Enzimas

ENZIMAS
Protenas altamente especializadas.
Funcin: catlisis o regulacin de la velocidad de las
reacciones qumicas en los seres vivos.
Hace posible que en condiciones fisiolgicas tengan lugar
reacciones que sin catalizador requeriran condiciones
extremas de presin y temperatura o tiempos muy largos.
Las enzimas son generalmente protenas globulares que
pueden presentar tamaos muy variables
Casi todos los procesos en las clulas necesitan enzimas
para que ocurran a unas tasas significativas. (Grisham Et.al,
1999)
Las sustancias cuya transformacin qumica es acelerada
por accin de una enzima se llaman substratos.
 PROPIEDADES GENERALES
ESTRUCTURA GLOBULAR.
AUMENTAN LA VELOCIDAD DE REACCIN
De 106 a 1012 veces sin enzima.
An ms rpido que los catalizadores qumicos.
CONDICIONES DE REACCIN
Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)
pH neutro (5-9), la mayora 6.5 7.5
Presin atmosfrica normal
CAPACIDAD DE REGULACIN
Por concentracin de sustrato
Por concentracin de enzima
Por inhibidores competitivos (semejantes al sustrato)
Por inhibidores no competitivos (modificacin covalente de la enzima)
Por regulacin alostrica
ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIN
Interaccin estereoespecfica con el sustrato
No hay productos colaterales
a.- Estructura globular
 b.- Alto poder catalitico

Catalizadores inorgnicos. 102-103 veces

Enzimas. 106-1020
Ejplo. catalasa (hidratacin del CO2) CO3NH2.
107 veces
 c.- Accin a condiciones ambientales
Produccin de NH3

Fijacion biolgica de nitrgeno.

Proceso enzimtico

Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)

pH neutro (5-9), la mayora 6.5 7.5
Presin atmosfrica normal
 d.- Especificidad.
Solo catalizan reacciones especficas.
Ejplo. Accin de enzimas amilasas.
La regin de la enzima que se une al sustrato recibe el nombre de
centro activo.
Las enzimas poseen uno o ms sitios especficos donde se une el o
los sustratos de una reaccin.
En l se encuentran los residuos catalticos que participan en la
reaccin enzimtica.
Accin del sitio activo
 Caractersticas del centro activo

Es una parte muy pequea del volumen total de la

enzima.
Tienen una estructura tridimensional en forma de hueco
que facilita encajar al sustrato.
Estn formados por aminocidos lejanos en la secuencia
polipeptdica, que debido a los repliegues de sta, quedan
prximos.
Los radicales de estos aminocidos presentan afinidad
por el sustrato, lo atraen y establecen enlaces dbiles con
l.
Esto facilita que, una vez roto alguno de sus enlaces, los
productos resultantes se puedan separar con facilidad del
centro activo.
Aminocidos comunes, en sitios activos de
enzimas
 MODO DE ACCIN DE LAS ENZIMAS

La enzimas permiten que los reactantes (sustratos) se

unan a su centro activo con una orientacin ptima
para que la reaccin se produzca y modifica las
propiedades qumicas del sustrato unido a su centro
activo, debilitando los enlaces existentes y facilitando
la formacin de otros nuevos
En una enzima se pueden distinguir tres tipos de aminocidos

Aminocidos estructurales.
Son los ms abundantes y los
responsables de la forma de la enzima.
Por ejemplo, en la lisozima de 129
aminocidos, 124 son estructurales y slo
5 no lo son.

Aminocidos de fijacin.
Son los que establecen enlaces dbiles
con el sustrato y lo fijan.
Se encuentran en el centro activo de la
enzima
Aminocidos catalizadores.
Son los que al establecer enlaces, con el
sustrato, provocan la reaccin. Centro activo
Son los responsables de su
transformacin.
Tambin estn en el centro activo
 Modelos de interaccin (Especificidad)
Hay dos modelos sobre la forma en que el sustrato se une al centro
activo del enzima: el modelo llave-cerradura, y el modelo del ajuste
inducido

a.- Modelo de llave y cerradura.

La estructura del sustrato y la del centro activo son complementarias
Este modelo es vlido en muchos casos, pero no es siempre
correcto
 b.- Modelo del ajuste inducido
el centro activo adopta la conformacin idnea slo en
presencia del sustrato.
La unin del sustrato al centro activo del enzima
desencadena un cambio conformacional que da lugar a
la formacin del producto.
Fructosa bifosfato aldolasa
 COFACTORES Y COENZIMAS
Segn su composicin, las enzimas se clasifican en dos grupos:

Enzimas holoprotenas: Constituidos solamente por secuencias de

aminocidos. Son poco frecuentes, pudindose citar como la
ribonucleasa y la lisozima.

