ELECTROFORESIS

DE LIPOPROTEINAS:
ASPECTOS TECNICOS
Y APLICACIONES
CLINICAS

BIOL. CARLOS BEJAR LOZANO

Jefe del Departamento de Inmunologa
Servi-Med Servi-Med Laboratorios Clnicos
Laboratorios Clnicos
 EVOLUCION BIOLOGICA Y
Servi-Med Laboratorios Clnicos

EVOLUCION CULTURAL

Diabetes
Dislipidemia
Hipertensin
Sedentarismo
 OBESIDAD: Cuestin cultural ?
Servi-Med Laboratorios Clnicos

Cuestin de pases desarrollados ?

Cuestin gentica ? o TODO..?

Mxico disputa el
Primer Lugar 2013
en Obesidad en
el Mundo.

Importante un
Sistema de Clasificacin
Medicin y seguimiento
en dislipidemias.
 CLASIFICACION
Servi-Med Laboratorios Clnicos

SOBREPESO / OBESIDAD

Si David hubiera viajado a EEUU

I.M.C. = Kg peso (Altura m)2

Mi IMC: 84.0 kg (1.80)2

84.0 3.24 = 25.9

Si Lincoln hubiera tenido pc

 FACTORES DE RIESGO
VIEJOS Y EMERGENTES

Sndrome
metablico

Sndrome Metablico / Sndrome de Resistencia a la Insulina

Dislipidemia Hipertensin Diabetes
 LOS AVANCES DE LA
CARDIOLOGIA MODERNA

- Desfibrilador (60s)
- Unidad Coronaria (80s)
- Betabloqueadores Era de Reperfusin (80s)
Trombolisis + Stents
Disminucin de Mortalidad
Intrahospitalaria

NO PREVIENEN TRATAN DE CORREGIR EL DEFECTO.:!

 MORBILIDAD Y MORTALIDAD
ASOCIADA A DISLIPIDEMIAS
Cada hora mueren 7 personas en Mxico por
infarto, de los que el 70 % est relacionado
con dislipidemias e hipertensin.
http://www.invdes.com.mx/anteriores/Abril2001/htm/infarto.html

Es la tercer causa de muerte en Mxico,

despus de diabetes y cncer.
http://sinais.salud.gob.mx/mortalidad/tabs/m_009.xls

Se estima que al menos un tercio de la

poblacin mexicana tiene algn grado de
obesidad y dislipidemia, muchos de ellos
asociados a diabetes.
Como medida de control de factores de
riesgo, se debe controlar el nivel de
lpidos, as como otros factores de riesgo
asociados (hipertensin, tabaquismo y
sedentarismo y hbitos alimenticios).
 Mortalidad Mundial

Enfermedad pulmonar 6.3

Accidentes 9

SIDA 9.7

Cncer 12.6

Enfermedad infecciosa 19.3

Aterosclerosis 22.3
0 5 10 15 20 25 30
Causas de mortalidad (%)

The World Health Report 2001. Geneva. WHO. 2001.

 Tendencias a buscar en la medicina..

LA MEJOR MEDICINA ES LA QUE CONTROLA Y PREVIENE LOS

FACTORES DE RIESGO Y LAS COMPLICACIONES ASOCIADOS A:

- SINDROME DE RESISTRENCIA A LA INSULINA

- DIABETES / DISLIPIDEMIAS,
- HTA / TROMBOSIS

LA MEJOR MEDICINA SERA LA PREVENTIVA

El papel del Laboratorio Clnico:

Proporcionar elementos medibles para el control de este padecimiento
 Origen de las Dislipidemias:
Dislipidemias primarias

Causas genticas (primarias)

de Dislipidemias:
Gentica Familiar
- Hipercolesterolemia Familiar
- Dislipidemia Familiar Combinada
- Hipercolesterolemia Polignica
- Hiperquilomicronemia familiar
- Hipertrigliceridemia familiar
- Dficit congnito de HDL
 Enfermedades mas comunes
asociadas a desnutricin:

Gen Ob en cr7 que codifica para Leptina.

Se expresa (produce) en adipocitos, y bajo
condiciones normales, ser en proporcin directa a
la masa de tejido adiposo.

Pptidos anorxicos
Leptina - Ghrelina
- Serotonina
- Colecistoquinina
- Neuropptido Y

Lipognesis
Liplisis
Aumento de tejido adiposo Apetito
 Origen de las Dislipidemias:
Dislipidemias Secundarias
- Diabetes: Valores elevados de insulina, defectos en el catabolismo de
quilomicrones y VLDL
- Obesidad: Mayor cantidad de lpidos en circulacin y valores elevados
de insulina (resistencia a la insulina)
- Hipotiroidismo: Disminucin del receptor de LDL y depuracin lenta de
las LDL
- Nefropatas: Insuficiencia renal crnica y depuracin lenta de VLDL
con aumento de produccin de LDL. Retencin de colesterol para
compensacin onctica.
- Colestasis: Bloqueo de va excretoria de la bilis con aumento del paso
colesterol y fosfolpidos al plasma
- Alcoholismo: Estimula la secrecin de VLDL por parte del hgado y
sntesis heptica de triglicridos
- Terapia sustitutiva de Estrgenos: Mayor sntesis de VLDL y HDL
 Objetivo del estudio de Lpidos:

1. Proporcionar una medida que valore el riesgo

de Enfermedad Coronaria (aterosclerosis)
asociada a dislipidemias, mediante el
Indice de Riesgo = CT cHDL

2. Valorar dislipidemia y complicaciones asociadas a

hiperlipidemia (cifras absolutas de CT y TG) de
acuerdo a riesgos de: colelitiasis, pancreatitis,
hgado graso, etc.

