LA CROMATOGRAFÍA DE GASES Y SUS

APLICACIONES
22 DE OCTUBRE DE 2007

INTRODUCCIÓN A LA CROMATOGRAFÍA DE GASES

Introducción a la cromatografía.
Definición
Principios básicos
Cromatografía de Gases
Campo de aplicación
Partes de un cromatógrafo de gases
 INTRODUCCIÓN A LA CROMATOGRAFÍA
Definición
Principios básicos
Flujo de fase móvil
Definición
to
“Técnica que permite
separar los componentes
A B
de una muestra debido a t1
su diferente afinidad
entre dos fases
A B
inmiscibles entre sí, una t2
estacionaria (liquida o
sólida) y otra móvil (gas
o líquida)”
La muestra se introduce en la fase móvil y es
transportada a lo largo de la columna que
contiene una fase estacionaria distribuida.
Las especies de la muestra experimentan
interacciones repetidas (repartos) entre la fase
móvil y la fase estacionaria.
Cuando ambas fases se han escogido de forma
adecuada, los componentes de la muestra se
separan gradualmente en bandas en la fase
móvil.
Los componentes abandonan la columna en
orden creciente de interacción con la fase
estacionaria.
La amplia gama de selección de materiales
para la fase móvil y la estacionaria permite
 Clasificación de los métodos
cromatográficos
Cromatograf
ía

Cromatografía de Cromatografía de
gases líquidos

Gas – Gas – Líquido – Líquido – Intercambi Exclusión

Líquido Sólido Líquido Sólido o iónico
EC
GLC GSC LLC LSC IEC

Casos particulares:
Intercambio Iónico: Los componentes iónicos de la muestra se
separan por el intercambio selectivo con contraiones de la fase
estacionaria
Exclusión: La fase estacionaria proporciona una clasificación de
 Comportamiento cromatográfico de los
compuestos
• El comportamiento cromatográfico de un componente de una
muestra puede describirse de diversas formas:
– VR Volumen de retención
Volúmen de fase móvil necesario para transportar la banda de
un componente desde el punto de inyección, a través de la
columna, hasta el detector (en el máximo de pico del
componente)
– tR tiempo de retención
Tiempo necesario para que el componente, una vez inyectado
pase a través de la columna y alcance el detector (en el
máximo de pico del componente)
– k´ razón de reparto
Es una medida del tiempo que el componente está en la fase
estacionaria en relación con el tiempo que está en la fase
móvil
 Flujo de fase móvil Señal

to to

A B
t1 t1

A B
t2
t2

A B
tB tB

A
tA tA
tiempo
 Señal

to
k´ razón de reparto
tR – tM VR - VM
k´= =
tM
VM

Donde tM es el tiempo de retención de

n compuesto que no interaccionara con
a fase estacionaria y tR es el tiempo de
tB
etención del compuesto de interés. Lo
mismo se puede expresar en relación con
os volúmenes de retención.
tA
tiempo
 El objetivo de la cromatografía es doble:
•Separar los distintos componentes de la
muestra
•Identificar los componentes previamente
separados
Separar los distintos componentes de la
muestra
Selectividad y eficiencia

Buena selectividad Baja selectividad Buena selectividad

Eficiencia baja Buena eficiencia Buena eficiencia
 Identificar los componentes previamente
separados
• Selección de detectores adecuados que permitan el análisis
cualitativo.
– La selección de un detector está relacionada con la naturaleza de las
sustancias a determinar.
– Los componentes de una muestra se identifican por su tiempo de
retención
– Se pueden emplear técnicas que aporten una mayor información sobre la
naturaleza de los componentes: Acoplamiento con Espectrometría de
Masas

• Análisis Cuantitativos basados generalmente en la integración

del área bajo los picos.
– Calibración con patrones o estándares: Si se realizan determinaciones
cromatográficas de muestras de concentración conocida de alguno de sus
componentes, se puede realizar una recta de calibrado y posteriormente
el análisis e integración de una muestra de concentración desconocida
del citado componente permitirá la cuantifcación del mismo.
– Estándar interno: Permite que varíen las condiciones de operación entre
muestra y muestra.
 Cromatografía de Gases
“Es la técnica a elegir para la separación de compuestos
orgánicos e inorgánicos térmicamente estables y volátiles”

