Cabras Transgnicas

Animais recebem genes humanos e produzem protenas no leite para tratamento de doenas

Emily Freire e Jlio Csar Arajo

 Doena de Gaucher (Goch)
Deficincia no cromossomo 1 do material gentico humano;
Cromossomo que possui o gene responsvel pela produo da
enzima/protena glicocerebrosidase;
Caracterstica recessiva (deficincia presente tanto no cromossomo advindo
do pai quanto no da me).

Figura 1. Caritipo de um homem normal

 Doena de Gaucher e enzima
glicocerebrosidase
As mutaes j descritas podem impedir parcial ou totalmente a atividade cataltica da
protena, ou interferir na sua estabilidade (BEUTLER, 1992; BRADY; BARTON, 1996)

Figura 2. Reao catalisada pela enzima glicocerebrosidae.

Fonte: adaptado de http://www.genome.jp/dbget-
bin/www_bget?rn:R01498
Doena de Gaucher e enzima
glicocerebrosidase

Figura 3. Representao da estrutura tridimensional da

glicocerebrosidase (GC)
Fonte:http://www.lume.ufrgs.br/bitstream/handle/10183/24688/00074
7827.pdf;sequence=1
 Doena de Gaucher e enzima
glicocerebrosidase
Todas as clulas do sistema imunolgico fagocitrio, especialmente os
macrfagos teciduais podem ser afetados na doena de Gaucher;
Macrfagos teciduais do fgado;
Ossos (osteoclastos);
Sistema nervoso central;
Bao;
Medula ssea e etc.

VOCABULRIO
Macrfagos: clulas de grandes
dimenses que fagocitam
(digerem) elementos Figura 4. Bao e fgado aumentados
estranhos no corpo. (Doena de Gaucher)
 Tratamento para a doena
A Gluca parte de um experimento iniciado na Unifor para que cabras
transgnicas tenham no leite a glicocerebrosidase, que, depois de extrada e
purificada, poder ser transformada em um biofrmaco para combater essa
doena.
O gene requerido expresso no leite de mamferos;
Promotores de genes de protenas do leite:
-casena caprina (Ko et al., 2000)

Figura 5. Cabra Gluca VOCABULRIO

Promotores de genes: Sequncias
que direcionam a expresso gnica
apenas na glndula mamria durante
a lactao.
 VOCABULRIO
Tratamento para a doena Traduo: leitura da mensagem contida na
molcula de RNAm pelos ribosomos,
decodificando a linguagem de cido nucleico
Por que Cabras (biorreatores naturais)? para a linguagem de protena.

O uso de animais como biorreatores pode ser a melhor escolha para a

produo de protenas teraputicas;
Habilidade da glndula mamria em realizar eficientemente as modificaes
ps-traducionais.

Tabela 1. Vantagens e desvantagens da seleo de biorreatores (FREITAS, 2017)

Micro injeo de DNA em embries
pr-nucleares
Micro injeo de DNA em embries
pr-nucleares
 Purificao da protena

As colunas podem ser preenchidas com gel, permutadores de ons, fase

reversa, adsorventes de interao hidrofbica e adsorventes de afinidade
cromatogrfica.
De acordo com Wagner e sua pesquisa de dissertao, o processo de
purificao seguiu as seguintes etapas:
 Purificao da protena

Espectrometria
de massa
Eletroforese

Cromatografia
Troca inica
Dilise
Interao hidrofbica

Ensaio
Fluorimtrico
 Formas alternativas

Transferncia Nuclear de Clulas Somticas (TNCS)

Transferncia do ncleo com DNA modificado de uma clula somtica
externa para o ocito. Este desenvolvido in vitro para que assim seja
transferido para a cabra receptora que dar origem s crias transgnicas. Apesar
da dificuldade de desenvolvimento do embrio, todas as crias so transgnicas.

Vetores Lentivirais (VL)

Uso de vrus como o HIV1, o vrus da imunodeficincia smia e vetores da
anemia infecciosa equina para alterar o genoma de acordo com o interesse.
Tcnica que vem sendo desenvolvida em bovinos.
 Formas alternativas

Peptdeos de Penetrao Celular

Os PPCs so molculas capazes de internalizar outras molculas
biologicamente ativas em clulas eucariticas. So sequncias de peptdeos ricos
em arginina e lisina que penetram e se instalam no citoplasma ou ainda no
ncleo celular. A croatamina um exemplo de PPC.

Outros mtodos: transferncia gnica mediada por espermatozoides,

transposons, sistema CRISPR/Cas9, dentre outros.
 Entraves

Produzir a demanda necessria de protena para os pacientes brasileiros;

Isolar a protena da forma mais eficiente possvel;
Enfrentar a legislao e realizar os exames pr-clnicos;
Manipular em laboratrio de forma que o biofrmaco possa ser injetvel;
Vencer a burocracia e chegar s prateleiras.
OBRIGADO(A)PELA
ATENO!
Referncias

BARTON, N. W. et al. Therapeutic Response to Intravenous Infusions of

Glucocerebrosidase in a Patient with Gaucher Disease. Proceedings of the National
Academy of Sciences of the United States of America, Washington, v. 87, n. 5, p.
1913-1916, 1990.
BEUTLER, E. Gaucher disease: new molecular approaches to diagnosis and treatment.
Science, New York, v. 256, n. 5058, p. 794-799, 1992.
FREITAS, V. J. F., MELO, L. M., TEIXEIRA, D. I. A., et al. A espcie caprina como modelo
para produo de protenas recombinantes. Belo Horizonte, 6 f.
Ko JH, Lee CS, Kim KH, Pang MG, Koo JS, Fang N, Koo DB, Oh KB, Youn WS, Zheng
GD, Park JS, Kim SJ, Han YM, Choi IY, Lim J, Shin ST, Jin SW, Lee KK, Yoo OJ.
Production of biologically active human granulocyte colony-stimulating factor in the
milk of transgenic goat. Transgenic Res, v.9, p.215-222, 2000
WAGNER, E. S. M. Purificao da enzima glucocerebrosidase humana produzida no leite
do primeiro clone caprino transgnico da amrica latina. 2016. 49 f. Dissertao
(Mestrado em Biotecnologia Farmacutica) PUCRS.