TRANSCRIPCIN

DEL ADN
WILLIAM BENJAMIN RUIZ CHANG
MAGISTER EN BIOQUMICA
 TRANSCRIPCION
Es monocatenaria. Slo se transcribe una cadena de DNA
Es selectiva. Slo se sintetiza RNA a partir de ciertas regiones del DNA.
Es reiterativa. Una misma regin de DNA puede estar siendo transcrita
simultneamente por varias RNA polimerasas, con lo que se obtienen muchas copias.
No requiere de cebadores.
 REQUERIMIENTOS DE LA TRANSCRIPCION

EN PROCARIOTAS EN EUCARIOTAS

RNA Polimerasas (RNA Pol) RNA Polimerasas (RNA Pol)

I, II y III
Topoisomerasa I Topoisomerasa I
Pirofosfatasa. Pirofosfatasa.
DNA molde DNA molde
Los 4 ribonucletidos trifosfato: Los 4 ribonucletidos trifosfato:
(ATP, CTP, GTP, UTP) (ATP, CTP, GTP, UTP)
Mg++ Mg++, Mn++
Factores de transcripcin: Factores de transcripcion especficos.
sigma (), rho () Activadores y represores
Factores de Transcripcin basales:
TFIIA, TFIIB, TFIID, TFIIE, TFIIF, TFIIH.
TFIIS, TFIIIS (elongina).
Poli A polimerasa.
Espliceosoma
 La RNA Polimerasa dependiente de DNA:
Localiza en el DNA los centros de iniciacin y las seales de
terminacin que determinan el final de la transcripcin
Desenrolla un tramo del DNA para producir un molde de DNA de una
sola hebra.
Selecciona el ribonuclesido trifosfato correcto y cataliza la formacin
de un enlace fosfodister. La RNA Polimerasa es completamente
progresiva: el transcrito es sintetizado de principio a fin por una sola
molcula de RNA polimerasa.

RNA Polimerasa de E.coli (RNAPol)

Subun. Funcin

Se une a secuencias reguladoras

Forma enlaces fosfodister

Se une al DNA molde

Reconoce al promotor e inicia

sntesis
ETAPAS DE LA TRANSCRIPCION RNA polimerasa
EN PROCARIOTAS gen

Iniciacin DNA
promotor
Elongacin Iniciacin DNA terminador
Terminacin
Modificaciones postranscripcionales
RNA

Elongacin

Terminacin RNA
creciente

RNA
completo

RNA
polimerasa

TRANSCRIPCIN DE UN GEN
 1 INICIACION
El par de bases donde se inicia la transcripcin recibe el nombre de sitio de
iniciacin de la transcripcin, o sitio de inicio. Por convencin, el sitio de
iniciacin de la transcripcin suele llevar el nmero +1. A los pares de bases
que se extienden en la direccin de la transcripcin, (es decir, hacia el extremo
5 del molde de DNA o corriente abajo) se les asigna nmeros positivos y
aquellos que se extienden en la direccin opuesta (o sea, hacia 3 o corriente
arriba) se les asigna nmeros negativos.
La subunidad de una molcula de DNA
polimerasa se une a una secuencia de
DNA promotora y se forma un complejo
cerrado, en el cual las cadenas de DNA
tienen sus bases apareadas. La
polimerasa separa las cadenas en una
distancia de 10-12 pb alrededor del
sitio de iniciacin de la transcripcin,
con lo que se forma un complejo abierto.
Despus de que se han polimerizado 10
ribonucletidos, el factor se libera y el
ncleo polimersico contina la
transcripcin de la cadena molde.
 2 ELONGACION
La fase de elongacin de la sntesis de RNA comienza despus de la formacin del primer
enlace fosfodister. Un cambio importante es la prdida del factor .
La regin que contiene la RNA Pol, el DNA y el RNA se denomina burbuja de transcripcin.
El RNA recin sintetizado forma una hlice hbrida con la hebra de DNA molde, se cree que
est hlice RNA-DNA tiene una longitud de ~12pb.
 3 TERMINACION
En la fase de terminacin, cesa la formacin
de enlaces fosfodister, se disocia el hbrido
DNA-RNA, se rebobina la regin fundida del
DNA y la RNA Pol se libera del DNA.