Enzimas heteroprotenas: Estn formados por dos componentes:

a) naturaleza proteica llamado apoenzima

b) no proteico grupo prosttico;
inorgnico (cofactor)
orgnico (coenzima)

El conjunto de los dos componentes, apoenzima y coenzima, forma

el enzima completo que se llama holoenzima.
Cofactores enzimticos
 Coenzimas y vitaminas
Muchos coenzimas son, o provienen de sustancias
conocidas como vitaminas.
Las vitaminas son una serie de sustancias de naturaleza
qumica variada que, en cantidades mnimas, son
necesarias para el normal desarrollo y funcionamiento de
muchos organismos.
Su importancia biolgica se debe a que algunos organismos
no las pueden sintetizar y deben adquirirlas del exterior.
En la actualidad est perfectamente establecida la funcin
coenzimtica de la mayora de las vitaminas hidrosolubles: a
excepcin de la vitamina C todas forman parte de alguno de
los coenzimas conocidos.
Por ejemplo la coenzima NAD, es una molcula derivada de
la vitamina B5 (acido nicotnico), y contribuye en la catalisis
de las reacciones de oxidoreduccion intracelulares
Coenzima: NAD+

Deriva de la Vitamina B5
(cido nicotnico)
Intervencin del NAD en en la conversin del piruvato en lactato en los
microorganismo lctico y en el musculo de los mamferos
.

Del par de electrones que libera el sustrato, uno es transferido al

nitrgeno cargado positivamente del anillo nicotinamida del NAD+, y
un tomo de hidrgeno es transferido al tomo de carbono
C4 opuesto a este nitrgeno.

La reaccin es fcilmente
reversible, cuando el
NADH reduce otra
molcula y es re-oxidado
a NAD+.
 EFECTO CATALITICO DE ENZIMAS
De acuerdo con la teora cintica de las reacciones, para que se produzca
una reaccin es necesario que las molculas reactantes choquen entre s, y
que tal choque suceda con suficiente energa como para vencer la barrera
energtica entre las molculas (choques efectivos).

La accin de los catalizadores

consiste en disminuir la Energa
de activacin
Por ej, la descomposicin del
agua oxigenada (H2O2) puede
ocurrir
sin catalizador
Ea= 18 Kcal/mol
con un catalizador inorgnico
(platino) Ea= 12 Kcal/mol
con una enzima especfico
(catalasa) Ea= 6 Kcal/mol
As, el platino acelera la reaccin
20.000 veces, mientras que la
catalasa la acelera 370.000 veces.
 NOMENCLATURA
Hay varias formas de nombrar una enzima:
Nombres particulares
Nombre sistemtico
Cdigo de la comisin de enzimas

NOMBRES PARTICULARES.
Antiguamente, los enzimas reciban nombres particulares,
asignados por su descubridor.

Ejemplos: amilasa, pepsina, tripsina, glucoquinasa

 NOMENCLATURA: NOMBRE
SISTEMTICO

Consta de 3 partes:
a. el sustrato preferente
b. el tipo de reaccin realizado
c. terminacin "asa

ejemplo: la glucoquinasa

ATP:glucosa fosfo transferasa

Glc + ATP Glc-6P + ADP
 NOMENCLATURA: COMISIN DE ENZIMAS
El nombre es identificado por un cdigo numrico:
Encabezado por las letras EC (enzyme commission)
Seguidas de cuatro nmeros separados por puntos.
1 nmero indica a cual de las seis clases pertenece la
enzima,
2 nmero se refiere a distintas subclases.
3 nmero se refiere al grupo qumico especfico que
interviene en la reaccin.
4 nmero al orden de descubrimiento.
Ej.: la ATP: glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa)
Glc + ATP Glc-6P + ADP
EC. 2..7..1..2.
2: Transferasa
7: fosfotransferasa
1: el aceptor es un grupo OH
2: es un OH de la D-glucosa
 Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de oxidorreduccin, es decir, transferencia
de hidrgeno (H) o electrones (e-) de un sustrato a otro, segn
la reaccin general:
AH2 + B A + BH2

Ared + Box Aox + Bred

Ejemplos son la succinato deshidrogenasa o la citocromo c

oxidasa.
Enzimas:

No. Clase Tipo de reaccin Ejemplo

que catalizan
Deshidrogenasas
1 Oxidorreductasas De xido reduccin Peroxidasa
(transferencia de e-) Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas

Reduccin: ganancia de electrones (hidrgeno o prdida de

oxgeno)

Oxidacin: prdida de electrones (hidrgeno o ganancia de

oxgeno).

