CONTROL MICROBIANO

Esterilización: eliminación o muerte de todos los microorganismos que

contiene un objeto o sustancia.

Bactericida: Agentes que destruyen y matan a las bacterias

Bacteriostático: Agentes que inhiben el crecimiento de las bacterias

Desinfectante: agente que elimina la carga microbiana total en superficies

inanimadas tales como mesadas de trabajo.

 Antiséptico: agente que controla y reduce la presencia de

microorganismos potencialmente patógenos sobre piel y/o mucosas
 Esterilización

Criterio de muerte para un microorganismo

Perdida irreversible de su capacidad de

reproducción
 Cinética de Muerte de un MO
La muerte de microorganismos como consecuencia de un
tratamiento a altas temperaturas sigue una cinética
exponencial.

Nº ufc

dN
= - K´N
dt

tiempo
 Agentes Físicos

•CALOR

•RADIACIONES

•FILTRACIÓN
 Calor
• Calor húmedo

Calor seco
•
Ambos pueden ser
utilizados en procesos de
esterilización
 Calor húmedo
PROCESOS

• Esterilización:
 Vapor saturado a presiones mayores que la atmosférica
 Tindalización (fraccionada por vapor)
• Pasteurización
• UHT

MECANISMOS DE ACCIÓN

• Desnaturalización de proteínas
• Destrucción de ácidos nucleicos
 Pasteurización

•LHT (low temperature holding)

30 minutos a 62.8ºC

•HTST (high temperature short time)

15 segundos a 71.6ºC Louis Pasteur

•Solo destruye patógenos (Coxiella burnetti, Mycobacterium

tuberculosis, etc.) y reduce flora de deterioro.

NO ES UN PROCESO DE ESTERILIZACIÓN

•Usos: leche, lácteos, jugos de fruta

 UHT (Ultra high temperature)

• 140ºC-150ºC durante pocos segundos

• Proceso continuo

• Necesita envasado aséptico

• Si es un proceso de esterilización
 Tindalización
•100 ºC 30 min, 3 días sucesivos

•Proceso discontinuo con períodos de incubación intercalados

•Usos: esterilización de productos de baja resistencia térmica,

cuando no existe otra opción

John Tyndall
Vapor saturado a presiones mayores que
la atmosférica

• Condiciones: Vapor saturado a temperaturas mayores de

100ºC
(PRECAUCIÓN: eliminación total del aire)

• Equipo: Autoclave

• Alcance: Se puede conseguir esterilización

• Usos: Esterilización de materiales y productos termoestables

( salvo productos oleosos y polvos). Descontaminación de
desechos biológicos.
Autoclave
 Autoclave

Condiciones :
• 121ºC durante 15 minutos, con cargas iniciales bajas
• 121ºC durante 30 minutos, con cargas iniciales altas

Indicadores:
• Físicos: Temperatura y/o presión
• Químicos
• Indicador biológico: Geobacillus stearotermophilus
(D 121ºC=1.5 minutos)
Tamaño del inóculo: 104 esporas
 Perfil de temperatura de un proceso
de esterilización por calor húmedo

120
Temperatura ºC

110
1 2 3
100

Tiempo (min.)
15

Etapa de calentamiento Etapa de Etapa de enfriamiento

mantenimiento
 Calor Seco

•Mecanismo de acción: Procesos de oxidación

•Controles de proceso de esterilización

Indicadores físicos y químicos

Indicador biológico esporas de Bacillus subtilis var. niger

(D 160ºC = 0.3 a 1.8 min, Z=20ºC, tamaño del inóculo: 105
esporas)
 Calor Seco
Aire caliente:

Equipo:Hornos eléctricos
Alcance: Se consigue esterilización (170ºC, 60 minutos o 160ºC, 120
minutos)
Usos:

a) Esterilización de:

• Materiales resistentes al calor

• Sustancias no miscibles en agua (inyectables oleosos, siliconas,
vaselina líquida)
• Polvos

b) Despirogenizacion (250ºC 45 minutos o 180ºC 4hs, o 650 1 min)