Terminacin independiente de rho ():

Las regiones transcritas de los moldes
de DNA contienen seales de
terminacin (stops signals). La ms
sencilla es una regin palindrmica rica
en GC seguida de una regin rica en
AT. El transcrito de RNA de este DNA
palindrmico es autocomplementario.
Por lo tanto sus bases se pueden
emparejar para formar una estructura
secundaria en tallo-asa estable en el
transcrito de RNa.
Este tallo-asa viene seguida de una
secuencia de cuatro o ms residuos U.
El transcrito de RNA finaliza en ellos o
justamente despus.
Terminacin dependiente de rho ():
Algunos sitios de terminacin requieren la participacin de un factor adicional rho (), este detecta
seales de terminacin adicionales que no son reconocidas por la RNAP sola. Rho es una ATPAsa
que desaloja del sitio activo de la RNA Pol al extremo 3 de una cadena de RNA en crecimiento.
 TRANSCRIPCION EN EUCARIOTAS
El ncleo de las clulas eucariotas contiene 3 tipos de RNA Pol que difieren
en la especificidad del molde, localizacin y susceptibilidad frente a los
inhibidores. Las RNA Pol eucariotas son similares a las procariotas en lo que
respecta a la catlisis del ataque nucleoflico del 3OH de la cadena de RNA
en crecimiento, al tomo del fsforo del ribonuclesido trifosfato entrante.
Cada una de las 3 RNA pol eucariotas es considerablemente ms compleja
que la RNA Pol de E. coli. Las tres contienen 2 subunidades grandes y 2
ms pequeas, con homologa con las subunidades 2, y de la RNA Pol
de E. coli, as como tambin varias subunidades pequeas adicionales.
La RNA Pol II suele iniciar la transcripcin de los genes en un par de
bases especfico o pares de bases alternativos vecinos en un molde de DNA.
El nucletido 5 que tiene el cap en un RNAm concuerda con el nucletido de
la cadena molde en el cual se inicia la transcripcin.

Tipo RNA Transcrrito Localizacin Req. Inicos Efecto de la -Amanitina

I RNAr 5.8S,18S y 28S Nucleolo Mg2+ Insensible
II RNAm y RNAsn Nucleoplasma Mg2+ Fuertemente inhibida
III RNAt, RNAr 5S Nucleoplasma Mn2+ Inhibida a alta concentracin
 El promotor es relativamente corto
Consiste de la caja TATA (caja de Hogness)
Importante en determinar el punto preciso de inicio de la transcripcin
El centro promotor por s mismo produce un bajo nivel de transcripcin
Este es llamdo transcripcin basal
Los elementos regulatorios afectan la unin de la RNA polimerasa al promotor
Hay dos tipos
Activadores (Enhancers)
Estimula la transcripcin
Represores (Silencers)
Inhiben la transcripcin
Ellos varan su localizacin pero son encontrados a veces en la regin -50 a -100
muchas veces.
1) INICIO DE LA
TRANSCRIPCION
La sntesis de un RNA dado se produce
cuando el gen respectivo, mejor dicho,
sus secuencias reguladoras y el
promotor, se activan por protenas
especiales, llamadas factores de
transcripcin.

Los factores de transcripcin especficos

interactuan con el regulador del gen.
Los factores de transcripcion basales son
requeridos por el promotor, pues se unen
a la secuencia TATA para comenzar la
sntesis del RNAm.

EL TFIID se halla integrado por varias

subunidades, una llamada TBP (TATA
binding protein) y las otras TAF (TBP-
associated factors).
El proceso se inicia al unirse el TFIID al
promotor, por medio de la TBP.
Esta unin altera la estructura de la cromatina en el
promotor, que abandona su forma rectilnea y se pliega
hasta formar un ngulo de unos 100.
El cambio atrae tanto a los restantes factores de
transcripcin basales como a la RNA polimerasa II.

La RNA polimerasa II es fosforilada por el TFIIH. A

continuacin la DNA polimerasa II fosforilada se
desprende de los factores de transcripcin y abre la
doble hlice del ADN en el sector del gen contiguo al
promotor se forma la burbuja de transcripcin-, con lo
cual se inicia la sntesis de RNA.
 Para alargar el ARNm. La RNA
polimerasa II necesita dos
factores adicionales, los factores
de elongacin TFSII y TFSIII
(elongina).

