ENZIMAS

Las enzimas son protenas que catalizan reacciones

qumicas en los seres vivos. Son catalizadores, es decir,
sustancias que, sin consumirse en una reaccin, aumentan
notablemente su velocidad.

No hacen factibles las reacciones imposibles, sino que

slamente aceleran las que espontneamente podran
producirse. Ello hace posible que en condiciones
fisiolgicas tengan lugar reacciones que sin catalizador
requeriran condiciones extremas de presin,
temperatura o pH.
Son catalizadores especficos: cada enzima cataliza un solo tipo de
reaccin, y casi siempre acta sobre un nico sustrato o sobre un
grupo muy reducido de ellos.

El sustrato se une a una regin concreta de la enzima, llamada centro

activo, que comprende:

Un sitio de unin formado por los

aminocidos que estn en contacto
directo con el sustrato

Un sitio cataltico, formado por los

aminocidos directamente implicados en
el mecanismo de la reaccin

Una vez formados los productos la

enzima puede comenzar un nuevo ciclo de
reaccin
Hay distintos grados de especificidad.

La enzima sacarasa es muy especfica: rompe el enlace -glucosdico de la

sacarosa o de compuestos muy similares. As, para la enzima sacarasa, la
sacarosa es su sustrato natural, mientras que la maltosa y la isomaltosa
son sustratos anlogos.

La enzima acta con mxima eficacia sobre el sustrato natural y con

menor eficacia sobre los sustratos anlogos.

Entre las enzimas poco especficas estn las proteasas digestivas como la
quimotripsina, que rompe los enlaces amida de protenas y pptidos de
muy diversos tipos.
 PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS

Sus propiedades derivan del hecho de ser protenas y de actuar

como catalizadores.

Como protenas, poseen una conformacin natural ms estable

que las dems conformaciones posibles. As, cambios en la
conformacin suelen ir asociados en cambios en la actividad
cataltica.

Los factores que influyen de manera ms directa sobre la

actividad de un enzima son:

pH

Temperatura

Cofactores
EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Las enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carboxilos -COOH;

amino -NH2; tiol -SH; imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus
aminocidos.

Segn el pH del medio, estos grupos pueden tener carga elctrica

positiva, negativa o neutra.

Habr un pH en el cual la conformacin ser la ms adecuada para la

actividad cataltica (pH ptimo)
La mayora de las enzimas son muy sensibles a los cambios de pH.

Desviaciones de pocas dcimas por encima o por debajo del pH ptimo

pueden afectar drsticamente su actividad.

As, la pepsina gstrica tiene un pH ptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7

y la arginasa lo tiene a pH 10

Como ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturalizacin de la

protena, los seres vivos han desarrollado sistemas ms o menos complejos
para mantener estable el pH intracelular: Los amortiguadores fisiolgicos
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones

qumicas: por cada 10C de incremento, la velocidad de reaccin se
duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley general
pero al ser protenas, a partir de cierta temperatura se empiezan a
desnaturalizar por el calor.

La temperatura a la cual la actividad cataltica es mxima se llama

temperatura ptima. Por encima de esta temperatura, el aumento de
velocidad de la reaccin debido a la temperatura es contrarrestado
por la prdida de actividad cataltica debida a la desnaturalizacin
trmica, y la actividad enzimtica decrece rpidamente hasta
anularse.
EFECTO DE LOS COFACTORES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

A veces, una enzima requiere para su funcin la presencia de sustancias no

proteicas que colaboran en la catlisis: los cofactores.

Pueden ser iones inorgnicos como el Fe++, Mg++, Mn++, Zn++ etc. Casi un
tercio de las enzimas conocidas requieren cofactores.

Cuando el cofactor es una molcula orgnica se llama coenzima. Muchos

coenzimas se sintetizan a partir de vitaminas.

Cuando los cofactores y las coenzimas se encuentran unidos

covalentemente al enzima se llaman grupos prostticos.
La forma catalticamente activa de la enzima, es decir, el enzima unida a su
grupo prosttico, se llama holoenzima.

La parte proteica de un holoenzima (inactiva) se llama apoenzima.

 EFECTO DE LAS CONCENTRACIONES SOBRE
LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

La velocidad de una reaccin enzimtica

depende de la concentracin de sustrato.

