ENZIMAS COMO CATALIZADORES COFACTORES COENZIMAS COFACTORES CINETICA ENZIMATICA CINETICA ENZIMATICA COMPLEJO ENZIMA - SUSTRATO ENZIMAS : CATALIZADORES BIOLOGICOS APLICACIONES INDUSTRIALES DE LAS ENZIMAS OTRAS APLICACIONES Mtodos de Purificacin de las Enzimas Para fines cientficos es importante purificar un preparado de enzimas para llegar lograr extraer las enzimas indeseables. Cada tipo de enzima y tejido requieren un tipo de tratamiento distinto. Algunos mtodos que se utilizan son la precipitacin fraccionada, la dilisis y la precipitacin mediante el calentamiento moderado, con algn acido o con concentraciones de alcohol o acetona. (1L) Mtodos de purificacin de las Enzimas Para la realizacin de la pureza de una enzima es necesario realizar la tcnica de purificacin de una protena algunas de estas son: el anlisis por ultracentrfuga, el electrofortico y otros pero se debe tomar en cuenta que durante este transcurso se llegan a perder gran parte de ella. Mtodos de purificacin de las Enzimas
Tambin este se puede realizar mediante el
sometimiento de la enzima a fraccionamientos sensitivos como en el caso de la electroforesis en gel de almidn o de acrilamida y as demostrar que la enzima como tal est compuesta por varias protenas, y que algunas presentan la misma actividad enzimtica pero a causa de la sus estructuras y propiedades distintas se les consideran isoenzimas. Mtodos de purificacin de las Enzimas
En general, la absorcin de una enzima es fcil debido
especficamente, por su sustrato, de manera que este sea insoluble en la solucin de la enzima empleada. Tal nocin no ha tenido una gran practica, tal vez a causa de que la enzima se libera de una manera constante en relacin de la descomposicin del sustrato. A pesar de todo, recientemente se ha realizado con gran xito la absorcin de amilasa por almidn en una Mtodos de purificacin de las Enzimas
Uno de los procedimientos para la purificacin de
enzimas es la absorcin, estas al igual que otras protenas son absorbidas muy fcilmente por sustancias inorgnicas como los hidrxidos frrico y alumnico coloidales. La sustancia absorbida se lava ya sea con agua o con una sal apropiada para poder llegar a eliminar ms impurezas y por ltimo la enzima es separada de su absorbente por elucin con lcali diluido o con alguno que reacciones con la superficie del absorbente. Purificacin de las enzimas
La purificacin de las enzimas se realiza a una baja
temperatura para as disminuir la perdidas por desnaturalizacin en algunos casos esta puede ser calentada durante unos minutos ms sin embargo este no tendr ninguna prdida de su actividad enzimtica. Existe tambin el proceso de electroforesis que consiste en la aplicacin de un campo elctrico a la solucin. (2) Purificacin de las enzimas
La precipitacin de las enzimas es un proceso de
purificacin de las enzimas el cual requiere de muchos procedimientos. Como el cambio de pH el cual remueve las nucleoprotenas y el material grueso, con este, es posible continuar con los dems pasos. Con la utilizacin de la temperatura en muchos casos ocurre la desnaturalizacin el material proteico inactivo. En diversos casos se utilizan solventes orgnicos como Purificacin de las enzimas La absorcin Fraccional es de gran utilidad por que permite la absorcin de la enzima y luego desprenderla del material de una forma ms pura. Esta es agregada a un material activo en donde la enzima es fijada, esta es lavada con soluciones de sales las cuales son recogidas en fracciones de volumen en donde alguna porcin la enzima sale de una forma ms pura. Purificacin de las enzimas
Se encuentra la Cristalizacin, este procedimiento debe
repetirse varias veces debido a que los primeros cristales algunas veces suelen estar contaminados con otras enzimas. Esto demuestra que la obtencin de cristales no es 100% pura es solo la repeticin de este procedimiento es el que garantiza que se da la pureza. Purificacin de las enzimas
Para saber exactamente si en se da la pureza absoluta
existen otros procesos que pueden obtenerse por medios fsicos como los son la electroforesis, sedimentacin en ultracentrfuga, la cromatografa y la determinaciones de solubilidad. Purificacin de las enzimas
Aun sabiendo que las propiedades de las enzimas
pueden llegar a ser muy diferentes es necesario tener preparaciones puras para poder hacer el estudio completo de su actividad. Hoy en da se ah llegado a cristalizar o purificar de una manera correcta, cerca de unas 200 enzimas, y es posible que en unos aos ms, esto llegue a aumentar considerablemente.