• Un cromatógrafo de gases consiste en el acoplamiento de

varios módulos básicos ensamblados para:
– Proporcionar un flujo constante de gas portador
– Permitir la introducción de vapores de la muestra en la
corriente de gas que fluye
– Contener la longitud apropiada de fase estacionaria
– Mantener la columna a la temperatura apropiada (o la
secuencia del programa de temperatura)
– Detectar los componentes de la muestra a medida que
eluyen de la columna
– Proveer una señal legible proporcional en magnitud a la
cantidad de cada coomponente
Cromatografía de Gases
Cromatografía de Gases
Cromatografía de Gases
Sistema de inyección
El modo estándar es la
inyección directa, la
muestra es inyectada con
una jeringa a través de un
septum de goma a un
alineador de vidrio donde
es vaporizada y
transportada por el gas al
interior de la columna.
El bloque de inyección, se
mantiene a una
temperatura tal que
permita convertir
prácticamente de forma
instantánea la muestra
líquida en un tapón de
vapor.
Existen jeringas especiales
Sistema de inyección
El modo de separación más
extendido en la actualidad
se basa en el empleo de
columnas capilares. Estas
columnas requieren muy
pequeños volúmenes de
muestra.
Esto se logra empleando un
inyector que incorpora un
divisor de flujo (split).
Normalmente se introduce
en la columna un 1%
Cuando las sustancias a
separar se encuentran a
muy bajas concentraciones
se realiza inyección sin
divisor (splitless)
Sistema de inyección

Para el análisis de
compuestos orgánicos
volátiles en muestras
sólidas y líquidas, se han
desarrollado algunas
técnicas auxiliares:
Espacio de cabeza (Head
space)
Purga y trampa (Purge and
trap)
Espacio de cabeza (Head space)
Se analiza la fase de vapor
en equilibrio
termodinámico con la
muestra en un sistema
cerrado.
Para ello se procura un
equilibrio estable,
mediante el control de la
temperatura del vial que
contiene la muestra.
Posteriormente, se arrastra
T equilibrio la fase vapor alAinterior del
Gas portador la columna
cromatógrafo.
 Purga y trampa (Purge and trap)
Es aplicable solo a muestras líquidas.
Consiste en la continua renovación
del gas en equilibrio con la muestra,
con lo que se consigue el
desplazamiento dinámico de los
compuestos volátiles de la muestra
líquida a la fase gaseosa.
Los vapores se arrastran a una
trampa donde quedan retenidos y se
van concentrando.
Finalizado el proceso se calienta la
1) Gas portador trampa
2) y se arrastran los vapores al
Gas portador
trampa trampa A la columna
interior del cromatógrafo.
T baja T alta

T T
 Columnas cromatográficas

Columnas capilares Columnas

Empacadas
Columnas cromatográficas empacadas

Se construyen con tubo de acero

inoxidable, niquel o vidrio.
Los diámetros interiores van de
1,6 a 9 mm.
La longitud suele ser inferior a
los 3 m.
Se rellenan de un material
adsorbente adecuado a las
sustancias que se quiere
separar.
 Columnas cromatográficas capilares

Se construyen con sílice fundida.

Los diámetros interiores suelen ser de 200-250
m.
La longitud suele ser superior a los 20 m.
Hay dos tipos:
Empacadas con partículas sólidas ocupando el total
del diámetro de la columna (micro-empacadas)
Tubulares abiertas, con trayectoria para el flujo
abierta y sin restricción por el centro de la columna
Ejemplos de fases estacionarias en cromatografía
de gases
Separaciones por punto de ebullición de
compuestos en un intervalo amplio de pesos
moleculares:
Escualano
Polidimetilsiloxano
Para hidrocarburos insaturados y otros
compuestos
polidifenildimetilsiloxano
policarboranometilcianoetilsilicón
Para compuestos nitrogenados
poliamida
policianoetilmetilsilicon
Para alcoholes, ésteres, cetonas y acetatos
polietilenglicol
pentaeritritol tetracianoetilado
 Horno