Solo se puede conocer lo que se puede medir

Valoracin de las Dislipidemias por Laboratorio

Medicin de Colesterol + Triglicridos.

Medicin del Perfil de Lpidos
Colesterol
cHDL + cLDL + cVLDL LIPIDOS TOTALES..???
Triglicridos
Test de Quilomicrones: Se deja reposar el suero a 4C durante 24 hs;
cuando existen quilomicrones, aparece un sobrenadante cremoso en la
superficie. En sueros normales, esto nunca aparecer.
Medicin de Perfil de Lpidos + Electroforesis de Lipoprotenas

- Colesterol - Alfa
- cHDL + cLDL + cVLDL - Pre-Beta
- Triglicridos - Beta
- Indice de Riesgo Aterognico - Indices de Riesgo Aterognico
C.T. / cHDL Pre-Beta / Alfa
Beta / Alfa
 CALCULO DE cLDL y cVLDL A PARTIR DE
COLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y cHLD

Frmula de Friedewald para calcular las distintas

fracciones de colesterol:

- Medicin directa de Colesterol (CT),

- Medicin directa de Triglicridos (TG)
- Medicin directa de cHDL

- Calcular cLDL y cVLDL mediante las frmulas:

* cLDL = CT ((Tg / 5 ) + cHDL)

cVLDL = TG / 5
* cVLDL = CT (cLDL + cHDL)

No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemia

 METODOS PARA VALORACION
DE RIESGO ATEROGNICO

Normal Ejemplo 3 Ejemplo 4

Ejemplo 1 Ejemplo 2
(mg/dL)
Colesterol Total 100 200 200 200 250 314
Triglicridos 50 170 170 170 400 245
cHDL > 50 35 50 60 46
cLDL < 100 131 116 110 219
cVLDL < 21 34 34 80 49
Riesgo < 4.5 5.7 4.0 4.1 6.8
Aterognico
C T / cHDL

Medicin de Colesterol y Triglicridos, incluyendo las fracciones cHDL, cLDL Y

cVLDL, para obtener el riesgo aterognico derivado de alteraciones del
colesterol y las lipoprotenas de transporte.

No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemia

 METODOS PARA VALORACION
DE RIESGO ATEROGNICO

Normal Ejemplo 7 Ejemplo 8

Ejemplo 5 Ejemplo 6
(mg/dL)
Colesterol Total 100 200 185 180 205 344
Triglicridos 50 170 400 679 754 3 018
cHDL > 50 37 42 56 65
cLDL < 100 68 2 -1 - 324
cVLDL < 21 80 136 150 603
Riesgo < 4.5 5.0 4.3 3.6 :-) 5.3
Aterognico
C T / cHDL

Medicin de Colesterol y Triglicridos, incluyendo las fracciones cHDL, cLDL Y

cVLDL, para obtener el riesgo aterognico derivado de alteraciones del
colesterol y las lipoprotenas de transporte.

No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemia

 VALORACION DE RIESGO DE ENFERMEDAD CORONARIA (EC) CON
CIFRAS DE COLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y LOS cHDL, cLDL Y cVLDL

Factor de
Nivel de Riesgo EC Tratamiento, si:
Riesgo
riesgo a 10 aos LDL(mg) CT/HDL
Coronario
4 Muy alto 40% 135 >5

3 Alto 20 a 39% 174 >6

2 Normal 10 a 19% 193 >7

1 Bajo <10% 232 >8

Datos de Riesgo y Teraputica del Toronto Working Group, 1998

COMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINAS

Las lipoprotenas estn formadas por:

- Fraccin proteica o Apo (Apoprotena)
Funcin primordial en acoplamiento a
receptores.
- Colesterol total y esterificado
- Triglicridos.
COMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINAS
PROPORCION DE LIPIDOS / APOPROTEINAS
METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
 METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
 CAUSAS Y CLASIFICACION
DE LAS DISLIPIDEMIAS
 PROCESO DE LA ATEROSCLEROSIS
 IMPORTANCIA DEL ESTUDIO DEL
PACIENTE CON DISLIPIDEMIA

Causas de obesidad ?

Causas de talla baja ?

Cual es su riesgo aterognico..??

NO HAY REGLA: Hay flacos con hipercolesterolemia o
hipertrigliceridemia, y flacos normolipmicos.

Hay gordos con hipercolesterolemia y/o hipertrigliceridemia

y gordos normolipmicos.

