DIAGNOSTICO POR LABORATORIO

DE LA ENTEROPARASITOSIS
Dr. Richard Melndez
Patlogo Clnico
Tema 3.- Diagnstico de laboratorio de las
Enteroparasitosis

Caractersticas generales de las Enteroparasitosis

Principales protozoosis y helmintiasis intestinales
Ciclos biolgicos tipo: a) Entamoeba histolytica
b) Taenia saginata
c) Enterobius vermicularis
d) Anquilostmidos
Principios y utilidad de las tcnicas de estudio
parasitolgico de heces. El examen coproparasitario

Elementos no parasitarios de las heces

El mtodo de Graham
ENTEROPARASITOSIS. Caractersticas generales

Tracto digest humano Numerosos parsitos:

Protozoos COMENSALES
Helmintos PATOGENOS

Infestacin

Va digestiva (mayora de casos)

Va cutnea

Formas infestantes

QUISTES / OOQUISTES Protozoos

ENTEROPARASITOSIS. Caractersticas generales

Mecanismos transmisin

Infestacin por FECALISMO

Infestacin por CARNIVORISMO

Infestacin s/ ciclo ANO-MANO-BOCA

Infestacin CUTANEA

Mecanismos transmisin Relacin con ciclo biolgico

 INFESTACION POR FECALISMO

Caracterstico de parsitos de ciclo biolgico MONOXENO

PROTOZOOS

a) PARASITOS b) COMENSALES
Entamoeba histolytica Entamoeba coli
Giardia lamblia Endolimax nana
Isospora belli Iodamoeba butschlii
Cryptosporidium spp. Chilomastix mesnili
Balantidium coli Blsatocystis hominis
Entamoeba polecki
Enterocytozoon spp.

HELMINTOS

Asacaris lumbricoides
Trichuris trichiura
Hymenolepis nana
 INFESTACION POR FECALISMO

Medio Externo
Contam suelo
Formas
infestantes Ingestin
Quistes
Ooquistes
Huevos
Larvas

Hosp Infestado (=) Hosp Susceptible

www./dpd.cdc.gov/dpdx
INFESTACION POR CARNIVORISMO

En parsitos con ciclos biolgicos complejos, con uno o

varios Hosp. Intermediarios ( Ciclos HETEROXENOS)

Entre los hospedadores existe una relacin PREDADOR -

PRESA

El PREDADOR soporta al parsito en su intest, donde se

realiza la f sexuada (Se comporta como Hosp DEFINITIVO)

La Presa se infesta por fecalismo, a partir de las formas

que elimina el H D con las heces (hosp intermediario)

En el caso del hombre la infestacin se adquiere por

ingestin de carnes y pescados crudos, o insuficientemente
cocinados
 INFESTACION por la piel

Contacto con
Algunas especies de helmintos intestinales H. Definitivo
(s/t nematodos)

Eliminacin de:
larvas
Penetracin piel
huevos muy desarrollados

Se transforman en LARVAS INFESTANTES

(larvas filariformes)

Migr viscerales
Ancylostoma duodenale
Necator americanus
Strongyloides stercoralis Local definitiva
en intestino
Diagnstico de laboratorio de las Enteroparasitosis

Consideraciones generales:

Numerosas tcnicas de examen coproparasitario

Finalidad diferente

Aplicacin
General
Selectiva o especfica

Utilidad en funcin de su capacidad para:

Concentrar elementos parasitarios

Cuantificar la carga parasitaria
Evidenciar difs estados evolutivos
Preparar extensiones permanentes
Diagnstico de laboratorio de las Enteroparasitosis (2)

IMPORTANTE:

1) Seleccin tcnica(s) s/ casos

Grupo o especies de parsitos
Fase evolutiva

2) Examen de varias muestras (3) por paciente

ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES

Evidenciacin de parsitos que:

Viven en el tracto digestivo
Realizan su trnsito al m ext a travs del mismo

I) No todas las tcnicas son adecuadas para todos los parsitos:

Importante conocer ciertos datos:

Procedencia geogrfica del enfermo
Resumen HC
Resultados otras pruebas/anlisis
Informacin relativa a trattos recientes

II) Un ex aislado con result negativo no tiene ningn valor

eliminatorio

III) La muestra debe ser examinada rpidamente

 Ascaris lumbricoides macho adulto (der.) y progltido
grvido de Taenia solium (4X) (izq.), coloracin: Tionina
ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES

Para descartar una parasitosis intestinal:

Realizar al menos 3 exmenes coproparasitarios seriados

(a dias alternos)

Tras una adecuada preparacin del paciente

Remitiendo las muestras lo mas rpidamente posible al lab

ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES

El examen PARASITOLOGICO DE HECES forma parte del

ESTUDIO COPROLOGICO, mas general, que informa sobre:

Aspecto macroscpico de las heces

Consistencia / agua / Veloc trnsito.....
Color (calidad/cantidad flujo biliar)
Presencia de sangre, mucus ......

