Cinética de crecimiento

Método Directo. Recuento de totales

por hemocitómetro
Método indirecto-
(Neubauer)
Recuento en placa

P = 0,02 mm; A= 1 mm2

25 cuadrados grandes
V = 0,02 mmm3 x 50 = 1 mm3
N (céls/ml) = X x (D) x 25 x 50 x 1000
X (recuentos); D: dilución

- células viables
- tiempo y condiciones de incubación
– método rápido
[24- 48 horas (37ºC)]
– no distingue células vivas y muertas
-límite de detección 1-10 ufc/ml
– baja sensibilidad: límite de detección
-Rango de sensibilidad: 30-300 colonias
alto (106cél/mL)
 Medición por Turbidimetría (Masa celular)

Ley de Lambert-Beer
A = log10 (I0/I)
A= ε l c

I0: Intensidad de luz

incidente
I: intensidad de luz
transmitida
ε : Coeficiente de absorción
molar (cm-1 M-1 )
ESPECTROFOTÓMETRO: hace pasar luz (λ definida)
c: Concentración (M) sobre una suspensión celular y detecta la cantidad de
luz transmitida (no dispersada) ( I)
l: anchura de banda (cm)
Incorpora un prisma o red de difracción que genera luz
incidente (ilumina la muestra9 (I0), a la λ escogida.
Las lecturas se expresan como unidades de densidad
óptica (O.D.) para una λ determinada
QUIMIOSTATO
Cinética y parámetros definitorios de un cultivo continuo

D (0-1) = Tasa de flujo = F

Volumen V
A B
Regulación de la expresión
génica mediante
“Quorum sensing”
en bacterias

(A) Baja densidad celular, no hay producción de

autoinductor (azul) ni liberación de la sustancia
(roja). El proceso requiere alta densidad celular
(B)
Gram (-). Acil-homoserina lactona (HSL). Regulación:

•Producción de bioluminiscencia (Vibrio fischeri)

•Producción de antibióticos (Erwinia sp y Pseudomonas sp)
•Formación de biofilms (biopelículas) (Pseudomonas sp)
•Transferencia de material genético (conjugación) (Agrobacterium)

La formación de “biofilms” es un elemento de virulencia

 Efecto de la temperatura
sobre el crecimiento
microbiano

Clasificación de los
microorganismos en
función de sus
temperaturas
cardinales
• Psicrófilos - rango: < 0-20°C, óptimo < 15oC
– organismos marinos, algas: Chlamydomonas nivalis (nieve
rosada), bacterias: Pseudomonas, Flavobacterium
– membrana contiene alto % de ácidos grasos insaturados
• Psicrótrofos o Psicrófilos facultativos
- rango: 0-35°C, óptimo 20-30oC
– Pseudomonas - crecen en el refrigerador
• Mesófilos - rango: 15-45° C, óptimo: 30-40°C
– la mayoría de los microorganismos (del suelo, aguas, patógenos)
• Termófilos - rango: 40-70°C, óptimo de 55-65oC
– membrana contiene alto % de ácidos grasos saturados
– enzimas estables al calor
– Bacillus stearothermophilus, organismos de compostaje
• Hipertermófilos - rango: 80-113°C, óptimo > 90oC
– Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)
aw = Ps / Po. Varía entre 0 y 1 Humedad relativa (H.R.) = aw x 100.
Ej.: Suelo agrícola (0.9-1.0)/ Harinas (0.7)/ Fiambres (0.85).
Según su capacidad para crecer con baja aw, los microorganismos se clasifican en:
-Osmófilos: Crecen en ambientes con alta [azúcares] (Saccharomyces cerevisiae, S. rouxii)
Xerófilos: crecen ambientes muy secos. No pueden crecer en medios con alta aw (levaduras
xerófilas: Trichosporonoides; bacterias: Metalogenium)
Halófilos: viven adaptados en ambientes salinos, necesitando altas [NaCl] para crecer (bacterias
marinas, Dunaliella (alga)). Distinguir: Halotolerantes (soportan cambios de salinidad) y Halófilos
extremos ([NaCl] a saturación; Halobacterium (arquea))
 pH
El pH es la acidez o alcalinidad de una
solución, medida por el log 1/(H+)
Clasificación de los microorganismos según
su pH óptimo
Neutrófilo: pH óptimo 7 - Ej.: bacterias
patógenas humanas.
Acidófilo: pH óptimo  7 - Ej.: muchas
arqueas (Sulfolobus, Ferroplasma) y hongos.
Basófilo: pH óptimo  7 - Suelos y aguas
ricas en carbonatos
 Oxígeno
Clasificación de los microorganismos según
el efecto del oxígeno:
Aerobios
obligados: requieren oxígeno (21% o más)
Ej. Bacillus, hongos, (pluricelulares), etc.
microaerofílicos: lo requieren pero a niveles menores que el
atmosférico (2-10%)
Ej. Azospirillum
Anaerobios
facultativos: no requieren oxígeno para crecer, pero su desarrollo es
mejor con oxígeno (respiración aerobia)
Ej. Levaduras, Escherichia coli
aerotolerantes: no son sensibles al oxígeno (crecen en ausencia o
presencia de oxígeno).
Ej. Enterococcus faecalis, Sreptococcus spp.
.
obligados: no toleran el oxígeno, muere en su presencia
Ej. Methanobacterium, Clostridium
 Cultivos en anaerobiosis
•tubos con medio de cultivo llenos por completo.
•medios con sustancias que reaccionan con el oxígeno y lo excluyen.
•dispositivo especial (cámara anaeróbica)
•cajas o tubos incubados en recipientes con granos germinados (cebada,
centeno)
 ESPECIES DE OXÍGENO ACTIVADO (ROS)
e- e- e- e-

O2 O2·- H2O2 ·OH H2 O

H2 O

Aparecen a consecuencia del metabolismo celular oxidativo o de

agentes externos
Actúan sobre proteínas, lípidos y ADN

O2·- Reactividad limitada: toxicidad asociada a la

reacción:
Reacción de Haber-Weiss
O2·- + H2O2 O2 + ·OH + OH- catalizada por metales

·OH Altamente tóxico, fundamentalmente sobre

membranas y daños al ADN
 Oxidante débil: forma parcialmente reducida del
H2O2 O2 , no radical
Formación por: desproporcionamiento espontáneo
del O2·-
SOD: 2 O2·- + 2H+ H2O2+O2
Reducción divalente del O2

1O No radical
2
Formación en reacciones de fotosensibilización

Fuentes de ROS: Células fagocitarias del sistema inmune de los

mamíferos, demostrando que la función de las ROS es la destrucción
de los patógenos
SISTEMAS ANTIOXIDANTES ENZIMÁTICOS
CATALASA

CATALASA
2 H2O2 2 H2O + O2

SUPERÓXIDO
DISMUTASA

O2- + O2- + 2H+ H2 O 2 + O 2

PEROXIDASA

H2O2 + NADH + H+ 2 H2O + NAD+