La Oxidacin y la Reduccin son reacciones acopladas (REDOX)

 CLASE 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo qumico (distinto del
hidrgeno) de un sustrato a otro, segn la reaccin:
A-B + C A + C-B
Ejemplo: glucoquinasa (ATP:glucosa fosfo transferasa), que
cataliza la reaccin siguiente:
glucosa + ATP ADP + glucosa-6-fosfato

grupos aldehdos
gupos acilos
grupos glucosilos
grupos fosfatos
(kinasas)
 Ejemplo. ATP:glucosa fosfo transferasa

En la gluclisis, esta enzima fosforila a una molcula

de glucosa, a partir de ATP, con lo cual se inicia la va principal
de metabolismo de azcares, para obtener energa a partir de
stos compuestos
Enzimas:
No. Clase Tipo de reaccin que Ejemplo
catalizan

Deshidrogenasas
1 Oxidorreductasas De xido reduccin (transferencia de Peroxidasa Oxidasas
e-) Oxigenasas
Reductasas

2 Transferasas Transferencia de grupos Kinasas

Transaminasas
 Clase 3:
HIDROLASAS

Catalizan las reacciones de hidrlisis:

A-B + H2O AH + B-OH
Un ejemplo es la lactasa, que cataliza la reaccin:
lactosa + agua glucosa + galactosa
Transforman polmeros en monmeros. Actan sobre: enlace
ster ,enlace glucosdico ,enlace peptdico ,enlace C-N
ENZIMAS:

No. Clase Tipo de reaccin que Ejemplo

catalizan

Deshidrogenasas
1 Oxidorreductasas De xido reduccin (transferencia de e-) Peroxidasa Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas

2 Transferasas Transferencia de grupos Kinasas

Transaminasas

Hidrlisis, con transferencia Pirofosfatasa

3 Hidrolasas de grupos funcionales del Tripsina
agua Aldolasa
 Clase 4. LIASAS
(adicin o ruptura de dobles enlaces)
Son enzimas que catalizan la ruptura de enlaces C-C, C-O,
C-N y otros enlaces por medios distintos a la hidrlisis o
la oxidacin.
Requieren de la participacin de un solo sustrato para
efectuar una reaccin en un sentido y de dos para realizar la
reaccin contraria.
Descarboxilasas, son liasas carbono-carbono que agregan
o remueven carboxilos de diferentes compuestos orgnicos.

Ejemplo: La piruvato
carboxilasa, que cataliza la
decarboxilacin del cido
pirvico a acetaldehdo y
dixido de carbono
Enzimas:
No. Clase Tipo de reaccin que Ejemplo
catalizan
Deshidrogenasas
1 Oxidorreductasas De xido reduccin (transferencia de e-) Peroxidasa Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas

2 Transferasas Transferencia de grupos Kinasas

Transaminasas

3 Hidrolasas Hidrlisis, con transferencia de grupos Pirofosfatasa

funcionales del agua Tripsina
Aldolasa

4 Liasas Lisis de un substrato, (Sintasas)

generando un doble enlace, o
Adicin de un substrato a un Descarboxilasa
doble enlace de un 2o. pirvica
substrato
 Clase 5:
ISOMERASAS
Catalizan la interconversin de ismeros:
A B
Ejemplo, la gluco isomerasa que cataliza la
reaccin :gliceraldehdo-3-fosfato dihidroxiacetona-
fosfato

La fructosa tiene capacidad edulcorante 30% mayor que la

sacarosa, 2.5 veces mayor que la glucosa y es 2 veces ms
soluble que la glucosa
Enzimas:
No. Clase Tipo de reaccin que Ejemplo
catalizan
Deshidrogenasas
1 Oxidorreductasas De xido reduccin (transferencia de Peroxidasa Oxidasas
e-) Oxigenasas
Reductasas
2 Transferasas Transferencia de grupos Kinasas
Transaminasas
3 Hidrolasas Hidrlisis, con transferencia de grupos Pirofosfatasa
funcionales del agua Tripsina
Aldolasa
4 Liasas Lisis de un substrato, generando un (Sintasas)
doble enlace, o Descarboxilasa
Adicin de un substrato a un doble pirvica
enlace de un 2o. substrato
(Sintasa)