• Incineración:
Destrucción de material
contaminado

Flameado :
Desinfección
 Resistencia a calor

RESISTENCIA
 Priones +
 Endosporas bacterianas
 Mycobacteria
 Virus sin envoltura lipídica
 Hongos
_
 Bacterias
 Virus con envoltura lipídica
 Esterilización por filtración
La esterilización por filtración se logra por el paso de un líquido o un gas a
través de un material capaz de retener los microorganismos presentes. La
esterilización por filtración se emplea para materiales sensibles al calor, tales
como ciertos medios de cultivo, azúcares, soluciones de antibióticos y otros
medicamentos, etc.
 FILTRACIÓN DE AIRE

•Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air)

•Remoción de hasta el 99.97% de partículas mayores de 0.3 micrones de
diámetro
•Se usan en cabinas o habitaciones de flujo laminar

CONTROL
•Retención Mínima de un 99.97% de partículas generadas mediante ensayo
DOP(di-octil-nftalato) en caliente con un diámetro de 0.3 micrones.

SE USAN PARA Lograr ambientes con número de partículas controlado:

FLUJOS LAMINARES
AREAS DE TRABAJO
 Cabinas de Flujo Laminar
Vertical

Salida de aire

Protege la
muestra, el
operador y el
Entrada medio ambiente
de aire
 Esterilización por radiaciones

Baja energía

Actividad
antimicrobiana
Alta energía

Dos tipos: Radiaciones ionizantes

Radiaciones no ionizantes
 Radiaciones Ionizantes

Características:
• Alta energía, baja longitud de
onda
• Gran poder de penetración
• Ionizan átomos y moléculas
• No requieren altas temperaturas
Tipos:
• Rayos gamma (60Co o 137Cs)
• Rayos catódicos (electrones
acelerados)
• Partículas beta
Mecanismos de acción:
• Formación de radicales libres
• Daño al ADN, ARN

Resistencia:
Priones
Deinococcus radiodurans
Enterococcus faecium
Esporas bacterianas
Virus D (kGy) m.o.
Hongos 3 Bacillus pumilus
1.2 Staphylococcus spp.
Bacterias (en gral)
Desventajas:
Equipo especial, personal entrenado
No todos los materiales resisten el tratamiento
Reacciones no deseadas en alimentos
 Radiaciones no Ionizantes
Características:
• Baja energía, sin poder ionizante
• Sin poder penetrante
• Máxima eficiencia biocida a 260nm

Mecanismos de acción:
• Sitio blanco ADN NO SE UTILIZAN
• Formación de dímeros de timina PARA
ESTERILIZAR
Usos: SINO PARA:
• Desinfección de superficies
• Desinfección de aire y agua
 ESTERILIZACIÓN
Luz ultravioleta POR RADIACION UV
La radiación ultravioleta producida artificialmente en el espectro de 250 nm ha
sido utilizada por su actividad germicida esterilizante por más de 30 años.
La acción de los rayos ultravioleta se debe a la producción de ozono que logra la
asepsia, ya que este gas conserva su acción inhibidora hasta una dilución de 1 x
40.000. Los aminoácidos aromáticos de las proteínas y las bases puricas y
primidinicas, en particular la timina del DNA, son los principales compuesto
blancos afectados por la acción bactericida de la acción ultravioleta. Evitando la
replicación de las tiras del DNA o causando recombinaciones que terminan en
mutaciones mortales.

Dímeros de timina
 Procesos de esterilización
Agente Condiciones Usos

Calor húmedo 121ºC 15 min. Material termoestable

(o equivalente) Penetrable por vapor

Calor seco 160ºC 2 horas Material termoestable

180ºC 1 hora No penetrable por vapor

Radiaciones 25KGy Material termosensible

ionizantes 45KGy Resistente al tratamiento

Filtración 0.22 micras de poro Material filtrable

 Control de Esterilización

• Controles del proceso

Indicadores: Físicos
Químicos
Biológicos

• Post-proceso: TEST DE ESTERILIDAD !!!