Se pueden clasificar las dislipidemias y medir el riesgo

aterognico con solo medir colesterol y triglicridos ?
 ESTUDIO DE DISLIPIDEMIAS

La ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS ofrece un mtodo

sensible y accesible para valoracin de riesgos aterognicos, tanto
asociados a hipercolesterolemia como hipertrigliceridemia.

Patolgico: Aumento de LDL y VLDL con agravamiento por

presencia de quilomicrones. Disminucin de sntesis de HDL.
Tendencia ptima: Aumentar HDL y disminuir LDL, IDL y VLDL

Electroforesis de
Lipoproteinas

Respuesta Clasificacin de
A tratamiento Dislipidemias

Teraputica especfica Riesgo EC

ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS
ELECTROFORESIS DE MICROZONA
 Clasificacion de las Dislipidemias
(OMS 1970 modificada de Fredickson y Levi de 1963)
Mtodo semi- - Tipo I: Quilomicrones.
cuantitativo - Tipo IIa: Betalipoprotenas (LDL)
Debe interpretarse - Tipo IIb: LDL + VLDL (Beta y p-Beta)
junto con los valores de - Tipo III: IDL (Beta ancha)
colesterol y triglicridos.
- Tipo IV: VLDL (pre-Betalipoprotenas)
- Tipo V: VLDL + Quilomicrones

Banda en el punto de aplicacin

corresponde a la presencia de
quilomicrones,
Banda ancha que abarca beta y
prebeta sugiere un acmulo
anormal de IDL y/o de
remanentes de quilomicrones.
Banda Pre- (Lipoalbmina)
aparece cuando hay cidos
grasos libres y lecitina unida a
albmina (no patolgica).
 ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS
ELECTROFORESIS DE MICROZONA (acetato de celulosa)

Punto de aplicacin

Lipoprotenas Beta (LDL) Sitio de aparicin de

los quilomicrnes
Lipoprotenas Pre-Beta (VLDL)

Lipoprotenas Alfa (HDL)

Mtodo electrofortico que permite separar e identificar y medir las distintas

fracciones lipoproteicas, mediante su tincin con Sudn Negro y su integracin
densitomtrica en un lipidograma.
ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS

quilomicrones
HDL VLDL LDL

Integracin densitomtrica de la electroforsis

 MUESTRA A USAR?

El SUERO contiene Lipoprotein Lipasa, que es activa y estar

degradando lipoprotenas en la muestra.
La Lipoprotein Lipasa es activada por la HEPARINA, por lo que no
es una muestra til para una electroforesis de lipoproteinas.

El EDTA inhibe la actividad de la enzima Lipoprotein Lipasa, por lo

que es la muestra ideal a utilizar, ya sea EDTA -Na, -K, o -Li.

NO HAY CAMBIOS SIGNIFICATIVOS SI SE EMPLEA UNA

MUESTRA DE SUERO Y SE EFECTUA LA ELECTROFORESIS
ANTES DE 48 HORAS EN SUERO REFRIGERADO.

Si no se procesar antes de 48 horas de obtenida la muestra, ser

mas conveniente una muestra de plasma y refrigerar para procesar.
 ELECTROFORESIS DE PROTEINAS
REPORTE

Datos del
paciente

Integracin de
electroforesis

Corrimiento
electrofortico

Datos de PROPORCIONAR AL
interpretacin MEDICO, TODA LA
clnica INFORMACION POSIBLE
PARA EL CORRECTO
APROBECHAMIENTO
DEL ESTUDIO
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
PATRON NORMAL
 FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
FENOTIPO IIa: Hiper-Betalipoproteinemia
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
FENOTIPO IIb: Hiperlipidemia Mixta
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
FENOTIPO III: Beta Ancha
 FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia)
 FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia)
 FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
FENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicrones
 FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
FENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicrones
 ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS
Principales problemas y alternativas:
Dficit Congnito
de HDL ..?
Muy baja cantidad de lpidos (ppalm tg)
Uso de sueros envejecidos (> 2 das)
Uso de sueros/plasmas congelados
Uso de Buffer equivocado o deteriorado
Usar un suero normal como
Control Interno
Prescribir a pacientes dislipidmicos
Procesar al menos 3 veces por semana
Usar plasma si se procesara despus de 48 hs
No congelar. Ideal refrigerar a 4C
Recambio de buffer y uso de secantes
 ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS
Principales problemas

Principales problemas de corrimientos:

1. Deficiente preparacin de acetatos por no recambio de filtros Habr
aparicin de artificios en el corrimiento
2. Envejecimiento de reactivos Teido deficiente
3. Uso de amortiguador impropio Corrimiento anormal
4. Muestras envejecidas Desaparicin o atenuamiento de bandas
5. No coincide lo que veo en el corrimiento con lo que integra el integrador
densitomtrico Limpieza y mantenimiento de los sensores o
fotoceldas de cada canal de integracin.

Sugerencias:
- En lo posible, meter suero normal para comparar patrones anormales.
- Recambio de papel filtro de puentes y desecantes.
- Procesamiento 3 veces por semana
- Programacin de mantenimiento preventivo al menos una vez al ao
Corrimientos de
lipoproteinas con
muestras frescas
(izquierda) y
misma muestra
con 5 dias de
almacenamiento
(imagen derecha).