5 Isomerasas Transferencia de grupos en Mutasas

el interior de las molculas Epimerasas
para dar formas ismeras Racemasas
 Clase 6: LIGASAS
Catalizan la unin de dos sustratos con hidrlisis
simultnea de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.):
A + B + XTP A-B + XDP + Pi
Ejemplo: ADN-ligasa, que une los nucletidos a la cadena del ADN,
con consumo de ATP. Forma enlaces covalentes entre el extremo 5
de una cadena polinucleotdica y el extremo 3 de otra cadena
polinucleotdica.
Enzimas:
No. Clase Tipo de reaccin que Ejemplo
catalizan
Deshidrogenasas
1 Oxidorreductasas De xido reduccin (transferencia de e-) Peroxidasa Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas
2 Transferasas Transferencia de grupos Kinasas
Transaminasas
3 Hidrolasas Hidrlisis, con transferencia de grupos Pirofosfatasa
funcionales del agua Tripsina
Aldolasa
4 Liasas Lisis de un substrato, generando un (Sintasas)
doble enlace, o Descarboxilasa pirvica
Adicin de un substrato a un doble
enlace de un 2o. substrato
(Sintasa)
5 Isomerasas Transferencia de grupos en el Mutasas
interior de las molculas para Epimerasas
dar formas ismeras Racemasas
6 Ligasas Formacin de enlaces C-C,
C-S, C-O y C-N. Mediante Sintetasas
reacciones de condensacin,
acopladas a la ruptura del ATP
 Clases E. C. para enzimas
1. XIDORREDUCTASAS
(Reacciones de oxidacin-reduccin)
1. Actan sobre CH-OH
2. Actan sobre C=O
3. Actan sobre CH=CH
4. Actan sobre CH-NH2
5. Actan sobre CH-NH
6. Actan sobre NADH o NADPH
7. Actan sobre otros compuestos nitrogenados
8. Actan sobre un grupo sulfuro
9. Actan sobre un grupo hemo
10. Actan sobre difenoles
11. Actan sobre perxido de hidrgeno
12. Actan sobre hidrgeno
13. Actan sobre donadores sencillos con incorporacin de 0, (oxigenasas)
14. Actan sobre donadores complejos con incorporacin de 02
15. Actan sobre radicales superxido
16. Oxidan iones metlicos
17. Actan sobre CH2
18. Actan sobre ferredoxina reducida
19. Actan sobre flavodoxina reducida Otras xidorreductasas
2.TRANSFERASAS 3.HIDROLASAS
(Transferencia de grupos
funcionales)
1. Grupos con un carbono
2. Grupos aldehdo o
cetona
3. Grupos acilo
4. Grupos glicoxilo
5. Grupos alquilo o arilo
6. Grupos nitrogenados
7. Grupos que contienen
fsforo
8. Grupos que contienen
azufre
(Reacciones de hidrlisis)
1. steres
2. Enlaces glucosdicos
3. Enlaces ter
4. Enlaces peptdicos
5. Otros enlaces C-N
(diferentes del peptdico)
6. Anhdridos de cido
7. Enlaces C-C
8. Enlaces haluro
9. Enlaces P-N
10.Enlaces S-N
11.Enlaces C-P
4. LIASAS
6.LIGASAS
(Adicin a dobles enlaces)
(Formacin de enlaces
1. Liasas C-C acoplados con la transformacin
2. Liasas C-O de substancias como ATP o
3. Liasas C-N nuclesidos)
4. Liasas C-S Enlaces C-O

5. Liasas C-haluro Enlaces C-S

6. Liasas P-O Enlaces C-N

Enlaces C-C
5.ISOMERASAS Enlaces ster fosfrico
1. Racemosas y epimerasas
2. Isomerasas cis-trans
3. Oxidorreductasas
intramoleculares
4. Transferasas
intramoleculares
5. Liasas intramoleculares
 BASES DE LA CINETICA ENZIMATICA
Estudia la velocidad de las reacciones catalizadas
enzimticamente

FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD

1.Concentracin de Enzima. En presencia de exceso de
sustrato, la actividad es proporcional a la concentracin
enzimtica
2.Concentracin de sustrato
3.pH
4.Temperatura
5.Presencia de activadores
 1. Concentracin de Enzima
En presencia de exceso de sustrato, la actividad es
proporcional a la concentracin enzimtica
2. Concentracin de sustrato
Las reacciones enzimticas se saturan con el sustrato (son autosaturantes)
 Efecto autosaturante
Significa que a mayor cantidad de sustrato, mayor nmero de
centros catalticos estarn ocupados, lo que incrementar la
eficiencia de la reaccin, hasta el momento en que todos los sitios
posibles estn ocupados.
En ese momento se habr alcanzado el punto de saturacin de la
enzima y, aunque se aada ms sustrato, no aumentar ms la
eficiencia

Las enzimas tienen una capacidad limite de interaccin. (3 de las 6)

 3. Efecto del pH
La actividad enzimtica pasa por un mximo (pH ptimo).
El pH ptimo de las enzimas vara ampliamente; para la pepsina, del
estmago, es de 1,5, la arginasa tiene un pH ptimo de 9,7.