 Controles del proceso

Indicador físico Ej: Temperatura, presión

Indicador químico Cambio de color

Indicador biológico Microorganismo resistente

Agentes químicos de esterilización y
control del crecimiento
Antisépticos
Alcoholes
Iodo
Órgano-Mercuriales
Colorantes

Desinfectantes y/o Esterilizantes

Cloro y Compuestos clorados
Aldehídos
Oxido de Etileno
Compuestos Fenólicos
Alcoholes

•Lesionan la membrana celular de los microorganismos y desnaturalizan

proteínas. Desorganizan la estructura fosfolipídica de la membrana.
•No destruyen esporas y tienen una acción germicida lenta.
•Los alcoholes de cadena corta tienen un efecto nocivo mayor que los de
cadena larga. Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%.
•Los más utilizados son el etanol e isopropílico.

Iodo

•Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de proteínas y ácidos

nucleicos. Inactiva proteínas y enzimas por oxidación de los grupos -SH a S-S,
pudiendo atacar también grupos amino, indoles, etc.
•Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo: yodo molecular 2% y
yoduro de sodio 2% en alcohol), aunque es irritante.
•Es efectivo contra esporas en una concentración de 1600 ppm de
iodo libre
Peróxido de Hidrógeno

•Es un antiséptico débil, con capacidad oxidante y formadora de radicales libres.

•Actualmente, el peróxido de hidrógeno gaseoso se está utilizando como
desinfectante de superficies o decontaminante de gabinetes biológicos debido a
que no posee las propiedades tóxicas y cancerigenas del óxido de etileno y
formaldehído.

Órgano-Mercuriales

•Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las proteínas,
inactivando enzimas.
•Dentro de los mercuriales orgánicos se encuentran el metafen y el mertiolate.
Colorantes

Los derivados del trifenilmetano (violeta de genciana, verde de malaquita y verde

brillante) bloquean la conversión del ácido UDP-acetilmurámico en UDP-
acetilmuramil-péptido.

R = HSO4- Verde Brillante

R = Cl- Verde de Malaquita Violeta de Genciana
Cloro y sus derivados

El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son desinfectantes que actúan sobre
proteínas y ácidos nucleicos de los microorganismos. Oxidan grupos -SH, y
atacan grupos aminos, indoles y al hidroxifenol de la tirosina.
El producto clorado más utilizado en desinfección es el hipoclorito de sodio (agua
lavandina), que es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas, y
además es efectivo en un amplio rango de temperaturas.
La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al ácido hipocloroso
(HClO) y al Cl2 que se forman cuando el hipoclorito es diluido en agua.

El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones concentradas (50-100 g/l

de Cloro activo) y Generalmente, se utilizan soluciones con una concentración
del 0.1-0.5% de Cloro activo.
Su actividad está influida por la presencia de materia orgánica
Aldehídos

•Son agentes alquilantes que actúan sobre proteínas, lo que provoca

modificación irreversible de enzimas e inhibición de la actividad enzimática.
•Se utilizan como desinfectantes y esterilizantes. Destruyen esporas.
•El glutaraldehído es el único esterilizante efectivo en frío.
•El formaldehído como gas se utiliza para descontaminar edificios, ambientes,
etc.
•El formaldehído gaseoso se obtiene por calentamiento del paraformaldehído
tiene la desventaja de ser muy irritante y perder actividad en ambientes
refrigerados.

Glutaraldehido Paraformaldehido Formaldehido

Oxido de Etileno
•Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrógenos lábiles
como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc.
•Es utilizado en la esterilización gaseosa, generalmente en la industria
farmacéutica. Sirve para esterilizar material termosensibles como el
descartable y plástico, equipos electrónicos, bombas cardiorrespiratorias, etc.
Es muy peligroso.
•Es inflamable, explosivo y cancerigeno
Compuestos Fenólicos

•Son desinfectantes que provocan lesiones en la membrana citoplasmática

porque desordenan la disposición de las proteínas y fosfolípidos.
•El fenol no es usado a menudo como desinfectante por su olor desagradable,
por ser muy irritante y por el resido que queda luego de tratar las superficies.
•Los derivados del fenol más utilizados son el hexaclorofeno (compuesto
difenílico) y los cresoles (alquil fenoles). Estos son muy efectivos a bajas
concentraciones contra formas vegetativas de bacterias. No son efectivos
contra esporas.

Coeficiente del fenol