UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

Deteccin molecular de regiones oncognicas E6 y E7 de Virus del Papiloma Humano

mediante PCR en pacientes Papanicolau negativo del Instituto de Enfermedades
Neoplsicas de La Libertad

AUTOR: Br. Josu Ricardo Arteaga Nuez (Tesis ttulo de bilogo)

ASESOR: Blgo. Ms. C. Manuel Pesantes Vera
INTEGRANTES

DIAZ FERNANDEZ, Claudia

DIAZ ZAVALETA, Paula
ESCOBEDO AZAERO, Morelia
FERNANDEZ TORRES, Sthefano
HOYOS HONORIO, Rosmery
ISPILCO HERRERA, Jhon
LEON ALAYO, Alfredo
 INTRODUCCIN
Segn la OMS el Cncer Cervicouterino (CaCu) es la segunda causa de
mortalidad en mujeres a nivel mundial.

Pases capitalistas presentan tasas bajas.

Pases subdesarrollados presentan tasas anuales muy altas.

Infeccin con tipos virales oncognicos es originado por genotipos

oncognicos del VPH.

El CaCu es el resultado de displasia o neoplasia intraepitelial cervical.

 Frecuente en mujeres de 20 y 30 aos.

Prevalencia de infeccin por VPH va de un

2 % a un 44 %, siendo ms alta entre
mujeres jvenes, disminuyendo las cifras
conforme la edad aumenta

Los VPH oncognicos, se le ha considerado

como una causa necesaria porque se
encuentran en casi todos los casos.

La infeccin del VPH se transmite por

contacto sexual.
La infeccin por VPH es inicialmente asintomtica, y la
transmisin puede ocurrir antes de que la expresin del
virus se manifieste.
 Papilomavirus

Papillomaviridae
(Papiloma virus Polyomaviridae
18 gneros )

Papilomavirus
humanos

Alfa
papillomavirus
(15 especies)

Bajo riesgo Alto riesgo

VPH 16, 18, 31,

VPH 6 y 11 33, 35, 45, 51,
52, 56 y 58.

Nu - Mu Gamma Beta
papilomavirus papilomavirus papillomavirus papillomavirus
ESTRUCTURA
Cpside icosadrica no lipdica de 72
capsmeros.
Genoma de ADN circular de doble hebra,
compuesto por 7200 8000 pb.
Se divide en 3 regiones:
Temprana: codifica protenas virales E1
E2 E4 E5 E6 y E7.
Tarda: codifica protenas de la cpside
L1 y L2.
De control: contiene ADN para la
replicacin y expresin del genoma viral.
TEMPRANA
E1: Modulacin de la replicacin del ADN
E2: Regula la expresin de E6 y E7 en la transcripcin viral.
E3: Desconocida
E4: Disrupcin de citoqueratina en clulas escamosas.
E5: Ligada a transformacin celular y receptores de factores de
crecimiento.
ALTO RIESGO
E6: Ligada a transformacin celular e interacciona con las
protenas p53
E7: Incremento de proliferacin celular Interacciona con las
protenas pRb
E1 reclutan protenas Hsp (formar helicasa),
SSB(destabilizadoras) y DNA polimerasas
(replicacin) para dar origen a la helicasa viral.

La situacin mas critica

de infeccin por VPH es
debido a la integracin
del genoma viral al
ADN cromosmico de
la clula infectada.
 El mecanismo de accin de VPH de alto riesgo en el desarrollo de
neoplasia cervical esta dado por accin de las oncoprotenas E6 y E7.

La progresin del cncer se debe a la sobreexpresin de las

oncoprotenas E6 y E7, por la perdida de E2.

E6 y E7 interactan con la p53 y pRb respectivamente.

E6 al formar complejos con p53, lo bloquea.

La expresin de E7 y sus agentes de pRb resultan incrementando los

niveles de p53, activando la expresin de genes proapopticos.
TARDA

L1: Junto con la alfa-integrina ayuda a unir a la clula basal con el virus

L2:
Receptor: Integrina 6

Genes L1 y L2:
La descapsidacin son genes que se
tiene lugar en el expresan en las
endosoma. clulas basales y
parabasales del
epitelio.
Infeccin por VPH Replicacin genoma ncleo por Protena E1.
La presente investigacin tiene como objetivo principal, detectar las
regiones oncognicas E6 y E7 de Virus del Papiloma Humano mediante
PCR en pacientes Papanicolau negativo del Instituto de Enfermedades
Neoplsicas de la Libertad. As mismo, como objetivos secundarios,
determinar el grado de incidencia tipificando oncogenes de alto y bajo
riesgo, as como tambin, evaluar el tipo de infeccin que presenta
cada paciente a causa de la presencia simultnea de ciertos genotipos
de VPH.
MATERIALES Y METODOS
 RESULTADOS

