MODULACIN TRMICA EN

COLUMNA LONGITUDINAL PARA

UNA CROMATOGRAFA LQUIDA
BIDIMENSIONAL COMPLETA
Daniela Cifuentes
Mayerli Tello
INTRODUCCIN

La modulacin es el proceso central en

cualquier separacin cromatogrfica completa
bidimensional

El modulador recoge consecutivamente y

sistemticamente analitos mientras son eluidos
de la columna de la primera dimensin y los
entrega a la columna de la segunda dimensin.
 Hay muchas posibilidades de modulacin para la
cromatografa de gases bidimensional (GC GC)
completa, pero no se ha demostrado la cromatografa
lquida bidimensional completa (LC LC) en modo
online sin el uso de vlvulas de conmutacin.
INTRODUCCIN

Una columna trampa ofrece un mecanismo de enfoque;

Sin embargo, el reequilibrio de la columna de trampa
no siempre se alcanza y la eficiencia de compresin de
banda se reduce a lo largo del anlisis

En los moduladores LC LC basados en vlvulas, se ha

demostrado que la dilucin del disolvente es un
mtodo eficaz para enfocar activamente.

La dilucin del efluente 1D permite una mejora del

enfoque en columna online en la cabeza de la columna
2D o en la columna trampa.
 El enfoque adoptado en este trabajo est inspirado en
el sistema criognico modulado longitudinalmente
(LMCS) desarrollado por Marriott y Kinghorn para la
modulacin GC GC y el modulador de ciclos trmicos
para LCx LC offline por
Vertstraeten et al.

En este trabajo, exploran la posibilidad de emplear la

modulacin trmica longitudinal on- columna (LOCTM)
utilizando el calentamiento resistivo LTM para LC LC,
utilizando su desempeo hacia un conjunto de
alquilfenonas como prueba de concepto.
 Reactivos: Alquilfenonas, propiofenona, Butirofenona Y
valerofenona son preparados a 500 g /ml de soluciones
madre en 100% Metanol. Los estndares se diluyeron a 50
g / ml con 100% Agua para anlisis.
La fase mvil era agua Y metanol ambos Con cido frmico al
0,1%
El vino tinto se compr en una tienda local.
 Modulador: Columna de trampa de 0,8 mm , empaquetado
con partculas de carbono graftico poroso
Mango de baja masa trmica(LTM): Resistivamente
calentado.
Se utiliz un sistema criognico modulado longitudinalmente
modificado para contener el mango (LTM).
Chorros fros para disminuir la temperatura a condiciones de
captura. Se pas aire comprimido(6 bar) a travs de un bao
de hielo, se divide en dos chorros y se dirige a dos posiciones
en la columna de trampa del modulador.
 Instrumentacin y mtodos: modulador de vlvulas,
equipada con dos bucles de 60 L en una configuracin de
flujo en contracorriente.
El detector de red de diodos
El volumen de inyeccin fue de 1,5 l de patrones de 50 g /
ml y 5 l para el anlisis de vino tinto.
Primera columna: a un caudal de 0,025 ml / min con un
gradiente de 55 a 85% de B de 15,5 a 150 min (para
alquilfenonas) y 5-80% de B de 15,5 a 215,5 min (para
separacin de vino tinto)
Segunda columna: era una tubera de titanio (0,3 mm x 34
mm) envasada con partculas PGC.
RESULTADOS Y DISCUSIN
FIGURA 2. TASA DE ENFRIAMIENTO EXTERNO EN (A) ENTRADA Y (B) SALIDA DE LA COLUMNA DEL PURGADOR
DEL MODULADOR. EL IMPACTO DEL ENFRIAMIENTO ACTIVO ES VISTO POR EL RASTRO NEGRO, ROJO Y AZUL Y
EL ENFRIAMIENTO PASIVO POR EL RASTRO AMARILLO, VERDE Y ROSADO. LAS POSICIONES 1-6 SE ILUSTRAN
EN LA INSERCIN DE LA TRAMPA DEL MODULADOR A LA DERECHA. LA CMARA DE INFRARROJOS (FLIR E40)
REGISTR DE -10 A 120 S DESPUS DE QUE EL MANGUITO DE CALENTAMIENTO, MANTENIDO A 200 C, SE
ALEJ DE LA POSICIN DE MEDICIN. EL MANGUITO DE CALENTAMIENTO SE HABA MANTENIDO EN LA
POSICIN DE MEDICIN DURANTE 600 S ANTES DE REGISTRAR LAS VELOCIDADES DE ENFRIAMIENTO. PARA
EL ENFRIAMIENTO ACTIVO, LOS CHORROS FROS, ~ 13 C, SE DIRIGIERON A LAS POSICIONES 1 (PARA
REFRIGERACIN EN LA ENTRADA) Y 4 (PARA REFRIGERACIN EN LA SALIDA).
TABLA 1. DEPENDENCIA DE LA TEMPERATURA DEL FACTOR
DE RETENCIN DE ALQUILFENONA Y VELOCIDAD DEL
ANALITO EN LA COLUMNA DE TRAMPA PGC.
FIGURA 3. OPTIMIZACIN DE LA MODULACIN MOSTRANDO EL PICO DE ELUCIN EN EL PERODO DE MODULACIN DE
60 S PARA ACETOFENONA (VERDE), PROPIOFENONA (NARANJA), BUTIROFENONA (AZUL) Y VALEROFENONA (ROSA). LAS
LNEAS VERTICALES PUNTEADAS MUESTRAN CUANDO EL MANGUITO DE CALENTAMIENTO (200 C) FUE MOVIDO A LO
LARGO DE LA COLUMNA DE TRAMPA Y LA FLUCTUACIN DE PRESIN ASOCIADA (NEGRA) DEBIDO AL CAMBIO DE
TEMPERATURA. LOS ANALITOS SE INYECTARON INDIVIDUALMENTE EN EL MODULADOR CON EL MANGUITO DE
CALENTAMIENTO EN LA POSICIN DE SALIDA DE 0 A 30 S, EN LA POSICIN DE ENTRADA DE 30 A 60 S, Y DE NUEVO A LA
POSICIN DE SALIDA DE 60 A 90 S (CUANDO EL PICO SE REQUIERE PARA SER ELUIDO). ESTO SE REPITI HASTA 5 MIN (5
CICLOS DE MODULACIN). OBSERVE EL TIEMPO DE VACO DE 12 S ENTRE LA TRAMPA Y EL DETECTOR.
TABLA 2. TABLA DE PUNTAJES DEL PERODO DE
MODULACIN, EFECTO SOBRE LA ELUCIN DE
ALQUILFENONA
FIGURA 4. CROMATOGRAMA EN BRUTO DE BUTIROFENONA QUE
MUESTRA EL NMERO DE CORTES DEL PICO 1D CON UN
PERODO DE MODULACIN DE 60 S
 Teniendo en cuenta que las columnas de esta
configuracin estn conectadas en serie, la alta fuerza
eluotrpica provoca el descubrimiento y el muestreo
incompleto de los picos de la primera dimensin,
mientras que una fase mvil que es demasiado dbil
inducir un envolvimiento y una retencin excesiva
FIGURE 5. SEPARATION OF ALKYLPHENONES USING (A)
LONGITUDINAL ON-COLUMN THERMAL MODULATOR
AND (B) VALVE MODULATOR.
 VENTAJAS DE LA MODULACIN TRMICA:

