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Bactrias, fungos, protozorios,algas

Para estudar as propriedades de determinado


microrganismos - ISOLAR - CULTURA PURA
Clulas da populao idntica mesma
clula parental
Meios de Cultura primeiras informaes
na identificao dos microrganismos
Mistura de nutrientes carbono, nitrognio,
sais minerais, vitaminas, fator de crescimento
Cultivo de diferentes microrganismos
Obteno de grande biomasssa de
microrganismos
Revelao de provas bioqumicas
Preparados no laboratrios ps desidratados
Adquiridos prontos no comrcio placas de
Petri ou tubos de ensaio
SLIDO o crescimento do microrganismo
visualizado na forma de colnia

www.emaze.com pt.wikipedia.org
SEMI SLIDO o crescimento observado pela
turvao - motilidade

microdidatica.wordpress.com
LIQUIDO turvao do
meio

portuguese.alibaba.com
1. MEIOS SELETIVOS
Promove o crescimento de
determinados
microrganismos em
detrimento de outros que
esto na amostra
Adio de antibiticos ou
inibidores
Ex.: gar de Thayer-
Martin seletivo para
Neisseria gonorrhoeae e N.
meningitidis presena de
inibidores como colistina,
nistatina, vancomicina
1. MEIOS
SELETIVOS
gar MSB seletivo
para Streptococcus
mutans sacarose e gar MRS bacterias lcticas
bacitracina
garMacConkey(MC)
Gram negativo
cristal violeta inibe
os microrganismos
Gram positivos.
gar Mac Conkey E. coli
2. MEIOS DIFERENCIAIS

Facilita a separao presuntiva de espcies de


microrganismos que talvez estejam
colonizando o mesmo ecossistema
Permite a obteno de colnias com
caractersticas fenotpicas diferenciadas
agentes cromognicos, aucares, indicadores
Ex. gar Sangue , gar Mac Conkey, gar
Salmonella-Shigella
3. MEIOS DE ENRIQUECIMENTO
So variaes dos meios seletivos empregados
para estimular o crescimento de certos
microrganismos exigentes

4. MEIOS PARA ANAERBIOS


Meios pr-reduzidos empregados na coleta e
manuteno de bactrias anaerbias adio
de substancias redutoras cido ascrbico
0,1%, cistena 0,1%, tioglicolato de sdio 0,1% -
se combina com o oxignio indicadores de
oxi-reduo (azul de metileno, resazurina)
5. MEIOS PARA
TRANSPORTE
So utilizados para
transporte de amostra e
manuteno da amostra
biolgicas, como fezes e
secrees
So meios inertes que
permitem a viabilidade
dos patgenos sem
alterar a concentrao
Ex.: Meio Stuart , Amie,
Cary-Blair, Soluo
salina
www.kasvi.com.br
6. MEIOS PARA O
CULTIVO DE
FUNGOS
mistura simples
glicose + fonte de
nitrognio + alguns
minerais.
Concentrao maior
de acar (4%) e pH
menor (3,8 a 5,6)
Ex.: Sabouraud Agar
Diferenciao por colorao
MUG COLILERT Coliformes Totais e E. coli

http://www2.idexx.com/
DUALMEDIUM Diagnstico de bactrias - urina

www.mbiolog.com.br
A origem do material a ser analisado
A espcie que se imagina estar presente na
amostra
As necessidades nutricionais dos organismos
INOCULAO

Material colocado no meio de cultura


suspenso original da amostra colocar
dentro ou sobre um meio geleificado (GAR)
clulas imobilizadas multiplicao
COLNIA ISOLADA
Colnia = clulas individuais agrupadas
ancestral nico, visvel a olho nu
1. TCNICA DE ESGOTAMENTO POR MEIO
DE ESTRIAS SUPERFICIAIS - a amostra
semeada na superfcie do meio solidificado
com uma ala de semeadura para esgotar a
populao, assim em algumas regies do
meio, clulas individuais estaro presentes.
ESGOTAMENTO POR ESTRIAS
2. TCNICA DE SEMEADURA EM
SUPERFCIE - uma gota da amostra diluda
colocada na superfcie do gar e com o auxlio
de uma ala de semeadura de vidro (ala de
Drigalsky) esta gota espalhada sobre o meio.
3. MTODO DE POUR-PLATE
A amostra diluda em meios liquefeitos (45
oC) nas placas de Petri;

E aps a solidificao dos meios as placas so


incubadas;
As colnias se desenvolvero tanto acima
quanto abaixo da superfcie (colnias
internas)
Determina o nmero de clulas de forma
direta

Clculos
Diluies seriadas 1ml/99ml de gua ou uma
parte de alimento/nove partes de gua -
homogeneizado
DILUIES SERIADAS

- Exemplo: 1ml de leite 10 mil bactrias


- 1ml 10 mil colnias na placa
- Diluies:
1. 1 ml de leite diluir em 9 ml de gua peptonada mil
bactrias - (diluio 1:10) 10-1
2. 1 ml da diluio anterior diluir em 9 ml de gua
peptonada cem bactrias cem colnias (diluio 1:100)
10-2
3. ...... (1:1000) 10-3ou (1:10.000) 10-4 .....
DILUIES SERIADAS

CALCULO : N de colnias na placa x diluio da


amostra = nmero de bactrias por ml

EXEMPLO: Placa com diluio 1/1000 (10-3) 32


colnias Estima que existe 32 x 1000 = 32.000
UFC/ml da amostra ou 3,2 x 104
a tcnica mais utilizada
Vantagem clulas viveis so quantificadas
Desvantagens tempo para aparecimento das
colnias visveis em placa
Uma colnia resultado de uma cadeia ou de
grumo
As contagens em placas Unidades
Formadoras de Colnias (UFC)
Excesso de colnias dificuldade de contagem
Diluies Seriadas
Amplamente utilizado em laboratrios de microbiologia de alimentos ou
ambiental - na quantificao de microrganismos em gua, leite e outros
produtos.

