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ELETROFORESE

Profa. Rosangela Vidal


O QUE É ELETROFORESE?

MÉTODO NÃO É IDEAL PARA


ANALÍTICO PURIFICAÇÕES

IDENTIFICAÇÃO DE AFETAM A ESTRUTURA


PROTEÍNAS PROTÉICA
PROTEÍNA E DNA/RNA?
VANTAGENS DA ELETROFORESE

Separa às macromoléculas (proteínas e ácidos


nucléicos), os quais possuem diferentes tamanhos,
carga ou conformação.
QUE INFORMAÇÕES A ELETROFORESE
FORNECE AO PESQUISADOR?

Peso Ponto
molecular da isoelétrico da
proteína proteína

Propriedade Extremamente Importante de Uma proteína.


ELETROFORESE: A TÉCNICA
• Quando moléculas são colocadas em um campo elétrico, migram
para o pólo oposto ao da sua carga. Proteínas (Torna-se uma
molécula com carga líquida negativa -SDS) e DNA sempre negativa .
• Eletroforese ocorre dentro de um gel.
• O GEL DE ELETROFORESE: AGAROSE

• Agarose: é um polissacarídeo extraído de alga


marinha. Usada em concentrações de 0,5 to 2%.

• Fácil de preparar. Não-tóxico.

• Géis de Agarose possuem ampla capacidade de


separação, dependendo da concentração do gel podem
separar fragmentos de DNA de 200 a 50.000 bp, via
eletroforese.
• O GEL DE ELETROFORESE: POLIACRILAMIDA

• Poliacrilamida: polímero de ligação cruzada de acrilamida. O


Comprimento das cadeias do polímero dependem da
concentração usada (3,5 a 20%). São mais difíceis de preparar.
Como oxigênio inibe a polimerização precisam ser montados
entre placas de vidro.

. Para DNA a poliacrilamida é usada para separar fragmentos


de menos de 500 bp. Às vezes podem ser separados fragmentos
com tamanho de apenas uma base de diferença.
O GEL DE ELETROFORESE: ACRILAMIDA

• Acrilamida: potente neurotóxico e deve ser


manipulado com cuidado!!! Luvas e máscaras devem
ser usadas para pesar o pó. A poliacrilamida é
considerada não tóxica mas luvas devem ser usadas
pela possível presença de acrilamida livre.
• O gel é submerso em um tampão que possui íons para a
corrente passar, e também para manter o pH mais ou menos
constante.
ELETROFORESE:
RESUMO DA TÉCNICA
• O gel é então analisado, e permite ao
pesquisador:
• Determinar Peso Molecular e/ou ponto
isoelétrico de proteínas.
• Permite ao Pesquisador estimar
rapidamente o número de proteínas distintas
em uma mistura
• Identificação de polimorfismos em DNA’s
teciduais.
• Estudos variados dos ácidos nucléicos
• avaliar o grau de pureza de uma amostra
protéica após purificação.