La gran mayora de enzimas tienen un ptimo alrededor del pH fisiolgico

de, ~7.0
Explicacin: El sitio activo de la enzima esta frecuentemente
compuesto de grupos ionizables que deben estar en la forma
inica para tener actividad, unir los sustratos o catalizar la
reaccin.
Si varia grandemente la concentracin de iones H+, la
enzima se desnaturaliza.
4. Temperatura
En el efecto de la temperatura
hay dos componentes:
1.Aceleracin de la reaccin
segn la ecuacin de
Arrhenius. (dentro del margen
de actividad)
k = A exp (-Ea/RT)

Para casi todas las enzimas,

un incremento de 10C duplica
la velocidad de reaccin.
2. Desnaturalizacin trmica de
la protena.
Para muchas enzimas la regin
de inactivacin trmica est
muy prxima de la temperatura
ptima.
 CINTICA DE REACCIONES CON UN SLO SUBSTRATO

Michaelis y Menten propusieron un modelo para relacionar la

velocidad de reaccin con la concentracin de substrato.
Considerando la formacin de un complejo ES intermedio.
Suponiendo la existencia de un solo complejo central, el
esquema de reaccin sera:
 VELOCIDAD DE REACCION VS CONCENTRACION
La ecuacin de Michaelis-
Menten describe como vara la
velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas de
acuerdo a la concentracin de
sustrato:

1. Vmax = velocidad mxima terica = la velocidad cuando todos los centros

activos estn ocupados con sustrato (nunca alcanzada en la realidad)
2, Km (constante de Michaelis-Menten para cada enzima) = concentracin
de S a la que la V es 1/2 Vmax.
 CARACTERSTICAS DE KM:
Es una medida de la afinidad del enzima por el S.
Cuanto menor es Km, mayor es la afinidad del enzima por el S.
Una Km pequea, refleja una gran afinidad por el sustrato, ya que bajas
concentraciones de sustrato son suficientes para saturar al 50% de la
enzima es decir, para alcanzar Vmax.
Una Km grande, refleja una baja afinidad de la enzima por su sustrato, ya
que son necesarias grandes concentraciones de sustrato para saturar el 50%
de la enzima.
 Km de algunas enzimas
ENZIMA SUSTRATO Km (mM)
Catalasa H2O2 25.0
Hexoquinasa ATP 0.4
D-Glucosa 0.05
D-Fructosa 1.5
Anhidrasa carbnica HCO3- 9.0
Quimotripsina Gliciltirosinilglicina 108.0
N-Benzoiltirosinamida 2.5
-Galactosidasa D-Lactosa 4.0
Treonina deshidrogenasa L-Treonina 5.0
 Vmax
Vmax. es la velocidad mxima terica de la reaccin.

Se alcanzara si todos los centros activos estn

ocupados.

Para alcanzar la velocidad mxima se requiere que [S]

>> [E] y que TODAS las molculas de enzima estn
unidas al sustrato.

Vmax se alcanza asintticamente a medida que la

concentracin de sustrato aumenta
 LA Vmax SE ALCANZA CUANDO TODOS LOS CENTROS
ACTIVOS ESTN OCUPADOS CON SUSTRATO
Velocidad inicial

1/2 Vmax

Km
Concentracin de sustrato [S]
 CALCULO DE Km Y Vmax POR LA
REPRESENTACIN DE LINEWEAVER--BURK
 CALCULO DE PARMETROS DE LA ECUACIN

Linearizacin de
Lineweaver-Burk .
Artificio matemtico que
permite deducir grficamente
los valores de km y Vmax.
El artificio consiste en
convertir a la ecuacin M-M
en la ecuacin de una recta,
de forma Y = A + BX, donde:
Y = 1/v,
A = 1/Vm,
B = km/Vm, y
X = 1/[S]
 Ploteo de Eadie-Hostee
El ploteo se realiza vi/ vi/[S], con ese fin se
multiplica ambos miembros de la inversa de
la ecuacin M-M por vi.Vmax obtenindose:
Vmax (vi) = Km.Vmax(vi) + Vmax(vi)[S]
vi Vmax[S] Vmax [S]

Vmax = Km.vi + vi
[S]

Ordenando:

vi = Vmax - Km.vi
[S]

Esta es una ecuacin de lnea recta de la

forma Y = a bX.

Pendiente= Km,
Ordenada en el origen= Vmax.
 Ploteo de Hanes- Wolf

[S] = Km. + [S] . 1 .

