CINÉTICA ENZIMÁTICA

E + S SE E + P
• Proteínas con actividad catalítica de los seres vivos.
• Unidades del Metabolismo
• Regulan la vel. de las reac. quím. espontáneas (DG-).
• No promueven reacciones no-espontáneas (DG +).
• Incrementan la Vel. De reacción 103 a 1012 veces sin
afectar el sentido de la reacción.
• No forman parte del producto de la reacción.
PROPIEDADES GENERALES
• AUMENTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN
• De 106 to 1012 veces vs sin enzima.
• Aún más rápido que los catalizadores químicos.

• CONDICIONES DE REACCIÓN
• Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)
• pH neutro (5-9), la mayoría 6.5 – 7.5
• Presión atmosférica normal

• CAPACIDAD DE REGULACIÓN
• Por concentración de sustrato
• Por concentración de enzima
• Por inhibidores competitivos (semejantes al sustrato)
• Por inhibidores no competitivos (modificación covalente de la enzima)
• Por regulación alostérica

• ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIÓN

• Interacción estereoespecífica con el sustrato
• No hay productos colaterales
 ALTA
ESPECIFICIDAD
DE REACCIÓN
INTERACCIÓN
ESTEREO
ESPECÍFICA
CON SU
SUSTRATO
 Los Substratos
se acercan a la Enzima
(sitio Activo)

Substratos

HO-

H-

Enzima
Los reactivos
interaccionan
con la enzima
(sitio activo)
 Cambia la

configuración de la

enzima
 Substrato
de glucosa

Sitio de
enlace

La unión del sustrato produce un cambio conformacional

de la enzima hexoquinasa (cinasa), la cual es monomérica.
Se realiza la
reacción
catalítica
 Leonor Michelis y Maud Menten (1913)
Concent.

Tiempo
ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN

Vo = V max [S]
Km + [S]
Cinética enzimática en función de la
concentración de sustrato
Vmax

KM
 Km de algunas enzimas
ENZIMA SUSTRATO Km (mM)
Catalasa H2O2 25.0
Hexoquinasa ATP 0.4
D-Glucosa 0.05
D-Fructosa 1.5

Anhidrasa carbónica HCO3- 9.0

Quimotripsina Gliciltirosinilglicina 108.0
N-Benzoiltirosinamida 2.5
-Galactosidasa D-Lactosa 4.0
Treonina deshidrogenasa L-Treonina 5.0
La KM es un parámetro de
Actividad Enzimática

• La KM es inversamente proporcional con la

actividad de la enzima.

• Valor de KM grande, baja actividad

• Valor de KM pequeño, alta activida

Enzimas: pueden catalizar reacciones donde hay 2 S =
Hexocinasa
ATP + Glucosa  ADP + 6-fosfato de glucosa

2 Rutas

•Desplazamiento Simple, los 2 S se unen a la E

A + B + E  EAB  C + D
•Doble desplazamiento o ping-pong

A + B + E  AE  BE + C
D
Determinación Cuantitativa de la Cinética Enzimática

1. La reacción global

2. Procedimeinto analítico para determinar elS que

desaparece o el P que aparece

3. Sí el E requiere Cofactores (iónes o coenzimas)

4. La dependencia de la actividad enzimática con la

[S] o se la KM del S.

5. El pH óptimo

6. Un intervalo de temperatura en la que la E es

estable y muestra actividad elevada.
Actividad enzimática y variación del pH
 Enzima pH óptimo
Pepsina 1.5
Vo Tripsina 7.7
Catalasa 7.6
Arginasa 9.7
Fumarasa 7.8
1 3 7 11 14 Ribonucleasa 7.8
pH

Vo Vo Vo

4 37 85
10 50 100 10 30 50 70 100
Temperatura oC)
Coenzima Tiempo (min)
1.0 Unidad de Actividad Enzimática (U):

La cantidad que transforma 1.0 mmol (10-6 M) de S /min,

a 25 0C, en las condiciones de medida óptima.

Actividad específica:
Es el no. de U de una E / mg de proteína.
Es decir: una medida de la pureza de la E.
Al purificarla, el valor llega a un máximo y es estable.

Número de recambio
No. de moléculas de S transformadas /unidad de tiempo,
por una molécula de E ( o por un solo sitio catalítico)

Enzima No. de Recambio

Anhidrasa carbónica 36 000 000
B-Amilasa 1 000 000
B-Galactosidasa 12 000
Fosfoglucomutasa 1 240
¿Vmax?

¿KM?
Transformación de los Dobles Recíprocos
(Lineweaver-Burk)

pendiente
Gráfica de Eadie-Hofstee

Vmax

Vo

V max
KM

Vo
[S]
Cuando:

Vo= Vmax Todos los sitios activos están

ocupados y no hay moléculas de E libre.

KM= [S] Sí... ½ Vmax

KM representa la cantidad de sustrato

necesaria para fijarse a la mitad de la E
disponible y producir la mitad de la Vmax

KM representa la concentración del sustrato en

una célula
Inhibidores

Reactivos químicos específicos que pueden

inhibir a la mayor parte de las enzimas.

Irreversibles
INHIBIDORES
Reversibles
Inhibidor Irreversible

• Inhibición permanente
• Unión irreversible por medio de enlaces covalentes.
• Modificaciones químicas de los gps. catalíticos.
• Modificada la enzima, está siempre inhibida.

Para distinguirlo de los reversible se someten a

diálisis y si no se separan enzima e inhibidor, éste es
permanente.
Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo
(DFP)

Acetilcolina

Acetilcolinesterasa

Acetato + Colina
Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo
(DFP)
Acetilcolinesterasa

Tripsina

Elastasa

Fosfoglucomutasa

Cocoonasa (larvas de
gusanos de seda

Malatión
Fluorofosfato de diisopropilo
Serina
(DFP)

Iodoacetamida Cisteína
Histidina
Inhibidor Reversible
• La unión del inhibidor y la enzima es
reversible.
• Al quitar el inhibidor del medio, se recupera la
actividad.

Hay 3 tipos:
Competitiva
No Competitiva
Acompetitiva (Alostérica)
Antibióticos
Insecticidas
Hervicidas
Inhibición
Venenos enzimática Dolor
Diferentes Medicamentos Inflamación
Infecciones virales
Cáncer
Inhibición Competitiva
Vmax igual
KM diferente
Inhibidores Competitivos

Malonato Deshidrogenasa del ácido succínico

Sulfas Infecciones microbianas

Antihipertensores: Captopril y Enalopril

Alopurinol Controla la gota

Fluoruracilo Cáncer
Inhibición No Competitiva
El inhibidor NO se une al sitio activo

NO se puede revertir con un exceso de sustrato

Vmax diferente
KM igual
 Cinéticas de Inhibición
Competitivo
Vmax igual
1 KM diferente
V
No competitivo
Vmax diferente
KM igual No inhibitor

0 1/[S]
Inhibición acompetitiva
El inhibidor se une a una SUBUNIDAD reguladora

La subunidad catalítica
une al sustrato y
cataliza la reacción