La RNA Polimerasa II agrega a

la molcula de ARN unos 50
nucletidos por segundo.

En los geens que codifican el

ARNm ano no se ha
identificado la ecuencia de
nucletidos responsable de la
terminacin de la transcripcin.
 MODIFICACIONES
POSTRANSCRIPCIONALES

Intron 1 Intron 2 Intron 3 Intron 4 Intron 5

Exon 1 Exon 2 Exon 3 Exon 4 Exon 5 Exon 6
Transcripcin
(a) Transcrito primario

RNA splicing
Eliminacin de intrones

(b) RNA editado

Procesamiento
Cap Cola poli A
(c) RNA maduro
Traduccin

(d) Protena
Agregado del capuchn (cap) en el extremo 5
Una enzima especfica incorpora una guanosina trifosfato (GTP) al extremo 5 del transcripto.
La enzima metiltransferasa toma dos grupos metilo de la S-adenosilmetionina- y los trransfiere al ARNm:
uno a la guanania del cap se forma as la 7-metilguanosina- y el otroal nucletido del RNAm.
Agregado de la cola de poli-A en el extremo 3

Al extremo 3 del RNAm se le agrega una secuencia de ~250 adeninas llamadas poliA.
Antes que la RNA polimerasa II alcance la secuencia de terminacin del gen, varios factores
especficos reconocen en el transcripto primario una secuencia llamada seal de poliadenilacin
formada por los nucletidos AAUAAA.
Los factores CPSF (cleavage and polyadenylation sepcificity factor), CSTF (cleavage stimulation factors),
CFI y CFII (cleavage factor). Uno de ellos corta el ARNm unos 20 nucletidos despus de la seal de
poliadenilacin y el transcripto primario se separa del ADN.
Corte y Empalme Splicing
Los agentes responsables de los cortes y empalmes en el ARNm son las ribonucleoprotenas pequeas
nucleares (RNAsn= small nuclear RNA), que poseen ARN rico en uridinas.
Las RNApn que participan son las llamadas U1, U2, U4, U5 y U6, las cuales concurren al sector del
transcripto primario que va a ser procesado y forman un complejo macromolecular denominado
espliceosoma (por splicing, empalme)
 CODIGO GENETICO
Se llama cdigo gentico al conjunto de correlaciones entre cada triplete de
bases del RNAm (codn) y el correspondiente aminocido de la protena.

CARACTERISTICAS DEL CODIGO GENETICO:

a. El cdigo gentico es casi universal. En todos los organismos estudiados
(eucariotas, procariotas y virus) se observa la misma correspondencia entre
tripletes y aminocidos. Existe variaciones en el cdigo gentico para la
sntesis de protenas en mitocondrias.
b. El cdigo gentico es degenerado. Como hay 61 tripletes que codifican los
20 aminocidos, muchos aminocidos tienen ms de un codn. Los
diferentes codones para un aminocido dado se denominan codones
sinnimos.
c. El cdigo gentico no es ambiguo: cada triplete codifica un solo aminocido
d. El cdigo incluye un codn de arranque (iniciador) AUG, que especifica
metionina; y tres codones UAA, UAG y UGA- que no especifican
aminocidos, sino que constituyen seales de stop o fin de traduccin
(terminador) en el extremo de las cadenas de RNAm.
e. Los tripletes se encuentran yuxtapuestos en el RNAm.
 CODIGO GENETICO
Segunda base

U C A G

U UUU Fenil- UCU UAU UGU U

Tirosina Cisteina
UUC alanina UCC UAC UGC C
Serina
UCA Codon stop
A
UUA UAA Codon stop UGA
Leucina UCG G
UUG UAG codon stop UGG Triftpfano

CCU CGU
C CUU CAU Histidina U
primera base

CUC CCC CAC CGC C

Tercera base
Leucina Prolina Arginina
CUA CCA CAA CGA A
Glutamina G
CUG CCG CAG CGG
AUU ACU AAU AGU U
AUC Isoleucina Asparragina AGC Serina C
A ACC AAC
Treonina
AUA ACA AGA A
AAA G
AUG Metionina ACG Lisina AGG Arginina
AAG
codon inicio
GUU GCU GAU cido GGU U
G GUC GCC GAC asprtico GGC C
Valina Alanina Glicina
GUA GCA GAA GGA A
cido G
GUG GCG GAG GGG
Glutmico