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Introduo a

histologia
Tcnica histolgica

A tcnica histolgica o conjunto de procedimentos


aplicados para se obter uma preparao microscpica que
permita seu exame com um microscpio de luz.

Principal objetivo:
Preservar ao mximo o espcime, mantendo a mesma
composio qumica e estrutural de quando estava vivo.
Tcnica histolgica
Obteno de lminas histolgicas (14 etapas)
Tcnica histolgica
Obteno de lminas histolgicas (14 etapas)

Coleta da amostra:
. Manuseio delicado para evitar sua deformao.

.A amostra pode ser obtida de um indivduo vivo (bipsia) ou


morto (autpsia).
Fixao: Normalmente realizada com formol 10% num perodo
de 12 24 hs.

Objetivo:
- Evitar a autlise;
- Impedir algum tipo de contaminao;
- Endurecer a pea;
- Preservar a estrutura molecular (pontes entre as aminas
NH2) de protenas.

Alm dos fixadores qumicos possvel utilizar o congelamento,


sobretudo para o estudo de uma bipsia durante o ato
operatrio.
Qual a principal diferena entre a fixao
qumica e fsica?

Fixao qumica: leva a retirada de lipdeos da amostra, pois


utilizar em etapas posteriores solventes lipdicos (etanol e xilol).

Fixao por congelamento: utilizado no estudo de lipdeos


celulares.
Objetivo da desidratao (6 24 hs): Substituir a gua do fixador
por um solvente no polar como primeira etapa para a incluso
em parafina.

gua
lcool

O lcool mais utilizado o etanol em concentraes crescentes de


70% - 80% - 95% - 100%, durante uma hora ou mais em cada um
deles, conforme o tamanho da amostra.
Diafanizao ou clareamento (1 6 hs): Elimina- se o lcool do
tecido e este impregnado com o mesmo solvente da parafina
ou resina (prxima etapa) que tambm lhe confere
transparncia.
Incluso em parafina ou resina: Mergulha-se as peas em
parafina ou resina, geralmente a 60 oC, durante 5 a 20 horas
conforme a natureza e as dimenses da amostra

Devido a alta temperatura o agente clareador (xilol) evapora e a


parafina ou a resina penetram nos tecidos.

Logo a amostra depositada em pequenos recipientes e deixada


solidificar.
Preparao do bloco: o bloco de parafina ou resina com a amostra
includa colado em um suporte de plstico (bloco) para que
possa ser fixado ao micrtomo.
Corte: A fim de se obter cortes muito finos utiliza-se um
instrumento de preciso chamado micrtomo

- Parafina: 8-10 m ;
- Resina : 1-2 m

Os tecidos fixados por congelamento so seccionados atravs


de um micrtomo de congelamento ou com um criostato,
instrumentos adequados para manter a amostra em
temperatura inferior a 20 C.
Montagem de corte sobre uma lmina de vidro: os cortes so
depositados na superfcie de um recipiente com gua e logo so
montados sobre uma lmina de vidro para que sequem.
Como os cortes parafinizados so incolores, as amostras ainda no
esto apropriadas para o exame no microscpio ptico. Dessa
forma necessitam ser coradas
Tcnica histolgica
2 etapa
Desparafinao: esse passo intermedirio necessrio para
permitir a penetrao do lcool do passo seguinte e feita com o
xilol.

Hidratao: para permitir a penetrao dos corantes, que em sua


maioria esto em soluo aquosa, a amostra deve ser hidratada
em solues de etanol diludas progressivamente (100% - 95% -
80% - 70%), at a lavagem final em gua destilada
O mtodo de colorao convencional mais utilizado em histologia
e histopatologia conhecido como hematoxilina-eosina
Colorao
A maiora dos corantes se comportam com cidos ou Bases:

- Corantes bsicos:
. Hematoxilina;
. Azul de toluidina;
. Azul de metileno.

- Corantes cidos:
. Eosina;
. Orange G;
. Fucsina cida.

- Componentes que reagem com corantes bsicos: basfilos


- Componentes que reagem com corantes cidos: acidfilos
Colorao
Hematoxilina: um corante nuclear que se comporta como um
corante bsico ao corar os componentes cidos dos tecidos. Por
exemplo, os ncleos celulares em cor azul-violcea.

Eosina: um corante citoplasmtico, cido, que cora os


componentes bsicos dos tecidos. Por exemplo, o citoplasma
celular em diferentes tonalidades de vermelho.
Colorao feita por H-E em rins de ratos controle (A) e desnutridos (B)
Tcnica histolgica
3 etapa
Montagem da lamnula: a fim de obter uma preparao
permanente, o corte coberto com um vidro fino, colado com um
meio de montagem natural (Blsamo do Canad) ou sinttico