Vi Vmax Vmax
 Ploteo Eisentahl-Cornish

Vmax = vi + vi.Km
[S]
 LIMITACIONES DE CINTICA MICHAELIANA
Para utilizar la ecuacin de Michaelis-Menten deben asumirse:
1. La concentracin de sustrato [S] es mucho mayor que
la concentracin de enzima [E], de manera que la
proporcin de ES, es relativamente pequea.
2. [ES] no cambia en el tiempo (la velocidad de formacin de
ES, es igual a la velocidad de su transformacin en E + S y en
E + P). La reaccin esta en equilibrio.
3. Deben usarse velocidades iniciales (vo). Es decir que la
velocidad de la reaccin debe determinarse tan pronto como
el sustrato y la enzima se mezclan. En dicho tiempo, la
concentracin de productos es despreciable, y por lo
tanto, la reaccin inversa de productos a sustratos puede ser
ignorada

Existen enzimas que no siguen la cintica Michaeliana como

las enzimas alostericas
ENZIMAS CON CINETICA NO MICHAELIANA
ENZIMAS CON CINETICA NO MICHAELIANA
 ACTIVIDAD ENZIMTICA
Expresa la cantidad de sustrato convertido por unidad de
tiempo, teniendo en cuenta el volumen y las condiciones
ambientales.
En el Sistema Internacional de Unidades la unidad para la
actividad cataltica es el katal (kat), pero es una unidad
demasiado grande y suele usarse la unidad de actividad
enzimtica (UI).

1 kat = 1 mol sustrato convertido x s -1 = 6x107 UI

1 UI = 1 mol sustrato convertido x min-1 = 16,67 nkat

Actividad especfica. Es la actividad de una enzima

por miligramo (mg) de protena, y da una idea de la pureza de
la enzima.
se suele expresar en: mol x min -1 x mg-1.
 REGULACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
La actividad enzimtica puede ser variada por la accin de
sustancias inhibidoras o activadoras.

INHIBIDOR: molcula o ion que al unirse a la enzima

produce una disminucin en la velocidad de la reaccin
catalizada.

ACTIVADOR: Molcula o ion que al unirse a la enzima

produce un aumento de la velocidad de la reaccin
catalizada

Los inhibidores y los activadores, se usan en la formulacin

de: medicamentos, antibiticos, insecticidas, herbicidas. etc
IRREVERSIBLES.
Inhibicin permanente
Unin irreversible por medio de
enlaces covalentes.
Modificaciones qumicas de los grupos
catalticos.
Modificada la enzima, est siempre
inhibida.
Ejm: efecto del mercurio, plomo, gases
neurotxicos y compuestos arsenicales.
In cianuro, CN-: Se fija con gran
afinidad a la sexta posicin de
coordinacin del Fe hemnico del
complejo citocromo oxidasa.
Penicilinas: Inhiben enzimas sernicas
que participan en la formacin de la
pared bacteriana
INHIBIDORES
REVERSIBLES.
La unin del inhibidor y la
enzima es reversible.
Al quitar el inhibidor del
medio, se recupera la actividad.
Se unen a la enzima por el
mismo tipo de interacciones
que se producen entre las
enzimas y los sustratos.
hay inhibidores:
COMPETITIVOS,
NO COMPETITIVOS, y
ACOMPETITIVOS.
 a.-Inhibidores reversibles
Hay 3 tipos: Competitivos, No Competitivos, Acompetitivos (Alostricos)
Inhibidores competitivos
Tienen gran parecido estructural con el sustrato natural.
Compiten con el sustrato por ocupar el sitio activo de la enzima.
Una caracterstica de este inhibidor es revertida aumentando la concentracin
de sustrato. Si ste predomina en la mezcla, tiende a desplazar al inhibidor de su
unin con la enzima.
Ejemplo: aplicacin farmacolgica de las sulfamidas o sulfas .
 EJEMPLO : EFECTO REVERSIBLE METANOL/ETANOL
El alcohol metlico, se produce durante la fermentacion alcohlica
del zumo de frutas con alto contenido de pectina, generando una
mezcla de etanol y metanol.
El metanol tiene efectos txicos por ingesta, por formacin
metablica de formaldehdo y cido frmico, que son txicos y
ocasionan cefaleas, y hasta convulsiones, coma y muerte.
La enzima alcohol deshidrogenasa, metaboliza al metanol y al
etanol, pero es 22 veces ms afn por el etanol que por el metanol,
razn por la cual se utiliza el etanol como antdoto de esta
intoxicacin, y se evita la formacin de los metabolitos txicos del
metanol. (fuente: Llins Chica, Vladimir)
INHIBIDOR COMPETITIVO
 CINETICA COMPETITIVA
En la Inhibicin competitiva el sustrato (S) y el I compiten por la enzima
libre, pudiendo unirse uno o el otro, pero no ambos simultneamente.
La unin de E a I conduce a la formacin de un complejo no productivo.
La ecuacin cintica disminuye Km.
 Unin del Inhibidor al
centro activo,
compi6tindo con S:
Aumenta Km.
No cambia Vmax.

