fragmentos.
El proceso descrito anteriormente es bidireccional,
pues por cada ojal de replicacin hay dos horquillas
de replicacin, cada una avanzando en direccin
opuesta. La enzima helicasa separa ambas
hebras. Este desenrollamiento provoca a su vez
superenrollamiento en los extremos de la horquilla
de replicacin. Otro par de enzimas, llamadas
topoisomerasas, liberan esta tensin al cortar y
luego reunir la doble hlice. Otra ezima, primasa,
sintetiza los fragmentos de ARN que sirven como
cebadores. Un conjunto de protenas, llamadas
estabilizadoras, mantienen separadas ambas
hebras de DNA.
 PROCESO DE REPLICACIN, PASO A PASO.
1. Se separan las cadenas de nucletidos debido a la ruptura de los
puentes de hidrgeno que unen sus bases nitrogenadas. A medida
que ambas cadenas se separan, cada una acta como molde o
gua para la sntesis de una nueva cadena complementaria. Esto
determina que la replicacin sea semiconservativa, debido a que
cada una de las dos molculas sintetizadas conserva slo una de
las hebras del ADN original.
2. El lugar donde se inicia la replicacin se llama orgen de la
replicacin. Es una secuencia de nucletidos a la que se unen
protenas especficas que marcan el lugar donde sern reclutadas
las enzimas que iniciarn el proceso. En el ADN de eucariontes
existen muchos origenes de replicacin, mientras que en las
procariontes hay slo uno.
3. Al separarse las cadenas se forma la horquilla de replicacin,
estructura dinmica en forma de Y que se desplaza a lo largo de
la molcula de ADN junto a las enzimas que catalizan la
replicacin. La replicacin es bidireccional, ya que desde cada
inicio de replicacin se generan dos horquillas que se mueven en
direcciones opuestas.
4. Se observa una burbuja de replicacin formada por las dos
horquillas que avanzan en direcciones opuestas. En ella, las
enzimas especficas van incorporando selectivamente los
nucletidos que complementan las bases nitrogenadas de la
cadena que sirve de gua o de molde. La elongacin de la nueva
cadena complementaria siempre ocurre en direccin 5 a 3,
ya que la polmerizacin o adicin de nuevos nucletidos slo
puede ocurrir en el extremo 3 OH libre del extremo de la cadena.
5. Como las cadenas son antiparalelas, una vez formada la horquilla
solo una de las hebras permite que el nucletido complementario
incorprado deje su extremo 3- OH libre en la direccin de la
elongacin, permitiendo que la cadena sea sintetizada sin
interrupciones a medida que se abre la horquilla; a esta se le llama
hebra continua, adelantada o conductora. A la cadena
complementaria, la que tiene 5-P libre, se le conoce como
discontinua o retrasada porque se replica en fragmentos cortos
(fragmentos de okazaki), que luego sern unidos por enzimas.
Es por esto que la replicacin es semicontinua.
6. Cuando las enzimas encargadas de la replicacin llegan
cerca de los extremos de la cadena molde, se encuentran
con una secuencia de trmino, que indica el final del
proceso. En sistemas con mltiples orgenes de replicacin,
las horquillas terminan secuencialmente y los fragmentos son
unidos por enzimas similares a las que unen los fragmentos
de okazaki.

7. Luego de la replicacin hay dos molculas de ADN idnticas,

cada una de ellas formada por una cadena de la molcula
original y por una cadena nueva, sintetizada a partir de la
unin de nucletidos ordenados segn la secuencia de bases
nitrogenadas de la cadena molde.

8. Cada molcula de ADN, resultante de la replicacin, se

convertir en una de las dos cromtidas que formarn un
cromosoma durante la mitosis.
Evaluacin: Con tu compaero y en
una hoja de cuaderno con sus
nombres, responde las preguntas de
Explica de la Pgina 25 del Libro
Gua, se entrega al final de la hora :
 ACCIN ENZIMTICA DE LA REPLICACIN
Debido a su accin cataltica, las enzimas aumentan la rapidez del proceso
de replicacin, las que participan en esto son:
1 ADN helicasa: rompe los puentes de hidrgeno, separando las cadenas
de ADN.
2 Protenas de unn a cadena simple (SSB): mantienen separadas las
cadenas simples de ADN que se generan producto de la accin de la
helicasa.
3 ADN primasa: sintetiza pequeos fragmentos de ARN (cido ribonucleico)
denominados cebadores o primer, que proveen las secuencias de inicio
necesarias para comenzar a aadir los nucletidos de las cadenas nuevas.
4 ADN polimerasa: encargada, principalmente, de unir los nucletidos segn la
complementariedad de las bases (A T; C G). En procariontes, esta enzima
une 500 nucletidos por segundo, y en eucariontes, unos 50. Debido a la
especificiad de sustrato de las enzimas, la fidelidad del proceso de replicacin
es muy alta, estimndose que solo se produce un error cada 109 pares de
bases aadidas. La ADN polimerasa tambin contribuye con esto, ya que tiene
actividad como exonucleasa, es decir, corrige sus propios errores eliminando
los nucletidos mal apareados.
5 ADN ligasa: encargada de unir los fragmentos de la cadena retrasada.
6 Topoisomerasa o girasas: desenrollan las hebras de ADN.
Evaluacin: Con tu compaero
y en una hoja de cuaderno con
sus nombres, responde las
preguntas de Interpreta de la
Pgina 26 del Libro Gua, se
entrega al final de la hora.