Figura 1. Deteccin de VPH mediante PCR con primers MY09-MY11, 1-20 :Muestras de estudio,
C-: Control negativo, C+ : Control positivo, M; Marcador de peso molecular (100pb), CP: Patrn de
corrido (150pb)
Figura 2. Deteccin de VPH mediante PCR con primers GP5
+ - GP6+.01-06:Muestras de estudio,
C-:Control negativo, C+ :Control positivo,
M: Marcador de peso molecular (100pb)
 Figura 4. Deteccin de oncogenes E6 Y E7 de VPH 16
Figura 3 .Deteccin de oncogenes E6 Y E7 de VPH 16
(119pb) y VPH 18 (172pb) mediante PCR.04-15:
(119pb) mediante PCR.01-14: Muestras de estudio,
Muestras de estudio,16 y 18 :Genotipos de VPH,
C-:Control negativo, C + control positivo,
C-:Control negativo, C+:Control positivo, M: Marcador
M: Marcador de peso molecular (100pb)
de peso molecular (100pb )
Figura 5. Deteccin de oncogenes E6 y E7 de VPH 33(398 pb)
mediante PCR.01-12: Muestras de estudio, C-:Control
negativo, M: Marcador de peso molecular (100pb).
Figura 6. Deteccin de oncogenes E6 y E7 de VPH 52 Figura 7. Deteccin de oncogenes E6 y E7 de
(229 pb) mediante PCR . 04-12: Muestras de estudio, PVH 6/11(334pb) mediante PCR . 16-20:
C-:Control negativo, CP : Patrn de corrido (150pb), Muestras de estudio, M : Marcador de peso
M : Marcador de peso molecular (100pb) molecular (1 kb)
 Oncogenes (E6 YE7) de genotipos 10 16
encontrados
CASOS
Infecciones simples Infecciones mltiples 11 16

LR-VPH HR-VPH LR-VPH HR-VPH 12 16,52

1 16 13 16
2 16
14 16
3 16
15 16
4 16,33,52
16 - - - -
5 16
17 6/11
6 16,18

7 16,52 18 6/11

8 16 19 6/11

9 16,18 20 6/11
 DISCUSION
Se ha estudiado que en el 99% de casos tratados de Cncer Cervicouterino
est implicado algn genotipo de VPH por lo que se considera un factor
necesario para el desarrollo del cncer invasivo. A este grupo se le denomina
VPH de alto riesgo y entre estos tenemos los tipos: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45,
52, 56, 58, etc. As mismo, se estima que en mas del 75% de casos estn
asociados frecuentemente a los genotipos 16, 18, 31, 33 y 52; y en menor
grado los VPH de bajo riesgo 6 y 11, ms frecuentes en causar verrugas
genitales o cambios leves en el cuello uterino.
La deteccin mediante PCR de VPH presenta una sensibilidad aproximada del
90%, con un intervalo ms compacto (84.9 100%) y no vara con la edad;
mientras que en los anlisis citolgicos la especificidad se incrementa con la
edad y resulta ms baja.
 El perfil electrofortico se visualiz en gel de poliacrilmida al 4%
y la tincin con nitrato de plata permiti, la identificacin
especifica de los oncogenes E6 y E7 de tipos de VPHs presentes
en una muestra mediante la simple determinacin de la longitud
del amplicon.

En las pacientes evaluadas se encontraron una alta frecuencia de

oncogenes de VPH 16 (75%). En cuanto al VPH 18 se obtuvo una
baja frecuencia oncognica del 10%.
 La incidencia de VPH 31, 33 y 52 son menos del 10%; en esta
investigacin se obtuvo un 15 % de VPH 52, lo que explica que el VPH
52 es el genotipo con mas prevalencia en el Per. As mismo se
encontr el 15% de casos con oncogenes de VPH 6/11. Se encontr
infecciones mltiples en un 25% de pacientes evaluados. Algunos
estudios reportan que se estima que el 10 80% de pacientes que
desarrollan cncer, lo adquieren por una coinfeccin por ms de un
genotipo de VPH.
Existe una mayor ocurrencia de infecciones mltiples de VPH de alto
riesgo, segn Wentzensen los 7 genotipos que forman combinaciones
mltiples son de VPH 16, 18, 31, 33, 45, 52 y 58; varia de 77,7%
(infecciones simples) a 86,9% (infecciones mltiples).
 Son diversos los factores asociados a un mayor riesgo de adquirir una
infeccin, sino tambin la probabilidad de que esta sea producida por
ms de un tipo, el estado inmunolgico de la paciente, el
comportamiento sexual, la edad de inicio de las relaciones sexuales,
nmero de parejas sexuales y el comportamiento sexual de la pareja
estn asociados a un mayor riesgo de infeccin mltiple.
El resultado obtenido en esta investigacin sugiere que el VPH es muy
frecuente aun en mujeres con Papanicolaou negativo. Por tanto, siempre
y cuando existan factores de riesgo, ser necesario recomendar una
prueba altamente especifica cmo es la PCR para la deteccin
oncognica de VPHs inclusive antes que la clula presente cambios
citopticos.
 CONCLUSIONES
Se detect regiones oncognicas E6 y E7 de VPH mediante PCR en
pacientes evaluados Papanicolaou negativo del Instituto Regional de
Enfermedades Neoplsicas de La Libertad, encontrndose un elevado
porcentaje de pacientes con genotipos virales de VPH de alto riesgo.

Se pudo identificar que las regiones oncognicas E6 y E7 de VPH 16 es el

ms incidente y en menor grado el VPH 6/11, 52, 18 y 33.

Se identific infecciones simples predominantes de VPH 16 y 6/11. As

mismo, infecciones mltiples de VPHs (16, 33 y 52), (16 y 18) (16 y 52).