Aspecto microscpico restos alimenticios

Presencia mucus, hemates, leucos, cls epiteliales ......

Presencia de parsitos (trofoz, quistes, huevos, larvas....)

Elementos micticos, su relacin o proporcin con

bacterias
ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES

El examen COPROPARASITARIO no resulta de utilidad cuando:

La eliminacin de los parsitos no se realiza por el intestino

La puesta de huevos no se lleva a cabo en el intestino

Los parsitos son inmaduros o estriles, y no dan lugar a

formas de diseminacin

Parasitismo por un nico individuo (esp dioicas)

Parasitismo reciente (fase adulta no desarrollada)
ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES. Preparacin paciente

Rgimen alimenticio estricto desde 72 h antes a la recogida de la

muestra ( UTOPIA ??)

Condiciones mnimas:

Evitar medicamentos opacos no absorbibles

Carbn vegetal
Contrastes radiolgicos (papilla baritada)
Sustancias grasas (s/t supositorios)

Evitar alimentos con muchos residuos

Legumbres
Frutas de cutcula resistente
Vegetales con cls duras
Frutos con semillas duras y pequeas (p ej higos)
ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES. Muestras

Considerar adecuadamente las condiciones de :

Toma de muestra
Asepsia?
Momento? / lugar?
Recipiente ?

Envo de muestra

En hospital
Por correo

Conservacin de las muestras

Provisional por frio (att trofozotos amebas)

Definitiva (soluciones fijadoras)
TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO

1) Examen directo de una pequea porcin de heces frescas

2) Examen despus de aplicar un mtodo de concentracin

3) Examen de extensiones o preparaciones permanentes

Examen directo

Observacin microscpica minuciosa de toda la preparacin

Objetivo seco dbil (10 x)

Objetivo seco fuerte (25-40 x)
Habitualmente no se emplea obj de inmersin
Importante: No diluir demasiado las muestras
Materiales para la aplicacin del mtodo directo: lminas,
laminillas, aplicador, solucin salina y lugol
 Procedimiento del examen directo

Colocar en un extremo de la lmina

portaobjeto una gota de suero fisiolgico y,
con ayuda de un aplicador, agregar 1 a 2 mg
de materia fecal, emulsionarla y cubrirla con
una laminilla cubreobjeto
Colocar en el otro extremo de la lmina
portaobjeto, una gota de lugol y proceder a la
aplicacin de la muestra fecal
TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO

Examen directo

SF Lugol

Movilidad Tincin
(Trofozotos) Vacuolas
Ncleos
Trofozoito de Giardia lamblia con solucin lugol
(200X)
TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO
2) Examen post-concentracin

Reunin en un pequeo vol los elementos parasitarios

inicialmente dispersos en una gran masa de heces
Numerosos mtodos

Ninguno evidencia todos los tipos de parsitos, (cada uno tiene

sus indicaciones precisas)
Mtodos fsicos Mtodos difsicos

Por sedimentacin

Por flotacin Empleo de 2 fases no miscibles

Agua // Eter o Acetato etilo
METODOS DE CONCENTRACION
Mtodos fsicos

Dilucin minuciosa heces en lquido o solucin de densidad:

Inferior a la de los parsitos (Tcnicas de sedimentacin)

Superior (Tcnicas de flotacin)

Ventajas:
Realizacin muy simple
Precisan poco material

Inconvenientes:
Procesos largos
Exigen mucha manipulacin
No aplicables a series grandes de muestras

En ciertos casos se puede acelerar x centrifugacin suave

TECNICAS DE CONCENTRACION. Mt de sedimentacin simple

Triturar las heces (10-20 g) en agua

de grifo
Poner la dil en una probeta de 250-500 cc
y rellenar (agua grifo)
Dejar reposar aprox 1 h
Deshechar sobrenadante
Resuspender en agua de grifo
Dejar sedimentar 45 min
Deshechar sobrenadante
Repetir esta op varias veces, hasta que
el sobrenadante quede transparente
Recoger y examinar el mat sedimentado.
Hacer tres tomas:
Superficie
Media altura
Fondo
TECNICAS DE CONCENTRACION. Mt de flotacin

Caractersticas a considerar:

Densidad sol empleada > Dens parsitos

Pelcula
Concentracin en superficie superficial

Importante:
Manipular rpidamente

Impreg huevos operculados Sediment Sulfato

de cinz
Alteracin morfol huevos (Identificacin)