Adems, la presencia de los productos

finales puede hacer que la reaccin sea ms
lenta, o incluso invertir su sentido.
MODO DE ACCIN DE LAS ENZIMAS

Perfil energtico de una

reaccin catalizada
 MODULACIN ALOSTRICA DE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA

Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles

llamadas R (relajada) y T (tensa).

R es la forma ms activa porque se une al sustrato con ms afinidad.

Las formas R y T se encuentran en equilibrio R <==> T

Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R (moduladores

positivos). El propio sustrato es a menudo un modulador positivo.
 Las molculas que favorecen la forma R pero que actan sobre una
regin del enzima distinta del centro activo son los activadores
alostricos.

Las sustancias que favorecen la forma T y

disminuyen la actividad enzimtica son los
moduladores negativos.

Si estos moduladores actan en lugares

distintos del centro activo del enzima se
llaman inhibidores alostricos.
 REGULACIN ALOSTRICA

REGULACIN A NIVEL DE SUSTRATO

A CONCENTRACIN DE S, ACTIVIDAD ENZIMTICA
P SE UNE A E COMO SI FUERA UN INH COMP

CONTROL POR RETROACCIN

A B C D E
E1 E2 E3 E4

D E F G

A B C

H I J K
 REACCIONES CON MLTIPLES SUSTRATOS

UNIN ALEATORIA
S1 E-S1 S2
E E-S1-S2 E + P1 + P2
S2 E-S2 S1

EJEMPLO: FOSORILACIN DE LA GLUCOSA

UNIN ORDENADA
S1 S2
E E-S1 E-S1-S2 E + P1 + P2

EJEMPLO: REACCIONES DE OXIDORREDUCCIN

PING-PONG
S1 S2
E E-S1 E + P1 E* E*-S2 E + P2 E

EJEMPLO: ACTIVACIN PROTEOLTICA. S1 ES LA PROENZIMA Y S2 ES EL AGUA QUE

SEPARA A LA ENZIMA ACTIVA DE LA ENZIMA MODIFICADA
 INHIBICIN

REVERSIBLE: UNIONES NO COVALENTES ENTRE EL I Y LA E

COMPETITIVA: MISMA Vmax, DIFERENTE Km
NO COMPETITIVA: DIFERENTE Vmax, MISMA Km
MIXTA: NO COMPETITIVA PERO DIFERENTE Km

IRREVERSIBLE: UNIONES COVALENTES ENTRE EL I Y LA E

BLOQUEAN EL SITIO ACTIVO (GAS SARN, PARATIN, CN-)
SIMILITUD CON EL S (TPCK inh QUIMOTRIPSINA)
EFECTO DE LOS INHIBIDORES SOBRE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA
Ciertas molculas pueden inhibir la accin cataltica de un enzima.

Estos inhibidores pueden ocupar temporalmente el centro activo por

semejanza estructural con el sustrato original (inhibidor competitivo) o
bien alteran la conformacin espacial del enzima, impidiendo su unin al
sustrato (inhibidor no competitivo).

Inhibidor competitivo Inhibidor no competitivo

 EFECTO DE LA MODIFICACIN COVALENTE SOBRE
LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Otras enzimas pasan de una forma menos activa a otra ms activa

unindose covalentemente a un grupo qumico de pequeo tamao como
el Pi o el AMP.

Tambin se da el caso inverso, en el que una enzima muy activa se

desactiva al liberar algn grupo qumico.

En las enzimas de las vas degradativas del metabolismo, la forma

fosforilada es ms activa que la no fosforilada, mientras que en las vas
biosintticas ocurre lo contrario.
ACTIVACIN PROTEOLTICA DE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA

Algunas enzimas no se sintetizan como tales, sino como protenas

precursoras sin actividad enzimtica (proenzimas o zimgenos).

Para activarse, los zimgenos sufren un ataque hidroltico que origina la

liberacin de uno o varios pptidos. El resto de la molcula proteica
adopta la conformacin y las propiedades de la enzima activa. Muchas
enzimas digestivas se secretan en forma de zimgenos y en el tubo
digestivo se convierten en la forma activa.

Si estas enzimas se sintetizasen directamente en forma activa

destruiran la propia clula que las produce.

As, la tripsina pancretica se sintetiza como tripsingeno (inactivo). Si

por alguna razn se activa en el propio pncreas, la glndula sufre un
proceso de autodestruccin (pancreatitis aguda), a menudo mortal.
 REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
POR MEDIO DE ISOENZIMAS

Algunas enzimas tienen distinta estructura molecular aunque su funcin

biolgica es similar (isozimas o isoenzimas).

