UREA

MTODO CINTICO
"UREASA-GLDH
INTRODUCCION
UREA Y AMONIACO
La concentracin de amoniaco en sangre mas frecuente en
infantes que en adultos, debido a que el desarrollo de la
circulacin heptica se termina despus del nacimiento.
El dficits de la ORNITINA TRASCARBAMILASA (encima)
Produce
la HIPERAMONEMIA concentraciones de amoniaco en sangre.
En adultos muestran elevadas concentraciones de amonaco en
las etapas terminales de: la cirrosis heptica, la falla heptica y la
necrosis del hgado aguda y sub aguda.
La encefalopata heptica por una elevacin en el amonaco
sanguneo.
se puede utilizar la medicin de la glutamina en el LCR, para
diferenciar la encefalopata heptica, pero no es comun
La excrecin de amonaco urinario se eleva con la
acidosis y se disminuye en la alcalosis,
Puesto que la formacin de sales de amonio es un
mecanismo importante para excretar el exceso de
iones hidrgeno.
Ocasionando Daos en los tbulos renales distales,
tal como ocurre en la falla renal, la glomerulonefritis,
el hipercorticoidismo y la enfermedad de Addison,
conllevan a una excrecin de amonaco
la urea se sintetiza en el hgado,
la deshidratacin puede llevar a concentraciones de
nitrgeno ureico tan altas como 600 mg/L.
En los infantes que reciben una frmula alta en
protenas pueden tener niveles de nitrgeno ureico de
250 a 300 mg/L. tales como la glomerulonefritis aguda,
la nefritis crnica, el rin poliqustico y la necrosis
renal elevan el nitrgeno ureico
OBJETIVOS

Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la

determinacin de urea en una muestra biolgica.

Establecer los valores de referencia de la urea y

comparar con el valor de nuestra muestra problema
a analizar.

Definir cuales son las principales patologas que se

presentan si tenemos valores altos o bajos de urea
en una muestra biolgica.
 FUNDAMENTO
La ureasa cataliza la hidrlisis de la urea dando amonio y CO2.
El amonio formado se valora mediante una reaccin enzimtica (GLDH),
pasando NADH a NAD+ . La disminucin de la absorbancia frente al
tiempo es proporcional a la concentracin de urea.

Ureasa
Urea + H2O +2H+ 2 NH3 + CO2

GLDH
2NH3 + -cetoglutarato + 2NADH H2O + NAD+ + 2L-glutamato
 MUESTRA CLNICA
Suero o plasma heparinizado.
MATERIAL Y REACTIVOS
Material necesario
1 Micropipeta de 1 Ml
1 Micropipeta de 200 L.
1 Piseta con agua desionizada o destilada
2 Celdas de plstico de 3 ml
5 Tubos de vidrio de 13X100
Puntas para micropipeta.
Gradilla.
EQUIPO
Fotmetro termostable a 37C con filtro de 340 nm.
Centrfuga
CONTENIDO DEL EQUIPO
Reactivo 1 Tampn TRIS pH 7.8, 80 mmol/L
Reactivo 2 Ureasa 3750 U/L
Vial enzimas GLDH 6000 U/L
NADH 0.32 mmol/L
-cetoglutarato 6 mmol/L
Estndar Sol. Urea 50 mg/dl
 PREPARACIN Y ESTABILIDAD
Disolver el contenido del vial enzimas R.2 en el frasco de solucin tampn R.1 El
reactivo al uso es estable un mnimo de 4 semanas de 8C a 25C.

PROCEDIMIENTO
TCNICA
Termperatura: 25/30/37C Longitud de onda: 340 nm. /334 nm Paso de luz: 1 cm
Lectura: frente a agua destilada

Blanco Estndar Muestra

Estndar 10 L
Muestra 10 L
Reactivo 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL

Pipetear en un tubo:
Muestra o estndar . . . . . . . . . . . . . . . 0.01 mL
Reactivo al uso. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.00 mL
Mezclar y anotar la disminucin de extincin entre los 30 y los 90 segundos
RESULTADOS
aplicar la siguiente ecuacin: .
Extincin muestra/ Extincin estndar x conc. estndar = conc. Muestra
Factor de conversin : mg/dL x 0.1665 = mmol/L
Linealidad
El mtodo es lineal hasta valores de 500 mg/dL (83.25 mmol/L)
Para concentraciones superiores se deber diluir la muestra a 1:2 con
solucin salina, multiplicando el resultado por 2.
Seguridad Biolgica
Suero: de 15 a 45 mg/dL
Orina: de 20 a 35 g/24 horas
NOTAS: Muestra: Suero, plasma o orina.. La orina diluirla a 1:50 con
agua destilada.

No emplear suero o plasma turbios o hemolizados.

CONTROL DE CALIDAD SPINTROL. Normal y patolgic