Sedimento
METODOS DE CONCENTRACION

Mtodos fsicos. Ejemplos

Tcnicas de sedimentacin

Mtodo de sedimentacin simple

Mtodo de Faust e Ingalls
Sedimentacin en columna alta

Tcnicas de flotacin

Mtodo de Fulleborn
Mtodo de Willis (flotacin en salmuera)
Mtodo de Faust (flotacin en sulfato de zinc)
 Tcnica de Faust: Mtodo de sedimentacin y
flotacin por centrifugacin con sulfato de zinc al
33,3%
Procedimiento.
- Colocar 1 a 2 g de la muestra de heces en el tubo
de prueba 13 x 100 o 15 x 150 y agregar de 7 a 10
mL de agua filtrada o destilada. Realizar una buena
homogeneizacin con ayuda del bajalengua o
bagueta.
- Colocar en el tubo, un embudo con dos capas de
gasa y filtrar la muestra homogeneizada hasta
alcanzar 1 cm por debajo del borde del tubo
(opcional).
- Retirar el embudo y centrifugar de 2 000 a 2 500
r.p.m. de 2 a 3 minutos (opcional).
 Decantar el sobrenadante, adicionar agua al
sedimento, homogeneizar y repetir la
centrifugacin 1 2 veces, hasta que el
sobrenadante se observe limpio.
- Eliminar el sobrenadante y agregar la solucin de
sulfato de zinc (3-4 mL), homogeneizar y
completar con la misma solucin hasta 1 cm del
borde del tubo.
Centrifugar de 1 a 2 minutos de 2 000 a 2 500
r.p.m.
- Colocar el tubo en la gradilla y agregar, con ayuda
de un gotero, la solucin de sulfato de zinc hasta
formar un menisco en la boca del tubo.
 Colocar una laminilla cubreobjeto sobre el
menisco y dejar en reposo de 5 a 6 minutos.
- Depositar una gota de solucin lugol en la
lmina portaobjeto.
- Retirar la laminilla cubreobjeto, colocarla
sobre la gota de lugol o con asa de Kolle
colocar 3 4 asadas en la lmina y cubrir con
una laminilla cubreobjeto y observar al
microscopio.
Lectura.
Se observan principalmente quistes y huevos
de parsitos.
Huevos oprculados de Paragonimus peruvianus
(izq.) y Fasciola hepatica (der
METODOS DE CONCENTRACION

Mtodos difsicos

Derivados todos del mt de Telemann (1.908)

Empleo de dos fases no-miscibles

Fase acuosa (sol. formaldehido)

Fase ter o disolv de lpidos (Acetato de etilo)

Los elementos fecales y los parsitos se localizan en la fase

acuosa o en la interfase agua-ter, en funcin de una
caracterstica, el balance hidrfilo-lipfilo
 METODOS DE CONCENTRACION

Mtodos difsicos

Realizacin :
Dilucin de las heces en agua Eter
(o el la fase acuosa)
Restos
Adicin y emulsin con el ter Lp disueltos

( o acet de etilo)
Centrifugacin suave
Formalina

Algunos ejemplos:
Mtodo de Telemann
Mtodo de Rivas
Sedimento
Mtodo de Ritchie Parsitos
Mtodo de Blagg, Schloegel,
Mansoer y Khalaf
 Acetato de etilo

Restos fecales y grasa

Formalina

Sedimento (Parsitos) 12
Larvas de Ancylostoma/Necator (100x) en
movimiento del mtodo de Baermann
Huevos Ancylostoma /Necator y Trichuris trichiura
por el mtodo de Kato Katz (400X)
 Examen directo, conc por
flotacin y tincin de
hematoxilina-frrica
%
Examen directo y
d conc por flotacin
e
t
Examen directo
e
c
t
a
d
o

Nmero de exmenes

Incremento de la deteccin de Entamoeba histolytica en relacin

al nmero de muestras fecales examinadas y a las tcnicas empleadas
OTROS EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE
ENTEROPARASITOSIS

Tcnicas del Examen Coproparasitario. Resumen

1.- Observacin macroscpica

2.- Observacin microscpica

2.1.- Observacin microscpica de preparaciones en fresco

(entre porta y cubre)
Muestras de heces directamente en SF o Lugol

Muestras de tcnicas de concentracin

2.2.- Observacin microscpica de preparaciones teidas,

permanentes o no, que permiten la conservacin y la
observacin cuidadosa y detallada de los parsitos
OTROS EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE
ENTEROPARASITOSIS ( PARA PROTOZOARIOS)

TINCIONES ACIDO-ALCOHOL RESISTENTES

Utilidad: Demostracin de ooquistes de Cryptosporidium spp.

Evidenciacin de Cyclospora spp.