Sustrato Inhibidor competitivo

 INHIBICIN NO COMPETITIVA
El inhibidor se combina con la enzima o con el complejo ES,
interfiriendo con la accin de ambos.
Se unen a la enzima en un lugar diferente del sitio activo y
provocan la distorsin del centro activo, alterando la formacin de
ES a su velocidad normal y que una vez formado de lugar a la
formacin de P.
 INHIBICIN NO COMPETITIVA
Este tipo de inhibicin no puede ser revertida por aumento de la
concentracin de sustrato.
Pertenecen a esta categora ciertos iones metlicos: Cu2+, I+,
Hg2+, Ag+
Ejemplo: El Yodoacetato es un agente alquilante que acta como
un potente inhibidor de la enzima deshidrogenasa gliceraldehdo-
3-fosfato. Se une a SH de cistena del enzima y modifica el centro
activo, dando un derivado (carboximetilado) con un grupo SH.
Es txico para los mamferos, por que inhibe el metabolismo de la
glucosa que genera energa.
 CINTICA NO COMPETITIVA
Dado que una fraccin de molculas de la enzima es inactiva, no se
alcanza Vmax (Vmax disminuye), pero Km permanece constante.
V = Vmax. S . .1. Km se mantiene
Kmax+S (1+I/Ki)

Los inhibidores no competitivos son a menudo intermediarios

metablicos y regulan la progresin de las vas metablicas.
 Unin del Inhibidor a un
sitio del enzima distinto del
centro activo: no compite
con S:

No cambia Km.
Disminuye Vmax.

Sustrato
Sustrato

Inhibidor
no
competitivo
Su denominacin no es muy
adecuada.
El inhibidor se une solo al complejo
ES para dar siempre un complejo
inactivo EIS, estabilizndolo e
impidiendo la formacin de P.
Esta forma de inhibicin es poco
frecuente en las reacciones
monosustrato, pero es frecuente en
las reacciones con dos sustratos.
En este caso: Km y Vmax disminuyen.
 b.- Inhibidores irreversibles: Venenos
Los gases nerviosos. (sarn, tabn, somn)
Organofosforados. El fluorofosfato de di-isopropilo DIPF
Carbamatos.
Inhiben la enzima acetilcolinesterasa (responsable de los
impulsos nerviosos). Esta enzima contiene un sitio activo con
residuos de serina.
Ejemplos de gases nerviosos: todos tienen un grupo ester
fosfato, que inactiva los restos de serina de la enzima
acetilcolinesterasa
Plaguicidas organofosforados
Organofosforados: malathion
Carbamatos: como el carbaril
(Sevn).

Los organofosforados son steres

de fosfato con O sustituidos con S u
otros radicales.
Con enlace P-C fosfonato,
Con enlace P-N fosforamido,
Con enlace P-S fosfotiolato

Inhiben la acetilcolinesterasa
REACCIONES ENZIMATICAS CON MS DE UN SUBSTRATO
Algunas enzimas catalizan reacciones con dos o mas
sustratos que se influyen mutuamente, y tienen una cintica
mas compleja.
Entre ellas estn las transferasas que transfieren un grupo
especifico desde un sustrato a otro.

Mecanismos para explicar este tipo de reacciones, dos

tipos:

a) Por formacin de complejo ternario;

b) Reacciones ping-pong
a.- REACCIONES MEDIANTE FORMACIN DE UN
COMPLEJO TERNARIO.
El complejo ternario puede formarse independientemente del
orden de unin de los substratos (aleatorio), o bien
nicamente en un orden determinado (mecanismo ordenado).
Mecanismo aleatorio. Los substratos A y B forman un
complejo con la enzima. Cualquiera de ambos puede
combinarse con para formar el complejo ternario EAB,
que conduce a los productos X e Y y a regenerar la
enzima.
Mecanismo ordenado. Un substrato (A) se une inicialmente con la
enzima formando el complejo EA. El segundo substrato slo se une al
complejo EA para conducir al complejo ternario EAB:

b.- Reacciones sin formacin de un complejo ternario.

Ping-pong. Se forma un complejo de la enzima con un substrato
(EA), que libera el producto X, quedando como EA' , el segundo
substrato se une al complejo.
 ENZIMAS REGULADORES
Todos los enzimas tienen forma de ser regulados por
factores externos: pH, [S], presencia de iones, etc.

