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de los suelos
Microbio
Microbios aerobios
anaerobios
Cuenta de
Hongos totales Bacterias totales Bacterias
microorganismos BACTERIAS
por dilución en por dilución en anaerobias sulfato
placa placa viables por FERMENTATIVAS
reductoras
dilución en placa
Cuenta de microorganismos viables por dilución en placa
Introducción
Procedimiento
Interpretación de resultados
Contar solo aquellas cajas que contengan de 30 a 300 colonias
Donde:
UFC/ g s. s. = unidades formadoras de colonias / g de suelo seco.
NC= número de colonias en una caja.
FD = factor de dilución que corresponde a la dilución de donde se tomó la muestra
con la que se inocula la caja (10-2 a 10-10).
V= volumen inoculado en la caja = 0.1 ml.
P = peso de la muestra húmeda = 1 g.
FH = factor de corrección de humedad (1-(%humedad/100)).
Bacterias totales por dilución en placa
Introducción
Material y equipo
Soluciones y reactivos
Esterilizar el Una vez
medio de cultivo esterilizado el
a 15 lb, 121°C medio de
durante 15 cultivo dejarlo
minutos. enfriar a 50°C
aprox.
Preparar la muestra
de suelo y
diluciones, e
inocular cada caja
2) Con la siguiente ecuación calcular las UFC/g s.s. UFC/g s.s. = (NC
* 1/FD * 1/ V) / (P * FH).
Donde:
UFC/ g s. s. = unidades formadoras de colonias / g de suelo seco.
NC = número de colonias en una caja.
FD = factor de dilución que corresponde a la dilución de donde se
tomó la muestra con la que se inocula la caja (10-2 a 10-10).
V= volumen inoculado en la caja = 0.1 ml.
P = peso de la muestra húmeda = 1 g.
FH = factor de corrección de humedad (1-(%humedad/100)).
Método de NMP para la cuantificación de
microorganismos anaerobios en suelos
La técnica del numero mas probable es muy adecuado para determinar
bacterias anaerobias, porque permite mantener un ambiente anaerobio
dentro de los tubos, sin necesitar de sistemas anaerobios más complejos
como cámaras o jarras anaerobias.
9 ml de
b) Adición de sustratos y • Agregar 8.5 g de NaCl
cultivo
aceptores de electrones. • 0.5 g de cisteína-HCl
base • 1.0 ml de solución de
resarzurina
Tubo Hungate En 1L de agua destilada
Se retirar el matraz de la
parrilla antes de que el nivel de Se agrega 0.4 ml
la solución llegue hasta la de KOH 1N ; la
marca, se enfria con N2 para tonalidad de la
Ajustar el pH a
mantener las condiciones solución se
7 a la solución
anóxicas. tornará de color
salina a
azul oscuro a
temperatura
guinda.
• Adicionar 9.0 ml de solución ambiente
fisiológica salina anóxica
• Tapar el tubo con el septo de hule
• Colocar la tapa de rosca horadada
• Esterilizar los tubos en autoclave
durante 20 minutos a 121°C a 15
lb/pulg2 de presión.
d) Inoculación.
La temperatura y el tiempo de
• Se utiliza como incubación dependerá de las
inoculo las últimas condiciones de crecimiento
tres diluciones específicas de los
preparadas microorganismos por evaluar.
4 3
Dilucion 10 10 10 8
Respuesta +++ +-+ --+
Valor 3 2 1
3.
2. La fuente de
carbono se
adiciona a los
tubos con 9ml de
medio de cultivo
base y azul de
bromito
B) Condiciones de cultivo.