• Las columnas cromatográficas se enrollan, se sujetan

en un soporte y se introducen en el interior de un horno

• El horno debe poderse calentar y enfriar rápidamente

• La temperatura se debe poder programar para poder

trabajar en régimen de gradiente

• Muchas aplicaciones y métodos cromatográficos

requieren comenzar a temperaturas por debajo de la
ambiental
 Horno

T1

T2 > T 1
CaracterísticasSistemas
ideales de detección
un detector para
Cromatografía de Gases:
  Sensibilidad alta y estable; típicamente 10-8 g soluto/s
  Bajo nivel de ruido
  Respuesta lineal en un amplio rango dinámico
  Tiempo de respuesta corto
  Buena respuesta para toda clase de compuestos
orgánicos
  Insensibilidad a las variaciones del flujo y la
temperatura
  Estabilidad y robustez
  Simplicidad en su operación
  Identificación de compuestos positiva
  Técnica no destructiva
  Pequeño volumen en prevención del mezclado de
componentes
 Sistemas de detección

Detector de ionización de llama (FID) Este detector añade hidrógeno al

eluyente de la columna.
La mezcla pasa a través del
conducto de un mechero, donde se
mezcla con aire externo y luego
arde.
Cuando entra en la llama material
ionizable del eluyente de la columna
Se quema y la corriente aumenta
notablemente.
Este detector es ideal para compuest
oxidables.
No responde a los compuestos de
carbono totalmente oxidados, como
carbonilos o carboxilos y grupos éste
 Sistemas de detección

Detector de conductividad térmica (TCD) Utiliza un filamento caliente

colocado en el flujo de gas
emergente.

La cantidad de calor por

conducción que pierde el
filamento hacia las paredes del
detector depende de la
conductividad térmica de la
fase gaseosa.

Es útil para determinar la

presencia incluso de pequeñas
cantidades de materiales
orgánicos que producen una
reducción relativamente
grande en la conductividad
 Sistemas de detección
Detector de captura de electrones (ECD)
El eluyente pasa entre dos
electrodos.
Uno de los electrodos tiene en
su superficie un radioisótopo
que emite electrones de alta
energía conforme decae.
Los electrones bombardean el
gas portador (N2) formándose
un plasma que contiene iones
positivos, radicales y
electrones térmicos.
Se aplica una diferencia de
potencial de modo que se
recolectan los electrones
generados.
Los compuestos que absorben
electrones reaccionan con los
electrónes térmicos
 Sistemas de detección
Los eluyentes son ionizados y
Detector de espectroscopía de masas (MS) fragmentados.
Los iones resultantes se
dirigen a través de un
cuadrupolo y se ordenan en
función de su masa.
Ese detector permite obtener
el espectro de masas del
compuesto que ha eluido.
Podemos por tanto conocer,
además del tiempo de
retención el espectro de masas
del compuesto y contrastarlo
con bibliotecas de espectros.
Se trata por tanto de un
detector universal para la
mayoría de los compuestos
conocidos.
Cromatografía Iónica
 Polaridad
Basándose en la polaridad de la fase
estacionaria y la fase móvil, se distinguen los
siguientes métodos de cromatografía líquida:
Polaridad de la
fase estacionaria

Cromatografía en
fase normal
iónico
Cromatografía en
fase reversa
polar Cromatografía de pares iónicos
Cromatografía iónica
no polar

Polaridad de la
fase móvil
no polar polar iónico
 El intercambio iónico como
mecanismo de separación
La gran mayoría de las separaciones por cromatografía
iónica ocurren por intercambio iónico sobre fases
estacionarias con grupos funcionales cargados. Los
correspondientes contraiones del eluyente se localizan en
la vecindad de los grupos funcionales y se intercambian
con iones del analito de la misma carga en la fase móvil.
Para cada ion el proceso de intercambio se caracteriza por
un equilibrio de intercambio iónico correspondiente, que
determina la distribución del analito (M + ó A-) entre la fase
móvil y la fase estacionaria:

E f.e.  A f.m.  E f.m.  A f.e.

KA 
 A   E 

f.e.

f.m.

A   E 

f.m.

f.e.
A- es el ion del analito
E- es el ion del eluyente (contraion)
 El intercambio iónico como
mecanismo de separación
El grupo más importante de intercambiadores iónicos son los
basados en resinas sintéticas hechas de un copolímero de
estireno y divinilbenceno.

Los intercambiadores catiónicos se obtienen por posterior

sulfonación de esta resina de estireno-divinilbenceno. Los
intercambiadores aniónicos por posterior clorometilación seguida
de aminación.

Intercambiador catiónico Intercambiador aniónico

 Cromatografía iónica
También llamada cromatografía de intercambio iónico,
determina iones inorgánicos y orgánicos, normalmente por
conductividad.