Pesquisa de coliformes totais e coliformes fecais - microrganismos


indicadores de poluio fecal - presena de outros organismos, tais como
protozorios e vrus.

Esta tcnica foi desenvolvida aps anlises estatsticas complexas.

A determinao do NMP realizada inoculando-se 3 sries de 5 ou 3 tubos,


com 10, 1 e 0,1 ml da gua ou do produto homogeneizado em soluo salina,
em meios seletivos para coliformes totais contendo tubos de Durham
invertidos em seu interior.

Estes so incubados por 48 hs/37C


Analisados quanto ao crescimento e presena de gs no interior dos
tubos de Durham
Presena de gs - positivo para a presena de coliformes totais.
Amostras dos tubos positivos so ento repicados para caldos
seletivos para coliforme fecais, tambm contendo tubos de Durham,
os quais so incubados por mais 24 ou 48 hs a 42C.
De todos os tubos positivos faz-se uma semeadura em placa com
meio seletivo e posterior identificao bioqumica.
De acordo com o nmero de tubos que apresentam gs determina-se
o NMP, pela consulta de uma tabela desenvolvida por Hoskins
(1934).
Este um teste apenas presuntivo para a presena de coliformes.
MTODO DO NMERO MAIS PROVVEL PARA ESTIMATIVA DE
CRESCIMENTO
TCNICA DA MEMBRANA FILTRANTE

www.controleanalitico.com.br
CONTAGEM DE BACTRIAS PELO MTODO DE FILTRAO

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INCUBAO

Requer oxignio
Placas de Petri ou tubos estufa a 37 C
presena de oxignio
Neisseria gonorrohoeae microaerfila
elevado teor de CO2 jarra reduzida
quantidade de oxignio livre e 10% de CO2.
Meios devem ser fervidos eliminao de O2
dissolvido
Gs nitrognio adicionado aos tubos meios
+ agente redutor (cistena) remoo doe
traos de O2 esterilizados
Meios reduzidos meios contendo agentes
redutores tioglicolato de sdio absorver
oxignio

1. CAMARA DE ANAEROBIOSE
- Cmara contendo luvas acopladas parede
- Ar atmosfrico hidrognio, CO2 e nitrognio
2. JARRA DE
ANAEROBIOSE
- Meios inoculados so
depositados em um jarra
+ envelope contendo
substncias qumicas,
como hidrognio e CO2
- Inadequado para
anaerbios estritos
1. CARACTERSTICAS DA CULTURA
As colnias so examinadas a olho nu ou com auxlio de lupa:

1. Tamanho

2. Forma (circular, irregular, espalhada);

3. Elevao (hemisfrica, moderadamente elevada,


achatada);

4. Estrutura (lisa, rugosa, homognea, granular,


filamentosa);

5. Cor (ou pigmento, se existir algum, fluorescente,


opalescente);
6. Transparncia (clara, translcida, opaca);

7. Borda (regular, inteira, denteada, aspecto de


franja);

8. Consistncia (macia, mida, granular, seca, viscosa);

9. Alteraes no meio (hemlise, descolorao).


www.ebah.com.br
CARACTERSTICAS METABLICAS
As bactrias dever ser caracterizadas pelas atividades
biolgicas e bioqumicas (srie bioqumica de Hiss: fermentao
de carboidratos, ao sobre protenas, produo de gases) e
imunoqumicas (reao antgeno-anticorpo, com corantes como
a fluorescena).

www.fiocruz.br
CARACTERSTICAS PATOGNICAS
-Inoculao do microrganismo em hospedeiro sensvel
reproduzir a doena

www.fiocruz.br
CARACTERSTICAS GENTICAS
- Tcnicas para identificar e classificar os microrganismos
PCR de DNA de bactrias lcticas isoladas de queijo de Coalho produzido na Paraba.
Fonte: Medeiros, RS.
MANUTENO DAS CULTURAS

Objetivo:
Manter vivas as culturas com um mnimo de alteraes de suas
propriedades.

Repique Freqente - (semanal ou mensal) da cultura para meios


nutritivos, nos quais no haver acumulao de produtos txicos
resultantes do metabolismo (temp. 0 a 7C, geladeira).

Congelamento suspenso bacteriana jovem e densa misturada


em um meio protetor (leite ou glicerol) e rapidamente congelada
(gelo seco + lcool = -70C) e mantida sob congelamento.

Liofilizao desidratar a cultura congelada em alto vcuo para


sublimao da gua.