Papel de los macrófagos en la

patogénesis de micosis fungoide

Julio 2017

Dra. Astrid Iliana Brazón Caballero

Residente de primer año de postgrado de Dermatología
 Introducción
• Los macrófagos están ampliamente distribuidos en el sistema inmune, con funciones
importantes en la producción de citocinas, quimiocinas y la expresión de receptores

• Los macrófagos clásicamente activados ( células M1) están relacionados con

inflamación, inhibición tumoral y producción de citocinas

• Los macrófagos activados alternativamente (células M2) , están relacionados con el

crecimiento de células tumorales y producen IL-10

• Los macrófagos en el microambiente tumoral se denominan macrófagos asociados a

tumores (TAM) y generalmente exhiben un fenotipo M2

• Los TAM producen una variedad de citocinas que actúan suprimiendo las células
tumorales y de forma contradictoria promueven la progresión tumoral.
• Células M1 y M2 expresan antígeno CD68 , que se utiliza para la detección de TAM y macrófagos

• Numerosos estudios han reportado la presencia de macrófagos CD68 positivo en glioma,

carcinoma hepatocelular y el melanoma maligno

• Los macrófagos CD206 positivo en el carcinoma de células renales y el bajo nivel de secreción de
óxido nítrico sintetasa inducible (iNOS), se ha correlacionado con mal pronóstico en células renales

• La micosis fungoide (MF) es el tipo más común de linfoma de células T , de etiología desconocida y
que generalmente progresa lentamente , con período de supervivencia prolongado

• La progresión se ve sólo en unos pocos casos durante años, seguido de afectación de los ganglios
linfáticos y afectación visceral , predominante en adultos mayores y mas común en hombres.
 Objetivo

Determinar si el tratamiento para micosis fungoide se

asocia con una diferencia en el número de
macrófagos dérmicos M1 Y M2, usando doble
inmunohistoquímica con marcadores de macrófagos
en lesiones de la piel de pacientes con micosis
fungoide
 Métodos
Pacientes y muestra
• 21 pacientes diagnosticados con MF (8 mujeres, 13 hombres)
• Edades: 42-73 años
• 15 de los 21 pacientes fueron tratados con UVB-BE y corticosteroides tópicos
• 6 pacientes fueron tratados con fotoquimioterapia (PUVA) y acitretina

Después de 6 meses
• 16 pacientes tenían aclaramiento completo
• 3 pacientes tenían remisión parcial
• 2 pacientes tenían inicialmente remisión completa, pero mas tarde informaron recurrencia

Criterios de exclusión
• Edad menor de 18 años
• Embarazo, lactancia
• Pacientes con inmunosupresores
Biopsias
• Se realizaron biopsias pre-tratamiento y post-tratamiento de la misma lesión

• No se obtuvieron muestras de piel sana para la comparación (motivos éticos)

• Se obtuvieron biopsias adicionales en los pacientes con recidiva

• Las muestras se procesaron para examen de rutina, teñidas con H-E

• Los bloques considerados, se identificaron para realización de inmunohistoquímica.

Inmunohistoquímica
• Se cortó el tejido en secciones de 4 mm de espesor y se colocaron en portaobjetos para la
detección inmunohistoquímica de CD68,CD163,CD206,y la expresión de iNOS (óxido nítrico
sintetasa inducible)

• Las muestras se desparafinaron a 72°C

• Los anticuerpos de ratones monoclonales se utilizaron como anticuerpos primarios en todos

los casos (anti-CD68, anti iNOS), para la detección de macrófagos M1

• Anti-CD163,anti-CD206 (para la detección de macrófagos M2)

• Como se trataba de un proceso con doble tinción inmunohistoquímica , ambos anticuerpos

se utilizaron juntos.
Análisis estadístico
• Todos los datos se analizaron con con el programa SPSS (statistical package for the
social sciences)

• El análisis estadístico se realizó usando la prueba de rangos con signo de wilcoxon para
la comparación de valores

• Las diferencias en el número de células M1 y M2 entre los grupos de acuerdo con el tipo
de lesión y los resultados del tratamiento fueron analizados mediante la prueba de
U- Mann-Whitney (prueba no paramétrica aplicada a 2 muestras independientes)

• Valores < 0,05 , se consideraron estadísticamente significativos.

Resultados
De los 21 pacientes con micosis fungoide:

• 38% hombres, 61,9% mujeres

• 7 pacientes tenían entre 40-49 años de edad
• 8 Pacientes tenían entre 50-59 años de edad
• 6 Pacientes tenían entre 60-70 años

• 8 Pacientes tenían enfermedad en estadio 1a

• 13 Pacientes tenían enfermedad estadio 1b
• 15 pacientes con lesiones de tipo parche
• 6 pacientes con lesiones tipo placa
Resultados

• El tratamiento produjo remisión parcial en 3 pacientes (14,3%)

• Remisión completa en 19 pacientes
• 2 de los pacientes con remisión completa, presentaron recurrencia
• La repetición de biopsia fue realizada en los 2 pacientes con recurrencia
Resultados de la inmunohistoquímica

• Se realizó tinción inmunohistopatológica de secciones teñidas con iNOS-

CD68,CD163,CD206, para la detección de macrófagos dérmicos M1 Y M2 antes
y después del tratamiento

• El número de células M1 fue significativamente inferior pre-tratamiento en

comparación con el control post-tratamiento

• El número de células M2, también se redujo numéricamente después del

tratamiento, pero no fue significativo.
 La tinción inmunohistoquímica de
células positivas
CD68-iNOS

• ayb antes del tratamiento.