Se utilizan dos tipos de técnicas en la práctica:

• Supresión química, en la que la conductividad de fondo se

suprime tanto química como electrónicamente. Normalmente
utilizada en aniones.

• Supresión electrónica, en la que se emplean eluyentes con

sales de ácidos orgánicos en baja concentración sobre
intercambiadores de iones de muy baja capacidad para
alcanzar una conductividad de fondo relativamente baja, que
puede ser suprimida directamente por medios electrónicos.
Supresión química
Se basa en el uso de sales de ácidos débilmente disociables (NaHCO 3, por
ejemplo) como eluyentes. Estos eluyentes se pueden eliminar en gran
medida mediante una reacción post-columna de acuerdo con el siguiente
proceso

El ácido carbónico formado como resultado del intercambio catiónico se

disocia muy débilmente, por lo que aporta poca conductividad.
Por otro lado, los iones de la muestra sufren la reacción correspondiente. Por
ejemplo, para el cloruro

El proceso de supresión convierte el NaCl al correspondiente ácido fuerte, el

cual tiene una mayor conductividad que la sal original. Cuanto menor fuerza
tenga el ácido producido, el incremento en sensibilidad debido a la
supresión química será menor.
 Supresión química

Inyección de Detección
Eluyente - bomba Separación Supresión
muestras
Sin supresión química Con supresión química
Eluyente: ácido ftálico Anione Eluyente: HCO3-/CO3-

s
Cationes sin supresión
química
 Inyección de Detección
Eluyente - bomba Separación Supresión
muestras
 Detección por conductividad
La conductividad es una medida de la capacidad que tienen las
disoluciones de electrolitos para transportar la corriente por
migración iónica en un campo eléctrico aplicado entre dos
electrodos.
La conductividad (κ) es directamente proporcional a la
concentración para disoluciones diluidas, siguiendo la relación

  c(eq)

Donde 1000
Λ es la conductividad equivalente en Scm2mol-1
c(eq) es la concentración equivalente en eq/l o normalidad
 Inyección de Detección
Eluyente - bomba muestras
Separación Derivatización
 Detección
UV/VIS
•Directa: Se usa en la determinación de iones que absorben
fuertemente en el rango UV (nitrito, nitrato y aniones
orgánicos, p.e.) en presencia de altas concentraciones de
iones inorgánicos (cloruro, fosfato y sulfato, p.e.) que tienen
escasa o nula absorción UV.

•Indirecta: Se utiliza con eluyentes de alta absorción UV

(ftalato, p.e.). De este modo, los iones con menor actividad UV
que el eluyente darán picos negativos y los iones con mayor
actividad UV que el eluyente darán picos positivos.

•Con reacción post-columna: Usada en la detección de metales

de transición (Fe, Ni, Cu, Mn y Zn, p.e.)
 Inyección de
Eluyente - bomba Separación Detección
muestras
 Detección electroquímica
Se utiliza ocasionalmente. Requiere que los iones a determinar sean
susceptibles de oxidarse o reducirse. Entre ellos hay muchos
compuestos orgánicos (azúcares y aminas, p.e.), metales de
transición y aniones como nitrito, nitrato, haluros, sulfuro, cianuro,
sulfito y sulfato.

Hay cuatro técnicas diferentes :

•Amperometría: Medida de la corriente a potencial constante
•Culombimetría: Medida de la corriente a potencial constante con
100% de conversión del analito
•Voltametría: Medida de la corriente frente al potencial en un rango
definido de potencial
•Amperometría de pulsos: Medida de la corriente a pulsos de
potencial constante
 Estado, cantidad y preparación de
muestras
• Los líquidos que sean acuosos o miscibles en el agua se
pueden analizar directamente. Los líquidos, sólidos y gases
inmiscibles en agua deben ser extraídos o disueltos en
disolución acuosa antes del análisis.

• El volumen típico a analizar es de 5 a 200 µl, aunque se

puede partir de volúmenes tan grandes como 100 ml,
utilizando técnicas de preconcentración cromatográficas
cuando se requiera una mayor sensibilidad.

• Dilución y filtración son los procedimientos más comunes

de preparación de muestras. Se requiere extracción para
muestras no acuosas o preconcentración para muestras
diluidas. La necesidad de derivatización precolumna es
rara.
Técnicas complementarias
Absorción atómica, emisión atómica y plasma
de acoplamiento inductivo. Se usan para
determinar la cantidad total de un metal en vez
de una cierta forma iónica.