Algunos enzimas adems poseen capacidad de regular el

metabolismo celular. Enzimas reguladores y pueden ser:

Enzimas alostericos. Su actividad cataltica es regulada por

la unin no covalente de un metabolito especfico, en un sitio
de la protena diferente al centro activo

Enzimas moduladas covalentemente. Se unen

covalentemente y se interconvierten en forma activa e inactiva,
por accin de otras enzimas
 ENZIMAS
ALOSTERICAS
Presentan una cintica
sigmoidal, indicativa de
efectos cooperativos en la
unin del sustrato. (No
Michaeliana)

Su actividad est regulada

por la concentracion de sus
sustratos, por debajo de una
concentracin crtica de
sustrato ([S]c) la enzima es
prcticamente inactiva
Formas de control: control a
nivel de sustrato y feed back.
ENZIMAS ALOSTRICOS
 1.- Control a nivel de sustrato
Mediante interaccin de los sustratos y productos de cada
reaccin con la enzima

hexoquinasa
Glucosa + ATP ----------> Glucosa-6-fosfato + ADP

El propio producto de la reaccin puede inhibir

competitivamente a la enzima

Un ejemplo es el control de la glicolisis en la enzima

fosfofructokinasa por accin de una baja concentracin
del ATP
 2.- Control por retroalimentacin (Freed Back)

Un aumento de concentracin del producto final de una ruta

metablica inhibe una de las primeras reacciones de la ruta
(generalmente la primera)
A ---> B ---> C ---> D ---> E

_
E acta como inhibidor del primer enzima.
Ello impide:
La utilizacin innecesaria del primer sustrato
La acumulacin del producto final
Se evita la acumulacin de intermedios
En la inhibicin por retroalimentacin, el producto final de una
va metablica acta sobre la enzima clave que regula el ingreso a esa
va para evitar sobreproduccin del producto final.
La clula hace la cantidad justa del producto. Cuando hay poco del
producto, la enzima no se inhibir y la va correr a todo vapor para
regenerar sus provisiones. Cuando hay demasiado producto
acumulado, la enzima se bloquear para impedir la produccin de
producto nuevo hasta que se ha utilizado el existente.
 Ejemplos de cintica.
1. En una reaccin enzimtica que transcurre con una
concentracin de enzimas de 0,015g/l, se obtienen lo siguiente:
[S] (g/l) 20 15 10 7.0 5.0 4.0 3.0 2.5
v(g/l-min) 1.14 1.01 0.87 0.72 0.59 0.5 0.44 0.35
Deduzca el modelo que representa la cintica del proceso.

Representando
grficamente se
tiene:
 Deduccin de los, coeficientes de la ecuacin
S v (g/l-min) 1/S 1/v

20 1.14 0.05 0.877

15 1.01 0.066 0.990

10 0.87 0.10 1.149

6.5 0.70 0.15 1.428

5.0 0.59 0.20 1.695

4.0 0.50 0.25 2.000

3.3 0.44 0.30 2.273

2.5 0.35 0.40 2.857

Grfica Linewaber-Burk Interseccin= 1/vmax=0.614

vmax = 1.628 g/l-min.

Pendiente: Km/vmax. =
5.387

Km = 8.776 g/l

El modelo ser.

V = Vmax.S/(Km+S)

V = 1.628S/(8.776+S)

Comprobar por Eadi-Hostie

 Lienalizacion de Eadie-Hostfee
V = Vmax Km.V/S
 Ejercicio 2
Se investig el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una
reaccin catalizada enzimticamente sobre un solo sustrato,
obtenindose los siguientes resultados

A) De que manera acta el inhibidor? B) Obtngase los valores

para Vmx, y Km.
 SOLUCIN A) La manera ms sencilla de deducir cmo
acta un inhibidor es graficar 1/n0 en funcin de 1/[S]0 para
cada concentracin del inhibidor.

Grfica de Lineweaver-Burk del efecto de un inhibidor

A partir de la grfica se puede observar que la pendiente de
las curvas se modifica con los cambios en la concentracin
del inhibidor pero no la interseccin en el eje 1/n 0 (1/Vmax).
Por ello los datos anteriores indican que el inhibidor I est
actuando como un inhibidor competitivo.

B) De la interseccin en el eje 1/v 0 se puede estimar

Vmax= 1(mmol L -1 min-1)

De la interseccin con el eje 1/[S] 0 los valores:

Km=0,1 (mmol L -1) sin ihnhibidor,

Km=0,2(mmol L -1) con 0.5(mmol L -1) de inhibidor
Km=0,3 (mmol L -1) con 1(mmol L-1) de inhibidor.