• c y d después del tratamiento en piel

lesional de pacientes con MF.

• a abundantes puntos rojos, que

representan células CD68 +.

• b a mayor aumento, con doble tinción,

se representa macrófagos dérmicos M1.

• c y d con doble tinción, disminución en

número de puntos rojos después del
tratamiento.
 La tinción inmunohistoquímica
de células positivas
CD163- CD206

• ayb antes del tratamiento.

• a abundantes puntos rojos que

representan células CD206+.

• b con doble tinción de células, que

representa macrófagos dérmicos M2.

• c y d después del tratamiento en piel

lesional de pacientes con MF, número de
puntos rojos disminuyen.
Discusión

• Los macrófagos asociados a tumores (TAM) se originan a partir de monocitos en la sangre , son
reclutados y diferenciados en una masa tumoral por varias señales producidas por células
neoplásicas y del estroma

• Esta diferenciación es el resultado de la ausencia de señales M1-orientadoras

• TAM desempeñan un papel fundamental en la progresión, difusión y crecimiento tumoral ,

mediante la producción de moléculas proangiogénicas, factor de crecimiento endotelial vascular,
IL-8 , fibroblastos y factor de crecimiento

• Una alta tasa de TAM se relacionan con mal pronóstico y estudios recientes indican que se
correlacionan con el proceso metastásico de tumores.
• En éste estudio se utilizó una técnica con doble inmunohistoquímica, usando marcadores
para células M1 Y M2

• Macrófagos teñidos CD68 positivos han sido reportados relativamente inespecíficos para
melanoma, linfoma y angiosarcoma

• Otros estudios aportan que los macrófagos CD68 positivos se correlacionaron con mal
pronóstico en el glioma

• CD163 tiene función antiinflamatoria y su nivel de expresión es mucho mayor en TAM que en
monocitos

• Los estudios han reportado que los macrófagos CD163 positivos intratumorales se
correlacionan con mal pronóstico en una variedad de tumores (incluyendo melanoma y
leiomiosarcoma)

• Se ha demostrado células CD163 positivo en piel lesional de pacientes con dermatitis

atópica y psoriasis.
• Otros estudios aportan que CD163 es un marcador mas abundante en TAM, en comparación
con CD68

• Harris et al, observaron que el número de células CD163 positivas fueron inferiores a los de
las células CD68 positivas en el tejido tumoral en pacientes con linfoma de Hodgkin

• En consecuencia, CD163 no puede ser un marcador específico de macrófagos M2 en la piel,

sin embargo , actualmente es un marcador mas sensible y útil que CD68

• El CD206 es un receptor específico de macrófagos M2

• Estudios recientes aportan que la expresión de células CD206, y CD163 está aumentada
en el microambiente tumoral metastásico hepático
• Los macrófagos M1 secretan altos niveles de iNOS (óxido nítrico sintetasa inducible)

• Un estudio demostró que un bajo nivel de secreción de iNOS y un alto nivel de expresión de
CD163 se asociaron con tumores renales en etapa avanzada

• Otro estudio aportó que altos niveles de secreción iNOS y alto nivel de expresión de CD163
aumenta la supervivencia en pacientes con cáncer colorrectal

• Los datos de inmunohistoquímica para la identificación de M1 y M2, parece ser conflictivo

• En consecuencia, se realizó doble inmunohistoquímica para cada tipo de los macrófagos, a

fin de reducir la tasa de error durante el examen microscópico para la detección dérmica de
macrófagos M1 y M2.
• Se encontró que el número de macrófagos M1 era significativamente menor en el tejido tumoral
de pacientes con MF después del tratamiento, también hubo reducción del número de
macrófagos M2 (no fue significativo)

• Sugaya et al, demostraron que el número de células CD163 y CD68 positivas disminuyeron
después del tratamiento con corticosteroides tópicos y luz ultravioleta

• Un mayor número de células CD163 positivas se correlacionan con peor pronóstico

• El número de macrófagos M1 y M2 disminuyeron después del tratamiento (los macrófagos M1

muestran mayor disminución)

• Las diferencias en el número de células M1 y M2 no se vieron afectados por el tipo de lesión.

• Estos resultados indican el impacto de las funciones inmunoreguladoras de los macrófagos en
la etiopatogenia de micosis fungoide

• Limitación del estudio

• Considerar solo CD163 + y CD206 + como los macrófagos M2 , a pesar de que células CD68
e iNOS, también pueden expresar macrófagos M2

• Sin embargo, CD68 no es suficiente marcador para los macrófagos, ya que también puede ser
encontrado en los neutrófilos , basófilos, linfocitos, células de Langerhans y los precursores
mieloides

• La elección de doble tinción no afectó los resultados , ya que se detectaron células M2 más
específicas con tinción CD163 y CD206.
Conclusión

• El número de macrófagos se redujo después del tratamiento en pacientes con micosis

fungoide

• Esto puede ser atribuible a la reducción de actividad tumoral por el tratamiento y promueve
la explicación de la desaparición de señales que conducen a la diferenciación de los
macrófagos M1 en el microambiente tumoral.