Gentica Microbiana

Transformacin
 TRANSFORMACION GENTICA
La transformacin gentica es un proceso por el que el
ADN libre se incorpora en una clula receptora y lleva a
cabo un cambio gentico.
El descubrimiento de la transformacin gentica en
bacterias fue uno de los acontecimientos ms
destacables en biologa, ya que condujo a experimentos
que demostraron que el ADN es el material gentico.
 EXPERIMENTO DE GRIFFTH

En Inglaterra Frederick Griffith realizo el estudio de dos cepas de Strptococcus pneumoniae:

Cepa virulenta S; Cepa virulenta R.
Los ratones inyectados con la cepa S moran mientras que los inyectados con la cepa R vivan.
A travs de una serie de experimentos se sorprendi al encontrar que los ratones murieron
cuando fueron inyectados con una mezcla de la cepa S con la cepa R.
Planteo la hiptesis de que un componente qumico de las clulas S virulentas de alguna
manera haban transformado las clulas R en la forma virulenta S.
 TRANSFORMACIN: ETAPAS

2.- Incorporacin del 3.- Integracin del

1.- Unin del DNA:
DNA: DNA:
protena asociada
Primero se fija protena de
a
reversiblemente, unin, en el
la membrana:
luego se vuelve cromosoma
autolisina
irreversible. protena RecA
nucleasas.
 CARACTERSTICAS DE UNA
TRANSFORMACIN BACTERIANA

1.- La pared de la clula receptora debe estar

intacta

2.- El fragmento del ADN donador debe tener un

tamao determinado y ser de doble cadena

3.- La clula receptora debe ser competente

 COMPETENCIA BACTERIANA

Una clula que es capaz de tomar una

molcula de ADN y ser transformada

Algunas bacterias , son capaces de

incorporar de manera natural, ADN
bajo condiciones de laboratorio;

la competencia est regulada y hay

protenas especiales que juegan un
papel en el transporte y procesamiento
del ADN.
 FACTORES QUE INFLUYEN EN
EL ESTADO DE COMPETENCIA

Nmero de clulas o
densidad celular del fase de
cultivo crecimiento

condiciones
Existencia de ambientales ( pH , T
nutrientes ,etc. )
 UNIN DEL ADN BACTERIANO

La especificidad del DNA que la

clula puede unir vara con la
especie bacteriana.

Las bacterias Gram positivas como

el Streptococcus pneumoniae y el
Bacillus subtilis pueden unir cualquier
tipo de DNA doble cadena que este
presente en el medio
Streptococcus pneumoniae
 las bacterias Gram negativas como el Haemophilus
y Neisseria spp. slo pueden unir DNA homlogo

La unin del DNA

transformante involucra
una primera fijacin
reversible que luego se
transforma en irreversible
La incorporacin del DNA por las bacterias Gram+ y
Gram- es diferente

En las bacterias Gram positivas el ADN doble

cadena unido es nickeado

Este receptor del ADN empuja la cadena

complementaria hacia el interior de la clula y la
cadena nickeada es degradada a oligonucletidos

De esta manera, slo ingresa a la clula una de las

cadenas del DNA originalmente unido
 Las bacterias gram negativas , parece que el ADN
bicatenario es degradado a cadena sencilla en el
espacio periplasmico y solo penetra en el citoplasma
una cadena sencilla
 El ADN transformante se une a una
superficie celular por una protena de
unin del ADN, tras lo cual el fragmento
bicatenario resulta captado por la clula o
bien una nucleasa degrada una cadena y
la otra es incorporada.
Tras la incorporacin, el ADN se asocia
con una protena especfica de la
competencia que permanece unida al
ADN, posiblemente para protegerlo de
ataques por nucleasas, hasta que alcanza
el cromosoma, donde es sustituida por la
protena RecA.
El ADN se integra luego en el genoma del
receptor por procesos de recombinacin.
Durante la replicacin de este ADN
heterodplex, se forma una molecula de
ADN parental y una molecula de ADN
recombinante.

Muchas bacterias naturalmente

transformables se transforman solo
pobremente por ADN plasmdico, porque
el plsmido debe permanecer bicatenario y
circular para poder replicarse.
Las bacterias se pueden transformar con ADN
extrado de virus bacteriano en vez de una bacteria,
un proceso conocido como transfeccin.

La transfeccin consiste en la introduccin de

material gentico externo en clulas eucariotas
mediante plsmidos, vectores vricos u otras
herramientas para la transferencia.
 Se
transforman
fcilmente
 Inducir
competencia

Implica esfuerzo
emprico

Variaciones en el
Temperatura Otros factores
medio de cultivo
 Para transferir ADN a las clulas en
experimentos de ingeniera gentica, fue
necesario para encontrar un mtodo para
hacer competente a la Escherichia Coli , un
organismo gran negativo.
 Se convierte
en
transformab
le con baja
eficiencia.
Luego se
mantiene en
frio.
E. Coli se trata con
altas
concentraciones de
iones de calcio.
 Mtodo con
induccin artificial
No se sabe por qu Este procedimiento
est siendo
el tratamiento de funciona con otras
suplantado por un
calcio funciona de bacterias Gram
nuevo mtodo
esta manera. negativas.
llamado
electroporacin.
Transferencia de Electropora
DNA cin
 Para abrir
tcnica en la campos
pequeos
que las elctricos
poros en sus
clulas se pulsados
membranas
exponen

Cuando existen molculas de DNA fuera de la clula

durante un pulso elctrico, pueden entrar en las
clulas a travs de estos poros.
 La electroporacin
requiere de un Los pulsos deben ser
controlados
suministro de potencia cuidadosamente y
sofisticado duran solo
milisegundos.

Esta tcnica se ha Archaea

utilizado para introducir
Bacteria
DNA en un gran nmero
de especies diferentes clulas eucariotas

LA ELECTROPORACIN PERMITE TANTO LA SALIDA COMO LA

ENTRADA EN LA CLULA DE PEQUEAS MOLCULAS DE DNA.
Gracias