Una ventaja de la modulacin trmica son las

fluctuaciones de presin minimizadas.

El ruido de lnea de base resultante, como un efecto de

cambio en el ndice de refraccin de la fase mvil
observado por el detector, se traduce en mejorada
seal-ruido por un factor de hasta 14 para el
modulador trmico.
FIGURA 6. SEPARACIN DEL VINO TINTO EN (A) MODULADOR
TRMICO Y (B) MODULADOR DE VLVULAS. LOS PICOS
NUMERADOS SE CONSIDERAN PARA LA COMPARACIN DE
ANCHO DE PICO EN LA SEGUNDA DIMENSIN (TABLA 3).
TABLA 3. ANCHOS DE PICO, CON INTERVALO DE CONFIANZA
DEL 95% (N = 3), EN LA SEGUNDA DIMENSIN PARA LA
MODULACIN TRMICA Y VALVULAR LONGITUDINAL DEL VINO
TINTO.
ASPECTOS NO IDEALES EN LA
IMPLEMENTACIN DEL MODULADOR:

naturaleza discriminante de la columna de trampa

la velocidad del ciclo de modulacin.
Un tercer defecto es la acumulacin de presin, que
restringe la seleccin de la columna y los caudales
 CONCLUSIONES
Los cambios rpidos y grandes de la retencin del analito y la
velocidad de migracin en la trampa del modulador a las
temperaturas de captura y removilizacin son parmetros crticos.
El reconocimiento de un modulador activo de doble etapa es de
suma importancia para el rendimiento de la cromatografa lquida
bidimensional.
La separacin por cromatografa lquida bidimensional del vino
tinto utilizando el modulador trmico en columna longitudinal,
logr hasta 60% de bandas ms estrechas de picos discretos en la
segunda columna en comparacin con el modulador de vlvulas.
GRACIAS!!