Métodos de determinación de

la glucosa
 Métodos

Cualitativos Cuantitativos

Glucosa oxidasa (E) Quimico: O-Toluidina

Enzimatico

Glucosa oxidasa Hexoquinasa

 Cualitativos
Glucosa oxidasa- Tiras colorimetricas
• Utiliza glucosa oxidasa que cataliza la oxidación de D-
glucosa a ácido glucónico con formación de H2O2.

• En presencia de la enzima peroxidasa, el H2O2

generado oxida un cromógeno (orto-dianicidina),
produciendo un cambio de color, que indica la presencia
de glucosa.

• Este método es especifico para la glucosa y la detecta

cuando su concentración está sobre el rango normal.
 Cuantitativos
O-Toluidina
• La o-toluidina se condensa inicialmente con el
grupo aldehído de la glucosa para formar una
mezcla en equilibrio de la glucosilamina y la
base de Schiff correspondiente.

• Las reacciones que tienen lugar después de la

condensación original producen una mezcla de
cromógenos verdes con una longitud de onda
analítica a 630 nm.
 Cuantitativos
Glucosa-Oxidasa
• El método enzimático se basa en la especificidad de la
enzima glucosa oxidasa (GOD) por la -D-glucosa.

• La enzima cataliza la oxidación de la glucosa por

oxígeno molecular dando D-gluconato y H2O2.

  D  glu cos a  O2  H 2O GOD

 D  gluconato  H   H 2O2
• Para detectar y cuantificar esta oxidación se ocupa una
reacción acoplada

H2 O 2  4 - AF  4 - hidroxibenzoato   
peroxidasa
quinonimina (roja)

• En forma cuantitativa el H2O2 es oxidado por un reactivo

comercial (4-aminofenazona (4-AF) y 4-
hidroxibenzoato), reacción catalizada por la enzima
peroxidasa, para dar como producto un compuesto
coloreado rojo (quinonimina) que se cuantifica midiendo
la absorbancia a 505 nm.
 Cuantitativos
Hexocinasa

• La glucosa es convertida a glucosa-6-fosfato (G-6-P) por la

hexocinasa (HK) en presencia de ATP.

• La G-6-P es convertida en presencia de glucosa-6-fosfato

deshidrogenasa (G-6-PDH) y dinucleótido de nicotinamida adenina
(NAD) a 6-fosfogluconato y NADH, y se determina el aumento en la
densidad óptica a 340 nm.

• La formación de NADH causa un aumento en la absorbancia a 340

nm, la cual es directamente proporcional a la concentración de
glucosa en la muestra.