Estas diferencias de estructura se traducen en ligeros cambios en sus

propiedades, de forma que cada isozima se adapta perfectamente a la
funcin que debe realizar. As, podemos observar la existencia de
isoenzimas en funcin de:

El tipo de tejido: Por ejemplo, la lactato deshidrogenasa presenta

isozimas distintos en msculo y corazn.

El compartimento celular donde acta: Por ejemplo, la malato

deshidrogenasa del citoplasma es distinta de la de la mitocondria.

El momento concreto del desarrollo del individuo: Por ejemplo, algunas

enzimas de la glicolisis del feto son diferentes de los mismos enzimas
en el adulto.
Para que una reaccin qumica tenga lugar, las molculas de los reactantes
deben chocar con una energa y una orientacin adecuadas. La actuacin de
la enzima:

permite que los reactantes (sustratos) se unan a su centro activo con una
orientacin ptima para que la reaccin se produzca

modifica las propiedades qumicas del sustrato unido a su centro activo,

debilitando los enlaces existentes y facilitando la formacin de otros
nuevos.
Hay dos modelos sobre la forma en que el sustrato se une al centro
activo de la enzima:

MODELO LLAVE-CERRADURA
El modelo llave-cerradura supone
que la estructura del sustrato y la
del centro activo son
complementarias, de la misma
forma que una llave encaja en una
cerradura. Este modelo es vlido
en muchos casos, pero no es
siempre correcto.
MODELO DEL AJUSTE INDUCIDO

En algunos casos, el centro activo adopta la conformacin idnea slo en

presencia del sustrato. La unin del sustrato al centro activo del enzima
desencadena un cambio conformacional que da lugar a la formacin del
producto.
 CINTICA
En una reaccin de orden cero, la velocidad de formacin del producto es
independiente de la concentracin de sustrato: v = k

En una reaccin de primer orden la velocidad de formacin de los productos

es directamente proporcional a la concentracin del sustrato: v = k [A]

sacarosa + agua glucosa + fructosa

La velocidad de hidrlisis de la sacarosa es, en todo momento, proporcional a

la concentracin de sacarosa.

Una reaccin de segundo orden es aquella en la que la velocidad de

formacin del producto depende de:

la concentracin de dos sustratos (reaccin de condensacin):

v = k [A] [B]

del cuadrado de la concentracin de un nico sustrato (reaccin de

dimerizacin): v = k [A]2
CINTICA DE UN SUSTRATO
 CINTICA ENZIMTICA

La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por

enzimas. Estos estudios proporcionan informacin directa acerca del
mecanismo de la reaccin cataltica y de la especifidad del enzima.

La velocidad de una reaccin catalizada por una enzima puede medirse con
relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar el
enzima.

La medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH, temperatura,

presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de
sustrato.

En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad

mxima (Vmax).

La velocidad puede determinarse midiendo la aparicin de los productos o la

desaparicin de los reactivos.
Al seguir la velocidad de aparicin de producto en funcin del tiempo se
obtiene la curva de cintica de la reaccin.

A medida que la reaccin transcurre, la velocidad de acumulacin del

producto va disminuyendo porque se va consumiendo el sustrato de la
reaccin.

Se mide la velocidad inicial de la reaccin (v0). La velocidad inicial de la

reaccin es igual a la pendiente de la curva de avance a tiempo cero. De esta
forma, la medida de v0 se realiza antes de que se consuma el 10% del total
del sustrato, de forma que pueda considerarse la [S] constante a lo largo del
experimento. Adems, en estas condiciones no es necesario considerar la
reaccin inversa, ya que la cantidad de producto formada es tan pequea que
la reaccin inversa apenas ocurre.
 Para estudiar la cintica enzimtica se mide el efecto de la concentracin
inicial de sustrato sobre la velocidad inicial de la reaccin, manteniendo la
cantidad de enzima constante.

Si se representa v0 frente a [S]0 se obtiene una grfica:

Cuando [S]0 es pequea, la velocidad inicial es directamente proporcional a

la concentracin de sustrato, y por tanto, la reaccin es de primer orden.
A altas [S]0, el enzima se encuentra saturada por el sustrato, y la
velocidad ya no depende de [S]0. En este punto, la reaccin es de orden
cero y la velocidad es mxima (Vmax).
 MODELO CINTICO DE MICHAELIS-MENTEN

Los estudios sistemticos del efecto de la concentracin inical del sustrato

sobre la actividad enzimtica comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX.