Aplicables a frotis de heces (tb ciertos concentrados)

Tcnicas: Las mas empleadas son la de KINYOUN y una

modificacin de la ZIEHL-NEELSEN

TINCION DE HEMATOXILINA-FERRICA

Utilidad: Observacin detallada de quistes, pero s/t de

trofozotos de protozoos.
Si se realiza montaje, buena coleccin permanente
Exige una realizacin cuidadosa,
COLORACIN DE KINYOUN (Cryptosporidium // Cyclospora)

Fijacin frotis: Metanol 30 seg

Tincin : 5 min (frio) con sol de Fuscina bsica

Fusc bsica 4g
Fenol 8g
Etanol (95%) 90 ml
A dest 100 ml

Lavado
a) Etanol 50%: 3-5 min
b) Agua corriente

Decoloracin: Acido sulfrico 1%: 2 min

Contracoloracin: Azul metileno Loeffler: 1-2 min

Azul de metileno 0,3 g
Alcohol 95% 30 ml
KOH 0,01% 100 ml
 Mtodo de Ziehl-Neelsen (modificado para
observacin de coccidias: Cryptosporidium
Procedimiento.
- Colocar las lminas portaobjetos sobre el soporte
de las varillas de vidrio.
- Con el estilete o pinza curva hacer un frotis de
heces en la lmina portaobjeto y dejar secar.
- Fijar la lmina con alcohol metlico de 2 a 5
minutos y dejar secar.
- Agregar hidrxido de sodio sobre el preparado
por un minuto, eliminar el exceso y lavar con agua.
- Cubrir la lmina con la fucsina fenicada (previa
agitacin del frasco) por 5 minutos, diluida
previamente en agua al tercio (1 mL colorante y 2
mL de agua).
 Lavar suavemente la lmina portaobjeto con agua
corriente.
- Decolorar con alcohol-cido, cubriendo el
portaobjeto por unos segundos hasta quitar el
colorante.
- Lavar suavemente el portaobjeto con agua.
- Colocar como colorante de contraste verde de
malaquita 1% o azul de metileno 1-1,4% durante 5
minutos, diluidas previamente al tercio.
- Lavar la lmina suavemente con agua corriente y
dejar secar a temperatura ambiente.
- Realizar el montaje con cytoseal, blsamo de
Canad o Permount, usar una laminilla cubreobjeto
y observar el microscopio.
Observacin.
Los ooquistes de Cryptosporidium, Isospora y Cyclospora aparecen de un
color rojo fucsia sobre un fondo verdoso (con verde de malaquita) o azul
(con azul de metileno). En algunos casos, no se colorean bien, pero la
refringencia caracterstica permite diferenciarlos

Isospora belli coloreado por Ziehl - Neelsen modificado

(400X)
ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES.

Elementos no parasitarios de las heces

Restos alimenticios semi-digeridos

Clulas epiteliales (mucosa intestinal)

Clulas sanguneas

Leucocitos (lceras intestinales)

Macrfagos amebas patgenas
Hemates

Bacterias

Hongos
Elementos no parasitarios de las heces (2)
RESTOS ALIMENTICIOS
Tejido conjuntivo
Fibras musculares estradas (carne) Att tamao / ngulos
Grasas neutras Glbulos refringentes tamao variable
Acidos grasos Agujas finas
Almidn
Crudo: Granos en capas concntricas
Cls reserva amilcea (s/ procedencia)
Celulosa
Digerible: Masas celulsicas (cls reserva)
No digerible: Traquedas, pelos vegetales, polen etc

CRISTALES
Origen alimentario (oxalato de calcio)
Endgeno (Ox calcio, fosfato amnico-magnsico,
Charcott-Leyden)
Medicamentos
 OTROS EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE
ENTEROPARASITOSIS

1.- Examen directo de lquido duodenal

Se obtiene por sondaje duodenal o con cpsula entrica o test

del cordn"Enterotest

Observacin
Fresco (directo o tras centrifugacin)
Extensiones (frotis) coloreados (tinc AAR)

Utilidad / Rendimiento
Trofozotos de Giardia lamblia
Ooquistes de Isospora y Cryptosporidium
Huevos de Fasciola hepatica
Larvas de Strongyliodes stercoralis
2.- Tcnica de Graham (Mt de la cinta adhesiva o esptula adhesiva)

Mtodo mas empleado para el diagnstico de la oxiuriasis

o enterobiasis (Enterobius vermicularis)

Observacin microscpica del material recogido de la zona

perianal, por aplicacin de una sup adhesiva (celofn o similar)

La cinta se dispone sobre un soporte rgido (depresor lengua),

con la sup adhesiva hacia el exterior

Se aplica varias veces sobre la piel, en los mrgenes anales

Se envia al laboratorio y se observa a microscopio (10X)

IMPORTANTE
Realizar al menos 3-5 tomas antes de informar un resultado
negativo
Realizar la toma de muestra a 1 hora por la maana, antes
de salir de la cama
Procedimiento de recoleccin de la
muestra metodo de Graham
Huevos de Enterobius vermicularis (izq.) y Ascaris
lumbricoides (der.) obtenidos por el mtodo de
Graham (100X)