En 1882 se introdujo el concepto del complejo enzima-sustrato como

intermediario del proceso de catlisis enzimtica.

En 1913, Leonor Michaelis y Maud Menten desarrollaron esta teora y

propusieron una ecuacin de velocidad que explica el comportamiento cintico
de las enzimas.
Si se introduce el parmetro Vmax en la ecuacin general de la velocidad, se
obtiene la expresin ms conocida de la ecuacin de Michaelis-Menten:

Hay enzimas que no obedecen la ecuacin de Michaelis-Menten. Se dice que su

cintica no es Michaeliana. Esto ocurre con las enzimas alostricas, cuya
grfica v frente a [S] no es una hiprbola, sino una sigmoide. En la cintica
sigmoidea, pequeas variaciones en la [S] en una zona crtica (cercana a la KM)
se traduce en grandes variaciones en la velocidad de reaccin.
La representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Menten (v0 frente a
[S]0) es una hiprbola.

La Vmax corresponde al valor mximo al que tiende la curva experimental, y

la KM corresponde a la concentracin de sustrato a la cual la velocidad de la
reaccin es la mitad de la Vmax.
Para determinar grficamente los valores de KM y Vmax es ms sencillo
utilizar la representacin doble recproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es
una lnea recta.

Esta representacin doble recproca recibe el nombre de representacin

de Lineweaver-Burk. Es una recta en la cual:

La pendiente es KM/Vmax
La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM
La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es 1/Vmax

De esta forma, a partir de los datos

experimentales se puede calcular
grficamente, los valores de KM y Vmax de
una enzima para diversos sustratos.
 ACTIVIDAD ENZIMTICA
Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la cantidad de enzima
que cataliza la conversin de 1 mol de sustrato en un minuto.

La actividad especfica es el nmero de unidades de enzima por miligramo de

protena (U/mg prot) o por mililitro de disolucin (U/ml).

Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la

unidad de actividad enzimtica como la cantidad de enzima que transforma 1
mol de sustrato por segundo. Esta unidad se llama katal (kat). Como 1 mol son
106 moles y 1 minuto son 60 segundos, resulta que 1 katal equivale a 60 x 106
U. Esta unidad es muy grande, de forma que se utilizan frecuentemente los
submltiplos como el microkatal (kat, 10-6 kat) o el nanokatal (nkat, 10-9 kat).

Cuando se conoce el peso molecular de la enzima puro y el nmero de centros

activos por molcula de enzima, las medidas de actividad enzimtica permiten
calcular el nmero de recambio del enzima, o sea, el nmero de reacciones
elementales que realiza la enzima por cada centro activo y por unidad de
tiempo.
IMPORTANCIA DE LA Km

1. KM es la concentracin de sustrato para la cual la velocidad de reaccin es

la mitad de la velocidad mxima. En efecto, si KM = [S], la ecuacin de
Michaelis-Menten se reduce a: v = Vmax/2.
2. El valor de KM da idea de la afinidad del enzima por el sustrato: A menor
KM, mayor afinidad del enzima por el sustrato, y a mayor KM, menor afinidad.
Este hecho tiene fcil explicacin si se tiene en cuenta que KM se define
como (k2+k3/k1), donde las reacciones 2 y 3 destruyen el complejo ES,
mientras que la reaccin 1 lo forma. As, si KM es grande, el complejo ES es
inestable pues predomina la tendencia a destruirlo (poca afinidad hacia el
sustrato), y si KM es pequea, el complejo ES es estable, ya que predomina la
tendencia a formarlo (gran afinidad hacia el sustrato).

3. La KM del sustrato natural es menor que la de los sustratos anlogos. Si

dos sustratos de la misma enzima tienen distinta KM, el que presente mayor
KM tiene menor afinidad por el enzima, y la reaccin transcurre siempre a
menor velocidad que con el sustrato de menor KM, salvo a concentraciones
saturantes de sustrato, donde la v = Vmax.

4. Los valores de KM de muchas enzimas son prximos a los de la

concentracin fisiolgica de sus sustratos, de forma que pequeas
variaciones en la [S] pueden suponer grandes cambios en la velocidad de toda
una ruta metablica.